Способ определения содержания плазминогена в плазме крови

Способ определения содержания плазминогена в плазме крови

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к способам определения биологически активных соединений (БАС), предназначено для гематологии, физиологии, биохимии кардиологии. Цель изобретения - повышение точности способа при определении БАС у животных. Для зтого к плаз- -ме крови крысы,.разведенной физиологи ческим раствором в соотношении 1:7- 1:24, добавляют одинаковое количество взятых в равных соотношениях растворов эуглобулиновой фракции, которую выделяют из плазмы крови человека и разводят боратным буфером до 25-75%- ной концентрации, и стрептокиназы в концентрации 150-400 ME. Способ позволяет определить соединение плазминогена у человека и животны {. с S

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1

„.SU„„1386902 (51) 4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 4025196/28-14 (22) 21.02.86 (46) 07.04.88. Бюл. М 13 (71) МГУ им. М.В. Ломоносова (72) Е.Е. Шимонаева и Г,В,Андреенко (533 612 ° 115(088.8) (56) Хватов В.Б., Петренко О.А. Получение специфического субстрата — плаэминогена человека для количественного определения активатора плазминогена, в плазме крови внезапно умерших.

Проблемы гематологии и переливания крови, 1975, Ф 6, с. 57-60, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ

ПЛАЗМИНОГЕНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ (57) Изобретение относится к способам определения биологически активных соединений (БАС), предназначено для гематологии, физиологии, биохимии, кардиологии. Цель изобретения — повы.шение точности способа при определении БАС у животных. Для этого к плазме крови крысы,,разведенной физиоло" гическим раствором в соотношении 1:71:24, добавляют одинаковое количество взятых в равных соотношениях раст« воров эуглобулиновой фракции, которую выделяют из плазмы крови человека и разводят боратным буфером до 25-757ной концентрации, и стрептокиназы в концентрации 150-400 ME. Способ позволяет определить соединение плазминогена у человека и животных.

1386902

Изобретение относится .к способам определения биологически активных соединений и может быть использовано в гематологии, физиологии биохимии, кардиологии.

Целью изобретения является повышение универсальности и точности способа при определении у животных.

К плазме крысы, разведенной физио- 10 логическим раствором в соотношении

1:7-1:24, добавляют одинаковое количество взятых в равных соотношениях растворов эуглобулиновой фракции, которую выделяют из плазмы крови человека известным способом и разводят боратным буфером до 25-75%-ной концентрации, и стрептокиназы в концентрации 150-400 ME.

Пример 1. Плазму крысы раэ- 20 водят физиологическим раствором в соотношении 1:7, т.е. концентрация плазминогена соответствует верхней границе допустимого диапазона, К 0,1 мл разведенной плазмы добавляют 0,05 мл 25 (400 ME) стрептокиназы и 0,05 мл

75%-ной эуглобулиновой фракции иэ плазмй человека, инкубируют 10 мин при комнатной температуре, добавляют

5%-ный раствор казеина, смесь инкубируют 3 ч при 38 С, реакцию останавливают хлорной кислотой, центрифугируют при 12 тыс. об/мин и спектрофо. тометрически определяют продукты расщепления казеина плазмином.уровень .плаэминогена в плазме крыс получают равным 26 КЕ.

Пример 2 Плазмы крысы разводят физиологическим раствором в соотношении 1:24, т.е. концентрация плазминогена соответствует нижней границе допустимого диапазона. К 0,1 мл разведенной плазмы добавляют 0,05 мл (150 NE) стрептокиназы и 0,05 мл

25%.-ной эуглобулиновой фракции иэ плазмы человека, инкубируют 6 мин при комнатном температуре, добавляют

ЗЕ-ный раствор каэеина, смесь инкубируют 1 ч при 36 С, реакцию останавливают хлорной кислотой, центрифугируют 50 при 8 тыс.об/мин и определяют продукты расщепления казеина на спектрофотометре. Уровень плаэминогена получают равным 22 КЕ.

Пример 3, Плазму крысы разводят физиологическим раствОром в ccl отношении 1:19, т.е. концентрация плаэплаэминогена соответствует среднему значения диапазона. К 0,1 мл разведенной плазмы добавляют 0 05 мл (200 МЕ) стрептокиназы и 0,05 мл

50 -ной эуглобулиновой фракции, инкубируют 7 мин при комнатной температуре, добавляют 4 .-ный раствор каэеина, смесь инкубируют 2 ч при 37 С, реакцию останавливают хлорной кислотой, центрифугируют при 10 тыс.об/мин и спектрофотометрически определяют продукты расщепления казеина плазмином. Уровень плазминогена получают равным

27 КЕ, что соответствует. максИмальному значению концентрации плазминогена в плазме крыс.

Повышение точности способа достигается тем, что добавление в пробу, содержащую стандартные количества стрептокиназы, такой же конструкции эуглобулиновой фракции человека приводит к образованию постоянных количеств активатора, а также подбором соответствующего разведения исследуемой плазмы. Это дает возможность получать точные и хорошо воспроизводимые результаты с высокой статистической достоверностью, которые отражают истинное содержание плазминогена в крови.

Повышение универсальности достигается тем, что использование эуглобулиновой фракции человека устраняет видовую специфичность стрептокинаэы и позволяет определять содержание плазминогеиа не только в крови человека, но и в крови целого ряда животных, Это особенно важно для тех видов, у которых резко выражена видовая специфичность и определение содержания плаэминогена со стрептокинаэой практически невозможно.

1?езультаты определения содержания плазминогена в крови человека и животных предложенным способом: человек

17 KE + 0,5; кролик — 19 KE + 0,3; собака — 20 КЕ + 0,3; крыса — 24,5 КЕ +

+0,3; бык - 11 KE 1 0,1, Ф о р м у л а и э о б р е т е н и я

Способ определения содержания плазминогена в плазме крови, заключающийся в обработке разведенной физиологическим раствором плазмы крови растворами стрептокиназы и добавлении казеи:а, инкубации, добавлении хлорной кислоты с последующим спектрофотомет138б902

Составитель Н. Литвиненко

Техред Л.Сердюкова Корректор С. Черни

Редактор О. Юрковецкая

Заказ 1491/43 Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 е рированием надосадочной жидкости,о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения универсальности и точности способа при определении у живот-

5 ных, плазму разводят физиологическим раствором в соотношении 1:7-1:24, добавляют смесь равных количеств 25

75Х-ной эуглобулиновой фракции крови человека и 1 50-400 МЕ стрептокиназы.