Способ определения кетонов в биологическом материале

Способ определения кетонов в биологическом материале

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к гигиене труда и промышленно-санитарной химии, касается определения органических веществ класса кетонов в биологическом материале. Цель изобретения - дополнительное определение в пробах циклогексанона (ЦГ) и метилизобутилкетона (МБК) при одновременном повьшении чувствительности способа. Для этого образцы биологического материала

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

А1 (l9) (И) (51) 4 G 01 N 33/48, 30/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 4070168/28-14 (22) 04.06.86 (46) 15.04.88. Бюл. Н - 14 (71) Московский научно-исследовательский институт гигиены им. Ф.Ф. Эрис-, мана (72) Т.В. Юдина и Л.А. Мошпакова (53) 612. 015 (088.. 8) (56) Методические указания об обнаружении и определении ацетона в трупном материале методом газожидкостной хроматографии. МЗ СССР, Главное уп-. равление лечебно-методической помощи, утв. 04.12.78, с. 4. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЕТОНОВ В

БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ (57) Изобретение относится к гигиене труда и промышленно-санитарной химии, касается определения органических веществ класса кетонов в биологическом материале. Цель изобретения — дополнительное определение в пробах циклогексанона (ЦГ) и метилизобутилкетона .(МБК) при одновременном повышении чувствительности способа. Для этого образцы биологического материала (О, 1 мп сыворотки, 2 мп мочи, гомогенаты 1 r органов или 0,1 r кожи) термостатируют в герметичной емкости при 98 + 4 С в течение 30 мин. Полученную паровую фазу хроматографируют с плазменно-ионизационным детектированием при использовании фазы хроматона N — AW с 157 апиезона 1, при темпео ратуре испарителя 190-210 С, скорости водорода 25-30 мп/мин, воздуха

250/300 мл/мин с последующим количественным анализом кетонов методом абсолютной градуировки. МБК и ЦГ являются исходными продуктами синтеза, обладают способностью накапливаться в крови и оказывать выраженное наркотическое и раздражающее действие на организм, требуя гигиенического нормирования. 1 табл.

1 1388803 2

Изобретение относится к гигиене труда и промышленно--санитарной химии, а именно к методическим аспектам определения органических веществ класса 5 кетонов в биологическом материале.

Цель иэобретепия — дополнительное определение в пробах циклогексанона и метилизобутилкетона при одновременном повышении чувствительности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Проводят хроматографическое определение кетонов — ацетона, метилизо- 15, бутилкетона и циклогексанона в биологическом материале — крови, моче, гомогенатах кожи и органов путем отбора 2 мл мочи, 1,0 мл сыворотки крови, получения 5 мл водного экстракта 20 органа, термостатирования в герметично закрытой емкости при 98 + 4 С в течение 25-30 мин, хроматографировании полученной паровой фазы с пламенно-ионизационным детектированием 25 на колонке 300 х 0„3 см„ заполненной хроматоном И-AN с 157. аппезона 1. при о

У температуре колонки 130 С испаритео

У ля 190-210 С, скорости газа-носителя (азота) 40 мл/мин, водорода 25- 30

30 мл/мин, воздуха 250-300 мл/мин с последующим количественным их анализом методом абсолютной калибровки.

Впервые достигнута возможность количественного раздельного определе- 3 ния 3 кетонов с использованием фазы. хроматона N-АУ с 15Z апиезона L, достигнут предел обнаружения ацетона, равный 0,25 мкг/мл; циклогексанона и метилизобутилкетона. 1,5 мкг/мл. 40

Впервые разработаны условия полуения термодинамического равновесия системы жидкость — пар в стеклянной герметичной емкости объемом 30 мл при термостатировании в течение 25о

30 мин и температуре 98 + 4 С при исследовании малых объемов биологической пробы (1,0 мл сыворотки крови, 2 мл мочи и гомогената органов).

За время анализа,, идентичное известному способу (7 мин), получают количественные параметры не одного ацетона, а 3 кетонов, следовательно, разработано более эффективное решение.

Точность разработанного способа +22,7Х

Пример . Пробу сыворотки крови объемом 1 мл помещают в стеклянную

Емкость на 30 мл, добавляют 1 мл дистиллированной воды. Емкость герметично эавинчивается крышкой с отверстием и силиконовой (самоуплотняющейся) прокладкой, помещается в термостат при 100 С. Туда же помещается шприц для отбора паровой фазы. Через

25 мин 5 мл паровой фазы, взятой из замкнутой емкости над сывороткой, вводят в испаритель хроматографа с пламенно-ионизационным детектированием. Разделение производят на колонке 300 х 0,3 см, заполненной хроматоном N-AW с 15Е апиезона Ь при о температуре колонки 130 С, испарителя 200 С, скорости газа-носителя азота 40 мл/мин, водорода 30 мл/мин, воздуха 300 мл/мин. Концентрацию кетонов в сыворотке крови определяют с помощью градуировочного графика, выражающего зависимость высоты пика от количества компонента (берут за основу сыворотку контрольных животных). Количественному определению любых исследуемых образцов (сыворотки крови, мочи„ паренхиматоэных органов, кожи) предшествует градуировка прибора по аналогичным контроль- ным образцам сред или органов, в которые вводят стандартные растворы, Пределы массового содержания веществ в сыворотке крови при построении градуировочных графиков для ацетона

0,5-25 мкг, циклогексанона и метилизобутилкетона 3-30 мкг. Чувствительность хроматографа при определении кетонов в сыворотке крови (моче, органах) 1 10 А.

Расчет концентраций кетонов ведется по соответствующему графику в пересчете на мг/мл для жидких сред (сыворотка крови, моча), Построение градуировочного графика и анализ проб проводится в абсолютно одинаковых условиях, что позволяет не прибегать к сложным расчетам. Для определения каждой концентрации проводят не менее 5 параллельных измерений, из которых рассчитывают средние значения °

Содержание кетона в сыворотке крови определяют, исходя из концентраций его в пробе, помещенной в замкнутую емкость (30 мл), где созда .тся термодинамическое равновесие между жидкой и газовой фазами, и объема паровой фазы, введенной в испаритель хроматографа (5 мл).

Количество вещества m (мг) в средах, соответствующее измеренному значению высоты пика (h), находят по

1388803

Содержание мг/мл (для сыворотки крови и мочи), мкг/г (для органов и кожи) Органы

Ацетон Циклогекса- Метил" нон изобутилкетон

М

1/ У

Сыворотка крови. 3,4 0,023 О, 021

О, 006

0,065

0,0628

3,1 0,043

1,3 0,0424

3,25 0,0664

Моча

Почки

Печень

1,82

0,9+ 0,1

0,021+0,004 20

0,023+0,007

2,95 0,5

Кожа. Составитель Н. Гуляева .Техред А.Кравчук

Редактор Т. Парфенова

Корректор Л. Пилипенко

Заказ 1576/47 Тираж 847

ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул, Проектная, 4 градуировочным графикам h = f(m). Количество вещества М (мг/мл) в объеме анализируемой пробы находят по формуле где V — - объем анализируемой пробы, мл.

В результате исследований (при нанесении на кожу животных циклогексанона и метилизобутилкетона на уровне порога острого действия) получены следующие средние величины содержания кетонов в образце сыворотки крови по 5 параллельным измерениям мг/мл:

Ацетон

Метилизобутилкетон

Циклогексанон

Предлагаемый способ позволяет определять в сыворотке крови кетоны в пределах: . цетон 0,25-25 мкг/мл, метилизобутипкетон и циклогексанон

1,5-30 мкг/мл.

В таблице представлены данные о среднем содержании кетонов в исследованных средах и органах, полученные 30 при общих режимах термостатирования и хроматографирования (термостатирование при 100 С в течение 30 мин и хроматографирование при температуре колонки 130 С, испарителя 200 С, скорости газов: азота 40, водорода

30, воздуха 300 мл/мин соответственно).

Формула изобретения

Способ определения кетонов в биологическом материале путем получения водного экстракта исследуемого образца, термостатирования, отбора парообразной пробы с последующим гаэожидкостным хроматографированием, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью дополнительного определения циклогексанона и метилизобутилкетона при одновременном повышении чувствительности способа, термостатирование проводят при температуре 98+4 С в течение 25-30 мин, при хроматографировании используют фазу хроматона N-AW с 157 апиезона L при температуре исо парителя 190-210 С и скорости пропускания воздуха 250-300 мл/мин.