Способ определения активности соласодиндегидрогеназы

Способ определения активности соласодиндегидрогеназы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биохимии , касается медицины, биотехнологии , энзимологии, токсикологии. Цель изобретения - повьппение точности способа определения соласодиндегидрогеназы. Для этого исследуемый материал (экстракт) наносят на поверхности столбиков полиакриламидного геля и проводят электрофорез в щелочной системе буферов. Затем гели переносят в пробирки, содержащие 15 мл смеси диметилсульфоксида и хлороформа в соотношении 98:2, в которой растворены: соласодин в концентрации 0,4 мг/ /мл, НАДФ 0,1 мг/мп, феназинметасульфат 0,1 мг/мл, нитротетразолевый синий 0,4 мг/мл. Зона белка, проявляющего соласодиндегидрогеназную активность , проявляется на геле темной о полосой в результате образования формазана. (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) А1 (5D 4 С 01 N 33/Ь8

Ъ (Д

1 и

Ь Я

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К A BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPbITI44 (21 ) 391001? /28-14 (22) 12.06.85 (46) 15.04.88. Бюл. 1Ф 14 (71) Институт молекулярной биологии и биохимии АН КаэССР (72) А.П.Францев, Е.Б.Дериглазова и Ш.К.Мурумбаева (53) 616.07(088.8) (56) Остерман 3I.À. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот.

M. Наука, 1981, с. 102. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

СОЛАСОДИНДЕГИДРОГЕНАЗЫ (57) Изобретение относится к биохимии, касается медицины, биотехнологии, энзимологии, токсикологии.. Цель изобретения — повышение точности способа определения соласодиндегидрогеназы. Для этого исследуемый материал (экстракт) наносят на поверхности столбиков полиакриламидного геля и проводят электрофорез в щелочной системе буферов. Затем гели переносят в пробирки, содержащие 15 мл смеси диметилсульфоксида и хлороформа в соотношении 98:2, в которой растворены: соласодин в концентрации 0,4 мг/

/мл, НАДФ 0,1 мг/мп, феназинметасульфат 0,1 мг/мл, нитротетразолевый синий 0,4 мг/мл. Зона белка, проявляющего соласодиндегидрогеназную активность, проявляется на геле темной полосой в результате образования формазана.

1388811

0,4 мг/мл

Формула изобретения

Составитель И.Емельяненко

Редактор Т.Парфенова Техред A.Êðàâ÷óê Корректор Л.Пилипенко

Заказ 1576/47 Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, 1!осква, Ж-,35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в медицине, биотехнологии, энэимологии, токсикологии.

Целью изобретения является повышение точности способа за счет снижения денатурации фермента, для чего в качестве растворителя компонентов среды используют смесь диметилсульфо- !О

Ксида и хлороформа.

Способ осуществляется следующим образом.

Исследуемый материал (экстракт) аносят на поверхность сголбиков поли.15 вкриламидного геля и проводят элект-! офорез в щелочной системе буферов. о окончании процесса гели извлекают з стеклянных трубок и переносят в . робирки, содержащие 15 мл смеси ди етилсульфоксида и хлороформа в соотношении 98:2, в которой растворены

Соласодин в концентрации 0,4 мг/мл

НАДф О, 1 мг/мл 25

Феназинмета- О, 1 мг/мл сульфат

Нитротетразолиевый синий

1;

Зона белка, проявляющего соласодиндегидрогеназную активность, проявЛяется на геле в виде темной полосы в результате образования фармазана.

Пример 1. 5,0 r биомассы rpu5a Aspergilus ochr. гомогенизируют в ультразвуковом дезинтеграторе УЗДИ-1

0 в 50,0 мл охлажденного до 2-3 С, 0,05 M трис-НС1-буфера рН 7,4 до полного разрушения мицелия гриба. Бес слеточный экстракт получают центрифуФ

Гированием гомогената в угловом роторе центрифуги К-24 при 16000 об./мин в течение 10 мин. Полученную надосадоч" ную жидкость (бесклеточный экстракт) в количестве,00,0 мкл наносят. на поверхность столбиков полиакриламидного геля и проводят электрофорез.

По окончании форетического разделения белков гриба Aspergilus ochr., о чем судят по фронту движения лидирующего красителя (бромфенолового синего), гели извлекают из стеклянных трубок и переносят в пробирки, содержащие

15 мл смеси диметилсульфоксида и хлороформа.в соотношении 98:2, в которой растворены все необходимые для протекания реакции дегидрирования соласодина компоненты, а также реактивы для чисто химического выявления активности тетраэолиевым методом.

При инкубации гелей в темноте при о

30-35 С зона белка, содержащая соласодиндегидрогеназу, выявляется темной зоной формаэана через 20-25 мин.

Применение предлагаемого способа повышает растворимость соласодина, что делает возможным четкую регистрацию активности соласодиндегидрогена-. эы, тем самым значительно повышая точность анализа.

Способ определения активности соласодиндегидрогенаэы путем электрофореза в полиакриламидном геле, предварительно инкубированном в среде, содержащей соласодин, кофермент феназинметасульфат и нитротетразолиевый синий, отличающийся тем, что, с целью повьппения точности способа за счет снижения денатурации фермента, в качестве растворителя компонентов среды используют смесь диметилсульфоксида и хлороформа.