Способ биохимического контроля за структурой популяций рыб

Способ биохимического контроля за структурой популяций рыб

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к ихтиологии и направлено на сохранение рыб и упрощение способа биохимического контроля за структурой популяций рыб. Для этого у исследуемых рыб в -качы стве пробы отбирают слизь с поверхности их тела. Из полученной пробы путем залития ее дистиллированной водой экстрагируют белок. После чего полученную смесь (слизь + вода) подвергают центрифугированию и надосадочную жидкость исследуют методом электрофореза в полиакриламидном геле, выявляя малатдегидрогеназную активность (МДГ) тетразолиевым методом. Полученные таким образом данные позволяют выявить изоферменты МДГ, характеризующие структуру популяции. t

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (51)4А01 К 61 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н A BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (2t) 4119035/28-13 (22) 23.06.86 (46) 0 7. 05. 88. Бюл. № 17 (71) Институт биологии внутренних вод АН СССР (72) Е.В.Кузьмин (53) 639.3.05(088.8) (56) Чихачев А.С., Цветненко Ю.Б.

Сборник научных трудов НИИ озер и речи. рыбного хозяйства, 1983, № 195, с. 54-64. (54) СПОСОБ БИОХИМИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ;

3А СТРУКТУРОЙ ПОПУЛЯЦИЙ РЫБ (57) Изобретение относится к ихтиологии и направлено на сохранение рыб

„.SU 1393375 А1 и упрощение способа биохимического контроля за структурой популяций рыб.

Для этого у исследуемых рыб в каче-. стве пробы отбирают слизь с поверхности их тела. Из полученной пробы путем залития ее дистиллированной водой экстрагируют белок. После чего полученную смесь (слизь + вода) подвергают центрифугированию и надосадочную жидкость исследуют методом электрофореза в полиакриламидном геле, выявляя малатдегидрогеназную активность (ИДГ) тетразолиевым методом.

Полученные таким образом данные позволяют выявить изоферменты МДГ, характеризующие структуру популяции.

1393375

Изобретение относится к способам выявления биохимической разнокачест. венности популяций рыб, может быть использовано в научных целях и в прак-< тическом рыбоводстве, например при изучении редких и исчезающих видов, при подборе пар производителей и т.д.

Целью изобретения является сохра- 10

1 ° некие рыб живыми при отборе проб и упрощение способа.

Использование способа позволяет не травмировать рыб при отборе проб, а также получить ее/прижизненные био- 15 химические характеристики, необходи мые для изучения структуры популяций.

Способ дает возможность изучить биохимические характеристики одной и той же рыбы на.разных этапах онтоге- 20 неза и в разном физиологическом состоянии, осуществить подбор пар производителей с соотве гствующими ха рактеристиками, не травмируя рыб, что особенно важно для рыбоводной пракТики.

Способ осуществляется следующим образом.

Пойманную рыбу в районе спинного . плавника протирают ватным тампоном„

1 смоченным в дистиллированной воде, 1 ,затем тупым скальпелем соскабливают (,пробу слизи (50 мг) и помещают в по1

1 лиэтиленовую центрифужную пробирку, в которую заливают дистиллированную воду (0,5 мп). Экстрагируют сутки при 4-6 С при постоянном перемешиваиии, после чего пробу центрифугируют и иадосадочную жидкость используют для электрофоретического анализа. Элект- 40

1 рофоретическое фракционирование белков проводят в 7Х-ном полиакриламидном геле, в щелочной системе буферов с рН 8,9. Выявление ферментативиой активности малатдегидрогеназы (ИДГ) осуществляют в инкубационном растворе следующего состава: 1 объем

1М малата натрия + 1 объем 0,2 И фосфатного буфера, рН 7,4 + 1 объем

0 1Х-ного раствора нитросинего тетразолия + 1 объем О, 1%-ного раствора никотинадениндинуклеотида + 1 объем 0,005 И хлористого магния +

1 объем хлористого натрия + О, 1 мг/мл феназинметасульфата. Выявление о производится в термостате при 37 С

B течение 2 ч.

Существенное отличие слизи от об;разцов,которые ранее использовались для анализа, состоит в том,,что она не является какой-либо тканью, а представляетт собой продукт жизнедеятельности организма. Однако слизь обладает характеристиками, позволяющими использовать ее для проведения биохимического контроля за структурой популяций рыб °

Пример. Рыбу в районе спинного плавника протирают ватным тампоном, смоченным в, дистиллированной воде.

Затем тупым скальпелем соскабливают пробу слизи (50 мг) и помещают в полиэтиленовую центрифужную пробирку, в которую заливают дистиллированную воду (0,5 мл). Пробу экстрагируют в течение суток в термостате при 4-6 С при постоянном перемешивании, после чего ее центрифугируют и надосадочную жидкость используют для электрофоретического анализа. Электрофоретическоефракционирование белков проводят в 7%-ном полиакриламидном геле, в щелочной системе буферов с рН 8,9. Выявление ферментативной активности

ИДГ осуществляют в инкубационном раст- . воре следующего состава: 1 объем 1 И малата натрия + 1 объем 0,2 И фосфатного буфера, рН 7,4 + 1 обьем О, 1.%-ного раствора нитросинего тетразолия +

+ 1 объем 0,1%-ного раствора никотинадениндинуклеотида + 1 объем 0,005 M хлористого магния + 1 объем хлористого натрия О, 1 мг/мл феназинметасульфата. Выявление ферментативной активности МПГ производят в термостате при 37"С в течение 2 ч.

Как в мышцах, так и в слизи выявляются одни и те же изоферменты

ИДТ, различающиеся лишь по интенсивности их окрашивания.

При окрашивании экстрактов слизи после фракционирования красителем на общие белки (Кумасси голубой

Р-250 в концентрации 0,25%) на протеинограммах можно обнаружить более полутора десятков компонентов.

Таким образом, помимо фракций, обладающих малатдегидрогеназной активностью и составляющих лишь небольшую часть белков слизи, имеется еще целый ряд фракций, которые можно использовать для изучения популяционной структуры рыб.

Формула и з о б р е т е н и я

Способ биохимического контроля за структурой популяций рыб, включаюСоставитель Т.Краскова

Техред М.Моргентал Корректор С.Черни

Редактор А.Шандор, Заказ 1898/3

Тираж 519 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная,. 4 з 1393375

4 щий отбор у исследуемых рыб пробы, популяций рыб по полученным данным, экстрагирование из нее белка, центри- о т л.и ч а ю шийся тем, что, фугирование экстракта с получением с целью сохранения рыб живьии при-отнадосадочной жидкости, фракционирова боре проб и упрощения способа, в канне растворенных в ней белков мето5 честве исследуемой пробы используют дом электрофореза в полиакриламидном слизь, которую берут с поверхности геле и выявление малатдегидрогеназ- кожи рыб, а для экстрагированИя белной активности тетразолиевым мето- ка слизь заливают дистийлированной дом с последующей оценкой структуры 10 водой.