Способ определения криорезистентности эритроцитов

Способ определения криорезистентности эритроцитов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биологии и медицине, может найти применение при низкотемпературном консервировании эритроцитов. Цель изобретения - упрощение и ускорение способа. Для этого эритроциты крови разводят в соотношении 1:1000 физиологическим р-ром. Полученную суспензию смешивают с 0,004 н. НС1 в кювете фотоэлектроколориметра. Каждые 30 с отсчитывают показатели по шкале экстинкции. Измерения ведут до получения двух совпадающих показаний. На основании показателей экстинкции производят расчет количества эритроцитов (%), гемолизированных между двумя отсчетами времени. Затем рассчитывают среднее время гемолиза эритроцитов в 0,004 н. НС1, при его значении 5,0 - 5,6 мин определяют максимум криорезистентности.

C0IO3 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1 (19) (И) (5l)4 G 01 N 33 48 с

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOIVIY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3993779/28-14 (22) 17. 12. 86 (46) 07.05,88. Бюл. Р 17 (71) Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР (72) Л.К.Стусь, Е.А.Гордиенко и В.И.Куракса (53) 612.015 (088.8) (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КРИОРЕЗИСТЕНТНОСТИ ЗРИТРОЦИТОВ (57) Изобретение относится к биологии и медицине, может найти применение при низкотемпературном консервировании эритроцитов. Цель изобретения — упрощение и ускорение способа.

Для этого эритроциты крови разводят в соотношении 1: 1000 физиологическим р-ром. Полученную суспензию смешивают с 0,004 н. НС1 в кювете фотоэлектроколориметра. Каждые 30 с отсчитывают показатели по шкале экстинкции.

Измерения ведут до поЛучения двух совпадающих показаний. На основании показателей экстинкции производят расчет количества эритроцитов {Ж), гемолизированных между двумя отсчетами времени. Затем рассчитывают среднее время гемолиза эритроцитов в

0,004 н. НС1, при его значении 5,0—

5,6 мин определяют максимум криорезистентности.

1394129

Изобретение относится к биологии ,и медицине и может быть использовано при низкотемпературном консервировании эритроцитов.

Целью изобретения является упрощение и ускорение способа оценки криорезистентности эритроцитов.

Способ осуществляется следующим образом.

Эритроциты крови разводят в соот: ношении 1: 1000 физиологическим раст, вором. 2 мл полученной суспензии ,; эритроцитов смешивают с 2 мл 0,004 н, . НС1 в кювете фотоэлектроколориметра.

Каждые 30 с производят отсчет показаний по шкале экстинкции. Измерения ведут до получения двух совпадающих показаний. На основании полученных значений экстинкции производят рас- 20 чет количества эритроцитов (), гемолизированных между двумя отсчетами времени по формуле — 100%, (1) 25

1 с1Н

HО H dt где Но — начальное значение экстинкции, Н„ - конечное значение экстинкции;

dH — изменение экстинкции за 30 с, dt

Среднее время гемолиза эритроцитов в 0,004 í. НС1 рассчитывали по формуле 35

dN — йс, (2) N dt

9 оп где t — - время, отсчитанное от начала

rемолиэа, мин; 40

N,„„ — исходное количество эритроцитов в единице объема пробы (принимается за 1007.) ;

dN — количество эритроцитов, гемолизированных за время dt (7). g5

Пример 1. Из флакона с кровью, взятой на "глюгицире", отбирают эритроциты, разводят их в соотношении 1:1000 физиологическим раствором.

Затем в кювете фотоэлектроколориметра

ФЭК-56M смешивают 2 мл суспензии эритроцитов с 2 мл 0,004 н. НС1. Каждые

30 с производят отсчет показаний при" бора по шкале экстинкции. Затем вычисляют среднее время гемолиза в растворе соляной кислоты

j1 мин (-1, 57.)+1, 5 мин

1007 (-1953)+2 мин 07+2,5 мин 1,57 +

+ 3,0 мин.1,57+3,5 мин 10,37. + .

+4 мин . 17, б +4, 5 мин 16, 97+5, 0 мин 9

15,47+5,5 мин-13, 2К+690 мин 10,37+

+6,5 мин 8,8 +7,0 мин ° 5,17+7,5 мин 292%+8 мин 07) = 5,07 мин.

Ошибка измерения =5% 9 т. е.

5,07 мин + 0,25 мин.

Эритроциты замораживают в контейнерах объемом 10 мл под защитой ограждающего раствора ЦОЛИПК-11 °

После отделения плазмы к эритроцитам добавляют раствор ЦОЛИПК-11 .

После 15-минутной экспозиции эритроцитов с ограждающим раствором контейнер с эритроцитами погружают в ванну с жидким азотом. Оттаивание эритроцитов производят в водяной бане (45 С).

Потери гемоглобина эритроцитами после замораживания-отогрева составляют 5,6+0,67, что свидетельствует о высокой криорезистентности эритроцитов.

Пример 2. Эритроциты донора исследуют аналогично примеру 1. Определяют среднее время кислотного гемолиза эритроцитов t

= — (1, 5 мин ° (-1, 47.) +2, 0 мин х о

09 77+2,5 мин 0,7%+390 мин ° 07 +

+3,5 мин 2, 85Х+490 мин ° 8, б +

+4,5 мин 15%+590 мин-19957+5,5 мин«

«1795%+690 мин ° 13907+695 мин ° 11 8%+

+7,0 мин 9,07+7,5 мин-4,57 j=596 мин.

Ошибка измерения t составляет 5, т,е, t = 5,6 + 0,28 мин.

Для данного значения t = 5,6 +

+ 0,28 мин прогнозируется значение гемолиза (согласно установленной нами зависимости) в пределах от 5 до 8%.

Для подтверждения этого вывода эритроциты донора замораживают под защитой глицерина согласно методике.

Потери гемолиза после замораживания-отогрева составляют 5,8+1,27, что подтверждает предварительный прогноз результата низкотемпературной консервации эритроцитов и свидетельствует о высокой криорезистентности эритроцитов.

Формула изобретения

Способ определения криорезистентности эритроцитов, включающий инкубацию суспензии эритроцитов в физиологическом растворе, регистрацию проницаемости мембран и о:-,енку криоре1394129

Составитель М.Шерстнев

Редактор Г.Волкова Техред М.Моргентал Корректор О.Кундрик

Заказ 2216/41

Тираж 847

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 зистентности, о тлич ающийс я тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, инкубируют суспензию зритроцитов в присутствии 0,004 н. соляной кислоты, регистрируют время гемолиэа эритроцитов и при его значении 5,0-5,6 мин определяют максимальную их криорезистентность.