Бромид 3-аллил-5-анилинометилен-4-оксо-2-(2-карбоксиэтилтио) -4,5-дигидротиазолия, проявляющий антипротеолитическую активность

Бромид 3-аллил-5-анилинометилен-4-оксо-2-(2-карбоксиэтилтио) -4,5-дигидротиазолия, проявляющий антипротеолитическую активность

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК!!9! И!) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМЪГ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ 1 (46) 07.05.90. Бюл. Ф 17 (21 ) 4113276/31-04 (22} 25.08.86 (71) Институт органической химии

АН УССР (72) Н.Н. Романов, С.Е. Могнлевич, Е.К. Микитенко и Б.М. Клебанов. (53) 547,789.3.03(088.8) (56) Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Медицина, 1984, ч. 2, с. 73.

Авторское свидетельство СССР . У 1334670, кл. С 07 D 277/36, 1985 (непубликуемое). (54) БРОМИД 3"АЛЛИЛ-5-АНИЛИНОМЕТИЛЕН"

-4-ОКСО-2-(2-KAPBOKCH3THJITHO)»

ДИГИДРОТИАЗОЛИЯ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ АНТИПРОТЕОЛИТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ (51)5 0 D 277 36 А 61 К 31/425 (57) Изобретение касается замещенных гетероциклических веществ, в частнос" ти бромида 3-аллил-5-анилннометилен-4-оксо-2-(2-карбоксиэтилтио)-4,5-дигидротиазолия (ГТ), который проявляет антипротеолитическую активность и может быть использован в медицине;

Цель — создание более активных веществ указанного класса. Синтез ГТ ведут нагреванием бромпропионовой кислоты и 3-аллил-5-анилинометиленроданина при 120 С. Выход ГТ 85Х, брутто-ф-ла С Н„ BrN>0>Sy. Токсич- . ность LD > 300 мг/кг. ГТ подавляет казеинолитическую активность трипсина и химтрипсина в степени большей, Я чем амбен и аналоги. 1 табл.

1394676

Изобретение относится к новым био.логически активным химическим соединениям, а именно к бромиду 3-аллил-

-5-анилинометилен-4-оксо-2-(2-карбоксиэтилтио)-4,5-дигидротиазолия, проS являющему антипротеолитическую активность.

Укаэанное. свойство предполагает возможность применения этого соедине- 1р ния и качестве ингибитора цротеолитических ферментов н медицине.

Целью изобретения является усиление антипротеолитической активности в ряду производных тиаэола. t5

Пример. Получение бромида

3-аллил-5-анилинометилен-4-оксо-2-(2-карбоксиэтилтио)-4,5-дигидротиаэолия (соединение 1).

Смесь 2,8 г 3-аллил-5-анилиномети- 2р ленроданина, 1,5 r бромпропионовой о кислоты нагревают при 120 С 2 ч. После охлаждения план растирают с ацетоном, продукт отфильтровывают, получают 3,5 г (85Х) соединения 1, раз- 25 лагающегося при нагревании выше 150 С.

Найдено, Х: С 45,0; Н 4,0 Br

18,5; N 5,9; S 15,0.

С/4 !7 В 11 03 82

Вычислено, Х: С 44, 76; Н 3, 96; 30

Sr 18,65; и 6,53; 8 14,92.

Определение токсичности соединения I.

Проводили s опытах на белых беспородных мышах (10 штук) массой 18-.20 r.35 Суспенэию вещества в водном растворе крахмала внодили внутрижелудочно через зонд из расчета 300 мг на 1 кг живой массы тела. Наблюдение проводили в течение 2 сут после введения. 40

Результаты наблюдения показали, что. летальный исход не наблюдается ни у одного из экспериментальных животных. Из этого следует, что величина

?Э ц соединения I превышает 300 мг/кг,45

Изучение антипротеолитической ак тивности.

Изучали в.опытах in vitro методом измерения степени торможения реакции гидролитического расщепления каэеина, 5р катализируемой трипсином или химотрипсином.

Для определения каэеинолитической активности трипсина использовали метод К.Н. Веремеенко. 55

В пробирку на 20 мл добавляли

1,5 мл 0,05 М фосфатного буфера (рН

7,6) и 0,5 мл раствора трипсина в том же буфере (содержание белка 14 мкг/мл) и проводили преинкубацию н течение

15 мин при комнатной температуре. Затем добавляли 1,0 мл 2Х-ного раствора казеина по Гаммерстену н 0,05 М фосфатном буфере при нагревании на водяа ной бане .при 70-80 С в течение 30 мин с последующим охлаждением, доведением рН раствора до значения 7,6 с помощью 0,1 í. NaOH (контроль величины рН проводили íà рН-метре со .стеклянным электродом) и доведением объ- . ема до 100 мл.

Инкубацию проводили в течение о

15 мин при 37 С на водян..й бане со встряхивателем. По оконч.-.нии инкубации реакцию останавливали добавлением

2 мл 5Х-ной трихлоруссусной кислоты.

Через !-1,5 ч после окончания реакции осадок белка отделяли центрифугированием при 1000 g в течение 15 мин и измеряли оптическую плотность надосадочной жидкости на спектрофотометре

СФ-4А при длине волны 280 нм против контроля, который обрабатывали сходным образом, но 0,5 мл трипсина вносили после добавления трихлоруксусной кислоты.

Полученное значение экстинкции Е„ использовали для вычисления ингиби" рующей активности испытуемого вещества.

При определении ингибирующей активности испытуемого вещества в опытную пробирку вносили 0,10 мп (О;25, 0,5, 1,0, 1,5 мл соответственно) раствора вещества (100 мкг/мл) в 0,05 .М фосфатном буфере (рН 7,6) и тот же буфер до общего объема 1,5 мл, добавляли 0,5 мл раствора трипсина в том .б же буфере (содержание белка 14 мкг/мл).

Далее пробы обрабатывали так же, как и в случае определения казеинолитической активности трипсина. Контроль содержал те же составляющие, но трипсин вносили после добавления трихлоруксусной кислоты.

Степень ингибирования вычисляли по формуле (1-Е )

Степень ингибирования 00Х, Е где Е и E " оптическая плотность в присутствии испытуемого вещества и без него соответственно.

Определение казеиколитической актинности химотрипсина проводили по той же схеме, что и для трипсина, но вместо трипсина вносили 0,5 мл химо1394676

ЕС соединения 1 в реакции трипсин-v каэеин меньше таковой для амбена в

112 раэ, соединений 2 и 3 в 10 и 7 раэ соответственно.

В реакции химотрипсин — казеин величина ECj„ соединения I меньше ана» логичной характеристики амбена более чем в 700 раз, а соединений 2 и 3— в 91 и 11 раэ соответственно. ! Таким образом, антипротеолитическая активность соединения I значительно выше, чем у его структурных аналогов и базового объекта, что указывает на возможность его применения в медицинской практике значительно . меньших дозировках, т.е. при использовании снижается вероятность побочных эффектов. трипсина (14 мкг белка в 1 мл 0,05 M фосфатного буфера, рН 7,6).

Сравнивали по активности соединение с аналогом по действию, в качестве которого выбран амбен (и-аминометилбензойная кислота) — препарат, применяемый в медицинской практике каК антипротеазное средство, а также с аналогами по структуре - бромидом и хлоридом 4,5-дигидро-2-карбоксиметилтио-5-анилинометилен-3-аллилтиазолия (соединения 2 и Э соответственно), При определении антипротеолитической активности соединений кон- 15 центрация амбена во вносимом растворе составляла 3 мг/мл, а производных тиазола — 1 мг/мл.

В качестве величины, характеризующей ингибиторные свойства веществ 20 . и позволяющей сравнить эти свойства у разных веществ, выбрана величина

ЕС, т.е. концентрация вещества, для которой степень ингибирования, рассчитанная по приведенной выше форму- 25 ле, составляет 50Х. Полученные.данные представлены в таблице.

Как видно из представленных в таблице данных, соединение подавляет казеинолитическую активность трипсина 30 и химотрипсина в значительно большей

1 степени, чем аналоги. Так, величина

Антипротеолитическая ак ния I и аналогов по стр

Формула изобретения

Бромид 3-аллнл-5-анилинометилен-4-оксо-2-(2-карбоксиэтилтио)-4,5-дигидротиаэолия формулы с,нрн-сн о

О ВСН2СН2СООН

Br

СН,СН=CH проявляющий антипротеолитическую ак-. тивность. тивность соединеуктуре н действию

Вещество

ЕС, в реакции, мМ химотрипснн — каэеин трипсин — казеин

Соединение I

0,065(0,049; 0,08!) 0,0065(O,OO58; 0,0072) 4,7(4,6; 4,8) 7,3(6",6; 8,0) Амбен

0,59(0,57; 0,61) Соединение 2

0,66(0,64; 0,68) Соедине1ние Э 0,46(0,40; 0,51) . 0,72(0,063; 0,080) Ти аж 325 Подписное

ВШИПИ Заказ 1542

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

П р и м е ч а и и ei В скобках приведены значения ЯС полученные в двух. параллельных оп ределениях.