Способ ферментативного превращения соласодина

Способ ферментативного превращения соласодина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биотехнологии , биологии И медицине. Целью изобретения является увеличение выхода дегидрированного соласодина, что приводит к увеличению возможности ; трансформации его в активном центре ферментов, снижение денатурирующего действия инкубационной среды и повышение выхода продукта. Способ заклю- . чается в применении однофазной трехкомпонентной системы для растворения соласодина, содержащей диметилсульфоксид, хлороформ и водный раствор соласодиндегидрогенида в соотношении 97:2:1. В однофазной системе отсутствуют границы раздела фаз и нет эатрудне-г НИИ при связывании субстрата ферментом и освобождении продукта реакции,Такая система позволяет осуществлять перенос электронов при использовании ис1сусственной цепи переноса электроноз от электронов от кофермента к тетразолевым солям, что необходимо при регистрации активности ферментов. Предлагаемая трехкомлонентная система не оказывает денатурирующего действия на ферменты. Использование способа позволяет увеличить выход дегидрированного соласодина. SS3i

СОЮЗ СОЕЕТСИИХ

СОЦИАЛИСТИЧКНИХ

РЕСПУБЛИК (5p 4 С 12 М 9/00 с

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H A ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3924608/31-13 (22) 03.07.86 (46) 30.05.88. Бюл. 11g 20 (71) Институт молекулярной биологии и биохимии AH КазССР (72) А.П. Францев, E.Á. Дериглазова и Ш,К. Иурумбаева (53) 577.15(088.8) (56) Kondo E., Hasuo Е. Pseudo-crys-., tall.lofermentation of stегоid: à new

process for preparing prednisolone

by microorganisms.-J. Gen. H icrobiol., 1961, ч. 7, И 2, р. 113-117.

Мартинек К. и др. Доклады АН СССР, 1977, 236, с. 920-923. (54) СПОСОБ ФЕРМЕНТАТИВНОГО IlPEBPAmНИЯ СОЛАСОДИНА (57) Изобретение относится к биотехнологии, биологии и медицине. Целью изобретения является увеличение выхода дегидрированного соласодина, что приводит к увеличению возможности трансформации его в активном центре (Igf:: U в А 1 ферме нтов, снижение денатурирующего действия инкубационной среды и повышение выхода продукта, Способ заключается в применении однофазной трехкомпонентной системы для растворения соласодина, содержащей диметилсульфокснд, хлороформ и водный раствор со-ласодиндегидрогенида в соотношении

97:2:1. В однофазной системе отсутствуют границы раздела фаз и нет затрудне". ний при связывании субстрата ферментом и освобождении продукта реакции.Такая система позволяeò осуществлять перенос электронов при использовании искусственной цепи переноса электронов от электронов от кофермента к тетраэолевым солям, что необходимо при регист" рации активности фарнантав. Прадиага- (Д емая трехкомпонентная система не оказывает деиатурирующего действия на ферменты. Использование способа по- д зволяет увеличить выход дегидрирован-нога соласодина.

13993чО

Изобрете71ие относится к биотехнологии и может быть использовано в биолоГии энэимологии у м7п<робиоло Гни н медицине.

4ель изобретения — уве3п<чение пы- .

5 хода дегидрированного соласодина, С17осоЕ7 эа1<1пОчается в проведении иикубации соласодина с соласоди11дегид- р о Ге и а э о и 73 смеси д7171е т и71с ул ь ф о и с 7<д а (ДИСО), хлороформа It поды II соотношении Э7:2:1 (по объему), Фермент выде..л<нот .из ткани растений (семейство

So1anum) или микроорганизмов, например гриб Аэрег911 1е7э ос<1гaceus . Полу- 15 чепный фермептный препарат имеет удельну1О активность 40 ед/мг белка.

Концентрация белка в 7тре1тарате со«

cтапляет 0,5 мг/мл. Белковый препарат находится в 0,05 И трис-НС1 буфере, рН 7,4 . Соласодин растворяют в смеси

ДМСО-хлороформ, (97:2). до достижения предельной концентрации Р,А мг/мп.

В полученный раствор вводится ферментный препарат соласодиндегидрогелазы 25 так, чтобы количество его составило

1/ от объема раствора соласодина. При облюдении укаэапны7< соотношений ДИСО, оуоформа и водной фазы, содержащей

17ермент (97 :2:1}, образуется гомоген" 3Q

ый раство1: „в которо11 эффективно

1ротекает превращение соласодина. Зыод дегндр11рованпо1"о соласоди7га воэ" стает в 10 по сравнен1ПО с изв ест"".

1ми способами.

TT

3J ., p и и е р 1. Соласодин раство-: яю-. в 100 мп смеси ДМСО; хлороформ

96:3) до достижения концентраций ,4 мг/мп. Затем добавляют 1 ил фер1е77тпого препарата саласодиндегидро- 40 еназы, растваpå!;!to!"o в 0,05 И Ip»с.,НС1 буфере, рН 7,l!, содержащего 17acr(Ф фор ИЛДФ II концентрации О, i и1./мл

1 0„„5 мг белка па мл раствора с

1 д чьиой ектпв71ость1О,0 ед/II . Смесь

I)Q образует истинного pQc7 71ора, рас-. й5

<1ланвается на две фазы: ДИСО + Н О хлороформчу!О ° Количество окислеп

71ого соласоднпа определяется спектро<11отометр11чески по поглощению УФ при атолле 340 нм, специфичной дпя НЛДФП, 50

<1бразовав1эе1ос71 в зквивалептньп< количествах < окисл<лIным соласодином в

71 оде ката, Its!!tee!

П р и и е р 2, Соласодин раство" р я1ОТ в 100 мл смеси ДИСО: хттороформ (,96 ° 2) до достижения концентрации

0,4 мг7 м71. Затем добапл<нат 2 м77 фермеитного препарата ci л.1содиндет илро.: геназы. Наблюдается расслоение систе мы . Количество образовавшегося НЛДФН

12 имоль/мин.

П р и и е р 3. При соотношении

ДИСО:СНС1э. Н О = 97:2:l образуется гомогенвый раствор. Количество образовавшегося НАДФН 32 мкиоль/мин.

При использовании акой однофаэной трехкомпонентной системы для растворения соласодина, содержащей диметилсульфоксид (ДИСО), хлороформ (СНС.1 ) и воду (H 0) в соотношении 97:2:1 отсутству1от границы раздела фаэ и иет затруднений при связывании субстрата ферментом и освобождении продукта реакции (пример Э). Такая система позволяет осуществлять перенос электро" нов при использовании искусственной цепи переноса электронов or кофермента к тетразолевым солям, что необхо- . димо при регистрации активности ферментов.

Предлагаемая трехкомпонентная „система ДИСО-CHC1э-Й О не оказывает де" натуриру1Ощего действия на ферменты (например, на глутамат- и соласодин" дегидрогеназы) при использовании ее в качестве.инкубационной среды.

Для установления указанного соот" ношения компонентов расслаивающиеся смеси хлороформа и воды (1:1) титропали ДИСО до исчезновения границы раздела фаз. Установлено, что увеличение содержания хлороформа в смеси приводит к усилению денатурирующего действия ее на ферменты, а прн увеличении содержания воды наблюдается выпадение соласодина в осадок. Предельная растворимость соласодина 17 дан..ей системе 0,4 мг/мл. 1 аким образом„. использование предлагаемого способа позволяет увеличить выход дегидр7<рованного соласодина при ферментативном превращении соласодинй

Формула и э о б р е т е í è ÿ

Способ ферментативного превращения соласодина, включающий инкубац7вО соласодина с соласодиндепдрогеназой в присутствии органических растворителей, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода дегидрированного соласодина, инкубацию со" ласодина с соласодиндегидрогеназой проводят,в смеси днметилсульфоксида, хлороформа и воды в соотноше7<ни

97:".:1 (по объему).