1403990 - Способ получения полисахаридов

Способ получения полисахаридов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к химии высокомолекулярных полисахаридов, конкретно к получению полисахаридов на основе грибов рода Coriolus, обладающих высокой противоопухолевой активностью при пероральном применении , и может быть использовано при производстве лекарственных средств. Изобретение позволяет расширить арсенал биологически активных средств за счет того, что мицелий грибов рода Coriolus экстрагируют 0,1-0,4 н. водным раствором едкого натра при 93-97 С, полученный экстракт под- ёергают ультрафильтрации при давлении 0,5-5,0 кг/см или обратному осмосу при давлении 20-35 кг/см, затем вводят 84-90 об.% сульфата аммония и полученный осадок растворяют в воде до образования 3-10%-ного раствора с последующей его очисткой сначала ультрафильтрацией при давлении 0,5-5,0 кг/см и затем в ионообменной диэтиламиноэтилцеллюлозной колонке концентрированием: раствора и сушкой целевого продукта. 3 табл. § О) с

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕаВБЛИН аю (И) (5д) 4 С 08 В 37/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТ,Ф ф PP+1 gQ Ъ7

° g" (Уф

T, 4Л у Я д

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ.(21) 25 /4401/23-05 (22) 26.01,78 (31) 52-727Z (32) 27 ° 01.77 (33) JP (46) 15.06.88. Бюл. й- 22 (71) Куреха Кагаку Когио Кабусики

Кайся (Л. ) (72) Чикао Есикуми, Такаеси Фудзии, Масахико Фудзии, Минору Охара

Акира Кобаяси и Тунео Акату (3Р) (53) 547. 458 (088. 8) .(56) Шарков В. И., Куйбина Н. И. Химия гемицеллюлоз. N.: Лесная промышленность, 1978, с. 29-33. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИСАХАРРЩОВ (57) Изобретение относится к химии высокомолекулярных полисахаридов, конкретно к получению полисахаридов на основе грибов рода Coriolus обладающих высокой противоопухолевой активностью при пероральном применении, и может быть использовано при производстве лекарственных средств °

Изобретение позволяет расширить арсенал биологически активных средств за счет того, что мицелий грибов рода Coriolus экстрагируют 0,1-0,4 н, водным раствором едкого натра при

93-97 С, полученный экстракт подвергают ультрафильтрации при давлении г

0,5-5,0 кг/см или обратному осмосу при давлении 20-35 кг/см, затем вводят 84-90 об. Е сульфата аммония и полученный осадок растворяют в во- де до образования 3-!OZ-ного раствора с последующей его очисткой сначала ультрафильтрацией при давлении

0,5-5,0 кг/см и затем в ионообменной диэтиламиноэтилцеллюлозной колон. ке концентрированием: раствора и сушкой целевого продукта. 3 табл.

1403990

4О

Изобретение относится к химии высокомолекулярных полисахаридов, а именно к получению полисарахидов на основе грибов рода Coriolus, обладающих высокой противоопухолевой активностью при пероральном применении и может быть использовано при производстве лекарственных средств.

Цель изобретения вЂ” расширение арсенала биологически активных средств. ,Пример 1.

1-1. Культура грибкового штамма.

Штамм (именуемый СМ-103 и официально выращиваемый в Японском Государственном исследовательском институте ферментации под номером осаждения FERN-Р2414) базидиомицетного грибка Coriolus versicolor (Fr) Quel вводят в виде затравки в.двадцать

200-миллилитровых конических колб, каждая из которых содержала 30 мл водного раствора среды культуры, содержащей,мас.Х: глюкоза 5; дрожжевой экстракт 0,3; KH POq 0,1; MgSOq"

> 7Н О 0,1, и затравочный (прививочный) материал оставляют для выращива ния на 10 дней при 25-27 С. Выросшие слои грибка на поверхности среды культуры в колбах собирают и гомогени зируют при помощй 20 л физиологического соляного раствора для приготов ления рассады культуры грнбкового штамма в виде суспензии.

20 л полученной таким образом рассады культуры вводят в виде затравки в 1,600 л водного раствора среды культуры, содержащей, мас.Х: глюкоза 10; дрожжевой экстракт 1,5;

КН РО 0,1- NgS0q ° 7Н О 0,1, содержащихся в вертикальном ферменторе объемом 2 м, и затравочный материЪ ал оставляют для выращивания в течение 7 дней при 26 С. При этом в среду культуры продувают воздух со скоростью 0 5 л мин на 1 л среды культуры и осуществляют перемешивание среды культуры со скоростью

150 об/мин.

Полученный таким образом выращенный материал сушат в сушильном аппарате с двойным барабаном, чтобы .получить около 30 кг сухого матери-. ала, содержащего в основном распространяющиеся грибницы грибкового штамма.

Каждые 100 r сухого материала подвергают следующему процессу для извлечения полисахарида, 1-2. Извлечение полисахарида из сухого материала.

100 г полученного таким образом сухого материала подвергают экстрагированию сначала 3 л горячей воды при 95 2 С в течение 3 ч в 5-литровой колбе с мешалкой для перемешивания, и затем содержимое колбы фильтруют для разделения его на грибковый остаток и раствор экстракта.

Грибковый остаток промывают при помощи t л воды, промывку сочетают с раствором экстракта, что приводит к общему количеству 3 5 л.

Грибковый остаток подвергают эк2р страгированию при помощи 2 л водных растворов едкого натра с соответствующими нормальностями 0,1, 0,2, 0,3 и 0,4 при 95 .2 С в том же порядке и в той же самой колбе, что и

25 ранее, и после каждой операции экстрагирования грибковый остаток от.деляют от раствора экстракта и промывают 5 л воды. Промывку комбинируют с раствором экстракта, приводя к общему количеству 2,2 л. Получают

12,3 л водного раствора, содержащего экстракт грибкового штамма. Этот водный раствор, называемый далее водным раствором экстракта, подвергают очистке.

1-3. Очистка водного раствора экстракта.

Очистку упомянутого выше водного раствора экстракта, содержащего полисахариц, осуществляют или при помощи ультрафипьтрации, далее обозначаемой как 1-3-,1, ипи при помощи обратного осмоса, далее обозначаемого как

1-3-2.

1-3-1. Очистка при помощи ультрафильтрации.

Часть (7, 2 л) водного раствора экстракта (12, 3 л), приготовленного из 100 r сухого материала, упомянутого выпе, подвергают ультрафипьтрации, при 10 С при помощи введенного водного раствора экстракта в ультрафильтр (типа фильтра Amicous:2000 13eneh, снабженного мембраной М-5, которая позволяет проходить молекулам только с молекулярным весом менее чем

5000, чтобы оставлять водный экст- . ракт, содержащий только молекулы с

03990

25,трацию.

55 з 14 молекулярным весом не менее чем 5000, и при помощи подачи в него давления.

Операцию ультрафильтрации осуществляют 4 раза при давлении 0,5 кг/см

z и времени операции 1,5 часа в серии

1-3-1-1; давлении 0,5 кг/см 4 времени операции 2 5 ч в серии 1-3-1-2

В давлении 3,0 кг/см и времени операции 2 ч в серии 1-3-1-3 и давлении

5,0 кг/см и времени операции,2,5 ч в серии 1-3-1-4.

Количество водного раствора экстракта, оставшегося в ультрафильтре, составляет 840 мл (серия 1-3-11), 380 мп: (серия 1-3-1-2), 150 мл (серия 1-3-1-3) и 110 мл (серия 13-1-3) .

Водный экстракт, оставленный в ультрафильтре в каждом опыте укаэанной выше первой ультрафильтрации, делят на три равные части (порция 1, порция 2 и порция 3) и добавляют кристаллический сульфат аммония в каждую из порций,тем самым производится высаливание полисахарида, присутствующего в водном экстракте, и самого экстракта. Количество сульфата аммония, добавляемого в каждую из порций водного экстракта, оставшегося в ультрафильтре при проведении каждого из опытов в указанной выше ультрафильтрации, показано в табл.1-1, и эти данные соответствуют 90 мас. от объема водного экстракта в порции

1; 87 мас.% от объема водного экстракта в порции 2 и 84 мас.% от объема водного экстракта в порции 3 в каждом из опытов по ультрафильтрации.. Полисахарид, полученный в результате проведения стадии высаливания, далее собирают фильтрацией и подвергают растворению в дистиллиро-. ванной воде.

Каждый из полученных таким образом водных растворов полисахарида подвер гают второй ультрафильтрации в том же самом ультрафильтре, оснащенном той же самой мембраной, как было указано выше, для удаления сульфата ,аммония, оставшегося в полисахариде, полученном высаливанием. При проведении второй ультрафильтрации операцию проводят четыре раза подряд, с тем, чтобы удалить сульфат аммония так тщательно, как только это возможно, из полисахарида, полученного выщелачиванием (табл. 1-2) .

После приложения давления, равного 0,5 кг/см, к водному раствору, z находящегося в ультрафильтре в течение периода времени, равного 1,5 ч, что является первой операцией второй ультрафильтрации, производят добавление определенного количества воды к водному раствору,-оставшемуся в ультрафильтре, а вторая операция на этой второй ультрафильтрации заключается в создании давления, равного 1,5 кг/см на ультрафильтре и

Я поддержании этого давления в течение 1,5 ч. После добавления определенного количества воды к водному раствору, оставшемуся в ультрафильтре, давление, равное 1,5 кг/см, снова прикладывают к ультрафильтру, и это давление сохраняют в течение

4,5 ч,что является третьей операцией.

Определенное количество воды снова добавляют к водному раствору, оставшемуся в ультрафильтре, и давление, равное 5 кг/см, снова приклаz дывают к ультрафильтру в течение

1 ч, и это является четвертой операцией, завершающей вторую ультрафильКонцентрация полисахарида в водном растворе, оставшемся в ультрафильтре после завершения стадии второй ультрафильтрации, составляет

10 г/100 мл в том случае, когда вторую ультрафильтрацию проводят на порции 1 каждого опыта; 8 г/100 мп в том случае, когда это касается порции 2 каждого опыта и 3 г/100 мл в том случае, когда это касается порции 3 каждого опыта.

Далее каждый из полученных таким образом водных растворов, соответственно остающийся в ультрафильтре после завершения второй ультрафильтрации, на соответствующих порциях каждого из опытов, подвергают хроматографированню, и эту операцию осуществляют путем выливания водного раствора в колонку, заполненную диэтиламиноэтилцеллюлозой с целью адсорбции азотсодержащих материалов,которые являются примесями в водном, растворе.

Выходной раствор, который пропускают через колонку и из которого отделяют азотсодержащие материалы с помощью адсо р бен та в колонке, со бирают,затем его подвергают конденсации йри пониженном давлении и далее су1403990 шат с получением в результате очищенно ro полиса харида.

1-3-2. Очистка при помощи фаз, представленных обратным осмосом.

Часть (7,2 л) водного раствора экстракта (12,3 л), приготовленного иэ 100 r очищенного материала, упомянутого выше, подвергают обратному осмосу. Операцию обратного осмоса осуществляют 4 раза при соответствующих условиях, т. е. давлении 20 кг/см и времени операции 3 ч в серии 1 "32-1; давлении 20 кг/см и времени а операции 4,5 ч в серик 1-3-2-2; давлении 29 кг/см2 и времени операции .5 ч в серии 1-3-2-2 и давлении

35 кг/см и времени операции 5 ч в серии 1-3-2-4 и при общих и фиксио рованных условиях температуры 10 С в аппарате для обратного осмоса, снабженного мембраной, которая позволяет проходить только молекулам с молекулярным весом меньше 5000. Эти данные составляют 90 мас.Х от объема . раствора порции 1, 87 мас.Ж от объема раствора порции 2 и 84 мас.% от объема раствора порции 3 стадии высаливания по примеру 1. Полисахарид, полученный в результате проведения стадии высаливания, собирают. фильтраци" ей и затем подвергают растворению в дистиллированной воде.

Каждый из полученных таким образом водных растворов полисахарида из порции соответствующих .опытов подвергают ультрафильтрации в ультрафильтре, оснащенном мембраной,как и в опыте 1-3-1 для удаления сульфата аммония, присутствующего в вод ном растворе с использованием той же методики, которая была указана для второй ультрафильтрации в опыте 13 1 °

Водный раствор, оставшийся в ультрафильтре после завершения операций ультрафильтрации, подвергают хроматографированию на колонке с использованием той же методики, которая была указана при проведении хроматографирования на колонке в опыте 1-3-1 для удаления азотсодержащих материалов, содержащихся в качестве примесей в водном растворе; концентрация полисахарида в водном растворе, оставшемся в ультрафильтре после завершения операции ультрафипьтрации, является равной 1 г/100 мп для порции 1;равной

8 г/100 мл для порции 2 и равной

1-4, Измерение характеристик предлагаемого полисахарида.

Характеристики, включающие структурные характеристики и противоопухолевые активности, полисахаридов, полученные при помощи представлен-. ного выше процесса, .показаны в табл.3-1 и 3-2.

1-4-1. Спектр поглощения инфракрасных лучей.

Спектр поглощения инфракрасных лучей образца полисахарида измеряют в соответствии со спобом использования таблетки бромида калия. Таблетка, используемая в этом способе приготовлена при помощи смешивания 1 г.

KBr с количеством около 1/3 до 1/2 мерной лопаточки образца в соответствии с общим способом. Поглощение

55 отмечено при диапазонах, см : 3600вЂ”

3200; 2920-2900) 1660-1610; 1460,;

1410; 1360; 1230; 1150; 1080; 1060вЂ”

990; 925; 840; 755; 705. Поглощение при 840 см характерно для о -со3 г/100 мл для порции 3 по каждому иэ опытов обратимого осмоса (т.е. опытов 1-3-2-1, 1-3-2-2, 1-3-2-3 и

1-3-2-4) .

Выходящий раствор, который пропускают через колонку и очищают от аэотсодержащего материала с помощью адсорбента в колонке, собирают, конденсируют при пониженном давлении и сушат с получением в результате очищенного полисахарида.

Условия и результаты, полученные при проведении указанной очистки вод-ного экстракта, содержащего полисахариц, проведенной в соответствии со способом 1-3-2, представлены в табл.2-1 и 2-2. Раствор, оставленный в аппарате для обратного осмоса после завершения каждого иэ опытов по обратному осмосу, разделен на 3 равные части (порция 1, порция 2 и порция 3) и затем проводят добавление определенного количества кристаллического сульфата аммония; добавление проводят к каждой порции при комнатной температуре и тем самым

/ осуществляют высаливание полисахарида из водного раствора. Количество сульфата аммония, добавляемого в каждую из порций раствора, оставшегося в аппаратуре для обратимого осмоса при проведении каждого из опытов, представлено в табл.2-1.

7 1403990

50 единений сахаридов. Это свидетельст- . вует о том, что данное вещество состоит из глюкозита nL -соединения.

1-4-2. Удельное вращение.

Оптическое вращение измерено при помощи D-лучей (589 мкм) натрия при использовании 0,25%-ного водного" раствора образца и 5 см элемента и 2$ удельное вращение вычислено (.)д

10 из вращения

1-4-3. Молекулярный вес.

Молекулярный вес полученного таким образом полисахарида измерен при помощи использования способа ультрацентрифугирования. Результаты показывают,что молекулярный вес всех измеренных образцов находится внутри диапазона от 5000 до 300000. Для измерений использовалось условие равновесия осаждения и синтетической граничной структуры с применением оптической системы интерференции. Экспериментальные условия следующие: концентрация образца, 0,3% раствори- 25 теля, M/10M КС1; температура 25 С, столб жидкости 1,7 мм; скорость

22000 об/мин, время измерения 5 ч.

1-4-4. Составляющая сахарида в полисахариде. 30

Составляющую моносахарида в полученном таким образом полисахариде анализируют следующим образом. В стеклянную ампулу вводят 3 мг образца с добавлением 10 мл 3%-ного раствора

35 метанола хлористого водорода,метанолиз осуществляют в течение 16 ч при о

100 С и затем нейтрализуют хлористоводородную кислоту при помощи карбоната серебра, прореагированную смесь отфильтровывают при комнатной температуре. Фильтрат конденсируют, выпаривают до сухого состояния, остаток растворяют в 0,5 мп сухого пиридина.

Раствор смешивают с 0,2 мл гексаметилдисилаэона и О, 3 мл триметилхлорсилана, и смесь оставляют при комнатной температуре на 30 мин для осуществления триметилсиляции. После ее окончания смесь растворяют в хлороформе, и после удаления избытка реагента при помощи промывочной воды полученный раствор выпаривают до . сухого состоянияi Остаток растворяют

55 в тетрахлориде углерода и производят анализ при помощи газовой хроматографии. Результаты анализа показывают, что глюкоза составляет более 90% составляющих сахарида данного вещества (полисахарнда), а другие сахариды, такие как манноза, галактоза, ксилоза, фукоза и др. составляют очень малое количество.

Для того, чтобы определить конфигурацию (D-форма или ы -форма) глюкозы, как основной составляющей предлагаемо го полисахарида, полисахарид подвергают гидролизу, глюкозу, изолированную от гидролизата при помощи хроматографической колонки, подвергают анализу понижения точки плавления после смеси с подлинным образцом D-глюкозы. В соответствии с результатами, что точка плавления смеси была той же самой, что и подлинного образца и образца гидролизата, найдейо, что глюкоза предлагаемого полисахарида имеет D-форму.

1-4-5. Структура соединения сахарида. !

Структура соединения сахарида в данном веществе определялась в соответствии со способом Howorth.

В 10 мп раствора 1 н. гидроокиси ,натрия растворяют 2 r образца и при

Ю этом раствор поддерживают при 40-50 С в потоке азота и строгом перемешивании, по каплям в раствор в течение нескольких часов добавляют 20 мл диметилсульфата и 40 мл 30%-ного водного раствора гидроокиси натрия и оставляют смесь на ночь. После чего смесь была подвергнута обработке при помощи метилирования с использованием такого же количества агенТоВ метилирования. После нейтрализации реакционной смеси ее.диализируют проточной водой и диализат конденсируют при пониженном давлении и затем подвергают такой же обработке метилированием, как ранее, три раза.

После завершения окончательной нейтрализации и диализа полученный диализат выпаривают до сухого состояния при пониженном давлении и остаток растворяют в 20 мл смеси с соотношением 10:1 хлороформа и метанола. К полученному таким образом раствору добавляют смесь с соотношением 1:1 петролейного эфира и простого эфира, чтобы осадить метилированное вещество. Затем 20 мг метилированнаго вещества подвергают гидролизу с водным раствором 1 н.серной

Таблица 1-1

Условия проведения процесса, параметры процесса и некоторые результаты, полученные при проведении стадии ультрафильтрации для очистки водного экстракта штамма CM-103

Coriolus versiolor (Fr) Quel

Стадия растворения

Стадия высаливания

Опыт

Стадия первой ультрафильтрации

Концентрация полученного высаливаДавление, кг/см

Время,ч

Количество

Количество до бавляемо го (NH4), so„ г/мл, (ма с . /о б) порции раствора,мл раствора, оставнием полисахарида в дистиллированной воде, г/мл шегося в ультрафильтре,мл

1-3-1 1 0,5

840 280 (порция 1) 1,5

252/280 (90) 2,8/280

2,8/280

280 (порция 2) 244/280 (87)

280 (порция 3) 235/280 (84) 126 (порция 1) 113, 9/126, 9 (90) 2, 8/280

1-3-1-2 0,5

2,5 380

126 (порция 2) 110,1/126,6 (87) 2, 8/280

126,6 (порция 3) 106,3/126,6 (84) 2,8/280

9 14039 кислоты в течение 16 ч при 100ОС, и гидролизат превращают в алдитолацетат в соответствии со способом для измерения его молярного отношения при помощи сравнения зон пиков его хроматограммы. Для определения разницы между 2,3,6-три-О-метилглюкозой и 2,3,4-три-О-метилглюкозой, 20 кг метилированной глюкозы подверо гают метанолизу при 100 С в течение

16 ч в герметичной ампуле при использовании З .-ного спиртового раствора хлористого водорода. В результате хроматографического анализа продукта метанолиза не обнаружено 2,3,4 три-О-метилглюкозы.. Для подтверждения каждый из разлагаемых продуктов подвергают идентификации с газовой хроматограммой подлинного вещества, при этом каждый гидролизат изолирован при помощи хроматографической колонки и кристаллизовался или превращался в кристаллические производ- ные вещества. 25

90 10

Формула изобретения

Способ получения полисахаридов, включающий экстракцню растительного материала, отличающийся тем, что, с целью расширения арсенала биологически активных средств, в качестве растительного материала используют мицелий грибов рода Coriolus, экстракцию проводят 0,-1-0,4 н. водным раствором едкого натра при

93-97 С, полученный экстракт подвергают ультрафильтрации при давле-, нии 0,5-5,0 кг/см или обратному осмосу при давлении 20-35 кг/см, затем вводят 84-90 об. сульфата аммония и полученный осадок растворяют в воде до образования 3-10 -ного раствора с последующей его очисткой сначала ультрафильтрацией при давлении 0,5-5,0 кг/см и затем в ионо4 обменной диэтиламиноэтилцеллюлозной колонке концентрированием раствора и сушкой целевого продукта.

1403990

Продолжение табл.! -I

Стадия высаливаиия

Стадия растворения а . Г

Опят

Конщентрация полученного высаливаКоличество порции раствора,мл нием по50 (порция 1 ) 45/50 (90)

50 (порция 2) 43,5/50 (87)

50 (порция 3) 42/50 (84) 150

1-3-1-3 3, 0

36,6 (порция 1) 32,9/36,6 (90) 2,8/280

110

2,5

1-3-1-4 5,0

36,6 (порция 2) 32/36,6 (87) 2, 8/280

Эб,б (порция 3) 30, 8/36, 6 (83) 2, 8/280

Таблица 1-2

Стадия конденСтадия хроматографирования

Опыт

Стадия сушки

Давление, кг/см

Время ч сации

Количество конценСуммарное количество выКоличество высушенного трата, мл ходящего потопродукта, r ка и промывок,л

1,5 2,5/25 (10)

1, 5 2, 5/25 (10) 0,5

1,5

1,3

4,5 2,5/25 (10) 10

1-3-1-1 1, 5 (порция

1) 2,5/25 (10)

1,5 2,5/31,2 (8) 5,0

0,5

Стадия второй ультрафильтрации

Концентрация полисахарида в растворе, оставшемся в ультрафильтре, (г/мл) (мас. Х/об) личество бавляемого

НН4) 80 мл, ас. Х/об) лиса харида в дистиллиро- ванной воде, г/мл

2,8/280

1403990

Стадия сумки еничео цента, 1,5

1,3 (порция

2) 5,0

0,5

1,5 I0

1,3

0,5

1,5

1,3

0,5

1э5

1,3

1 5

1,3

0,5

1,5

1-3-1-1 1, 5

1-3-1-1 1, 5 (порция

3) 5,0

1-3-1-2. 1, 5 (порция

1) 5,0

1-3-1-2 1,5 (порция Р

5,0

0,5

1-3-1-2 1, 5 (порция

3) 5,0

1,5 2,5/31,2 (8)

4,5 2,5/31,2 (8) 1 2,5/31, 2 (8)

1,5 2,5/83,3 (3)

1,5 2,5/83,3 (3) 4, 5 2,5/83, 3 (3) 1 2,5/83,3 (3)

1,5 2,5/25 (10) 1,,5 2, 5/25 (10)

4,5 2,5/25 (10) 1 2, 5/25 (10)

1,5 2,5/31,2 (8)

1,5 2,5/31 2.(8)

4,5 2,5/31,2 (8) 1 2, 5/31, 2 (8)

1,5 2,5/83,3 (3) 1,5 2,5/83,3 (3)

4,5 2,5/83,3 (3)

1 2,5/83,3 (3)

1,5 2,5/25 (10)

1,5 2,5/25 (10) l4

Продолжение табл.

КолычеСТВО

ВЫСУаЕННОГО продуй» т а, r

1403990

1,3

0 5

1,5

1,3

0,5

4,5

1,5

0,5

1,5

1,3

0,5

1,5

4,5

1,3

0,5

1,5

1,3

1-3-1-3 1, 5 (порция

1) 5,0

1-3-1-3 1, 5 (порция

2) 5,0

1,5

1-3-1-3 1, 5 (порция

3) 5,0

1 3-1-4 1,5 (порция

1) 5,0

1-3-1-4 1, 5 (порция

2) 5,0

1-3-.1-4 1, 5 (порция

3) 5,0

4, 5 2, 5/25 (10) 2,5/25 (10) 1,5 2,5/31,2 (8)

1,5 2,5/31,2 (8)

4, 5 2,5/31, 2 (8) 2,5/31,2. (8) 1,5 2;5/83,3 (3) 2,5/83,3 (3)

2,5/83,3 (3) 2, 5/83, 3 (3)

2,5/25 (10) 1,5 2,5/25 (10)

4, 5 2,5/25 (10) 2,5/25 (10) 1,5 2,5/31,2 (8) 2, 5/31, 2 (8)

2,5/31,2 (8) 2,5/31,2 (8) 1,5 . 2,5/83,3 (3)

1,5 2,5/83,3 (3) 4,5 2,5/83,3 (3) 1 2,5/83,3 (3) Продолжение табл.1-2

1403990

Таблица 2-1

Стадия высаливания

Опыт

Стадия обратного осмо са тадия расторения

Коли-. честВреMa I ч

Давление, 2 кг/см

Количество порции раствора, мл во раствора, оставшегося в аппарате, 1-3-2-1 20

4,5

1-3-2-2 20

60 (порция 2) 52,2/60 (87) 2,8/280

60 (порция 3) 50,4/60 (83) 1-3-2-3

5О (порция 2) 43, 5/50 (87) 50 (порция 3) 42/50 (84) 1-3-2-4 35

36,6 (порция 2) 32/36,6 (87) 36,6 (порция 3) 30, 8/36,6 (84) 2, 8/280

Условия проведения процесса, параметры процесса и некоторые результаты, полученные при проведении стадии обратного осмоса дпя очистки водного экстракта штамма СМ-103

Coriolus versicolor (Fr) Quel

Количество (ын ) яо добавляемог к порции, г/мл (мас.X/îá) 300 100 (порция 1) 90/100 (90)

100 (порция 2) 87/100 (87)

100 (порция 3) 84/100 (84)

180 60 (порция 1) 54/60 (90) 150 50 (порция 1.) 45/50 (90) 110 36,6 (порция 1) 32,9/26,6 (90) Концентрация высо ленного полисахарида в дистнл» лированной воде,г/мл

2, 8/280

2,8/280

1403990

Стадия сушки

Стадия хроматографирования на коСтадия конденсации лонке

Количество ство ство высушенного продукта, г промывки

2) 0 5

1,5

4,5

1-3-2-1 (порция

1) 1,5

1,3

5,0

0,5

1,5

1-3-2-1 (порция

2) 1,5

4,5

1,3

5,0

0,5

1,5

1-3-2-1 (порция

3) 1,5

4,5

1т3

5,0

0,5

1,5

1-3-2-2 (порция .

1) 1,5

1,3

5,0

0,5

1,5

1,5 ьтрации бя 4 операции) Концентрация полисахарида в растворе, оставшемся в ультрафильтре, г/мл (мас.7/об) 2,5/25 (10)

2,5/25 (10)

2, 5/31, 2 (8)

2,5/31,2 (8)

2,:5/83,3 (3) 2,5/83,3 (33

2,5/83, 3 (3) 2,5/83,3 (3)

2,5/25 (10)

2,5/25 (10) 2,5/25 (10) 2, 5/31, 2 (8) 2, 5/31, 2 (8) Т а б л и ц а 2-2

Колич е- Колич евыходя- конценщего по- трата, тока, а мл также

Продолжение табл.2-.2

1,3

0,5

1,5

4,5

1,3

0,5

1,5

4,5

1,3

0,5

1,5

4,5

1,3

0,5

1,5

4,5

1,3

0,5

1,5

1-3-2-2 1, 5 (порция . 2) 5,0

1-3-2-2 1, 5 (порция

3) 5,0

1-3-2-3 1, 5 (порция

1) 5,0

1-3-2-3 1 5 (порция

2) 5,0

I 3-2-3 1,5 (порция

3) 5,0,5/31, 2 (8

2, 5/31, 2 (8)

2,5/83,3 (3) 2,5/83,3 (3)

2,5/83,3 (3)

2,5/83,3 (3) 2,5/25 (10) 2,5/25 (1О)

2,5/25 (10)

2,5/25 (10) .

2,5/31,2 (8)

2,5/83,3 (3)

2,5/25 (10) 2,5/25 (10) 1403990

Стадия хроматографирования на колонке

Стадия конденсации

Олыт нцентрация лисахарида растворе, тавшемся в льтрафильтре, мл (мас.X/îá) КоличеКоличество выходя» щего потока, а такие промывки ство концентрата, 346

2) 10

1,3

4,5

1-3-2-4 1, 5 (порция

1) . 50

1,5

0,5

1,5

1,3

4,5

1-3-2-4 1,5 (порция

2) 5,0

1,5

0,5

2,5/83,3 (3) 1,5

1,5

1,3

2,5/83,3 (3)

2,5/83,3 (3) 4,5

1-3-2-4 1, 5 (порция

3) 5,0

Стадия ультрафильтрации (включающая в себя 4 операции) 2, 5/25 (10)

2, 5/25 (10)

2,5/3 1,2 (8)

2, 5/31, 2 (8)

2, 5/83, 3 (3) Продолжение табл,2-2

СЧ

1 О

С1 а л

1О О оЪ

С 3

"О

С 4

A л л а

1О

Ю л

ССЪ

1 I

1 о

С 4

1 О

Ю л

»г

СЧ

I Ф

CO!

0Ъ а

1 !

С Ъ

ОЪ

CD л

1 мЪ а

C»l! ! !

С Ъ г

0Ъ а

3/Ъ

Ю л

С4

ЪО а

Ъ»4 а л

Ю л

С»4

С 4

ЪО

Ю О а

ССЪ

С 4

* л

С а О

Ю л

С»4

1 О о

CV а л л а О

CD л

4 о м о

СО

tC! а о!

С»Ъ а л о л

4О

СЧ

ССЪ

O оэ

Сс4 л а

СЭ а

49 о !

СЧ

1 сСЪ о

ССС а! о !! в

) Й! а!

I l g

1» о u

2! ""

1, ) а v!

1 С4

1403990

СО СО 00

С3

О . Л аЪ а

0Ъ О ° а а

ЮЪ °

ССЪ а а

СЪ

1403990

27 б е е е оо

4 Ь

CO о

Ф а о о

-Ф а а

v О

4 е е е оо

Н Н Ъ

Ф м с о о о

ОЪ а

° Ф

CO м

Ю а а м о

ы э 4I оо

М Ъ Ъ о

Ф а о

Ю а

CV и м

ы ы ы оо.

Л Н Ъ М

Ф .Ф

С \ о о

-Ф о О м а о о л

CO а.Ф

Ф а а о

Н М Ъ э э .е е оо

Н Ъ Ъ

lO м а

° о о

00 а

Ф а

ev o

00 а

Ф о о сО а * сч о

N а а

cv O

СО м а о о

О\

CO а а

ы III е ю

4 и ь h м о о а

СЧ а

° О

IO а ъФ м

A е о м а

О а о а с4

CV а и й иЪ м а о о

\Г)

CO а

Ф о м а о

СЧ а

° СЧ а о м сьота йй м о е я о

Ц а л л м сФ ъФ о и

1! г йо айо

)! а ° а о м .Ф л л л

° йч . Ф М ъф

Ф а Д

ыъ й йое

-23

l403990

Ю о о и л о о и л

A о

D о и

h о

Cl о и

h о

D о л о

D о и л

D о. и л

A о о

D л

Ю о о мЪ л

h о

Ю и л о

D л

Ю о

Ю и

h о

D о и л

О о и л

h о

Ю и л о о и л о о

Ю о о

Ю о л

Ю и

h и о и л л

Ю о и л

\» л о

D л

Ъ и л

О о

Ю мЪ л о о о мЪ л о

D и и о

D и л

О о о мЪ

Ю л

D л о

D о мЪ л е 0l

Р 4 0»

Э Э н м Ф

О» О» 4

Р»

» о о л о о и

С- Ъ и л

Ю о

D и л

Ю о

Ю и

О и

@ 4

Ю о л о о о о и О мЪ л л о о

Ю мЪ л

D и л

D о мъ л

О с мъ и

О о и л

Ю о и л ю о о о о о мЪ мЪ л л

D л о о м л

О о .и л

Ю мЪ л

D о и л о о

D мЪ л о о

Ф л о о о л

О о и л

О о о и л

Ю о мЪ . h

Са

Я о о о и л о о о о о мЪ

СЪ о мЪ л

D о мЪ л и л и л

Э а бт ук

8 о и N»Ф

Ь Ь 7

3 в

° Я

Я»Ч м л

»Ч . л

«««««и х х

Ц о

tf о

Э Э r

Ol »S Ф о м мм м

Э Э

4 4 Э - Э Э

О» й» 4 Н,К М

Ра Р» «Ф De и 4 Э Ф Э

О» Р» 4 М,О М

Р» а» sa»

Э Э м м»s э э

Is» la» н м л н

Э» Р» la«

Э Э м м э э Э о, м Н .О 4

Рю Ъм а

М ф 4

)as ! Э I ое ка а

-8Í9å=

s о

5 л 1

32 о Ю

Ю 3

D О

С»

»Ч л о

А о о о о

° D .о о о

О м л

3 л

Ю о

С»

Г 4 л

»л

А. an л о о о о

»Ч

А ь о

h а о о

»л

», о

an л о

D о

О о ч> л о

D о о

С» »Ч

h о

Ю о

h о

О л

D о

С»

A о

С!

»Ч л

D л о

D о

С» о о л

С»

D о о л

Ю о о

4 л

4Ч л

Ю о о о

С!

С» о о

aaI

h о»»» ос ф» л

С»

»» »

Ю о

»»»

h о о о

»»1

D л

С»

D ю

D о о

О (» л

Ю о

С»

С4 л

Ю о о о л

С» о

Cl л

° Cl

h о о о.о о о

»»»

»»ъ о

С»

О ю

D л о

С» л

С»

СЧ л о о о

О Ю о О О

an л л 4 л

v ! g

5I+

8 э!

О о о

»1 л

С» о

СЧ л

D о л

О о

О»

С» о л

Cl о о л

h о о о о о о ,.an ю л л

Ю о о

A о

С»

D сЧ л

D.О о о

ao o

А а/ъ

А о о

A о о

»»

D о о о

Г4 л о

О о

»Ч л

-) СЧ!!

»»»

С»

»Ч л

D о

С»

»4»

А о о л

Щ л

Ю л

Ю о о

О о

О Ю о

С»

»Ч л

С» о о о

»Ч л о

С»

»»»

h о

С»

О л

h о о

Ю о

»»

Cl. о

»/Ъ л

D о

О (4

CV л о

» о

v .л !

aI»

С»

Ю аа4 л

3 о

»Ч

an л о о с о

О О

an. q

Л А

»о л

С»

D и

С» о

СЧ л

D о о

СЧ л о

С» о о л

Cl о о

СЧ

A л

I4 о о (С»

С» о а л

С»

D о л о

D л о

»»»

° Ю ,О о л .и

С» о л

Ю о

С» о

:ч л

»«»! о о о л к

D о (Ч л

Ю о

CV л

Ю о о

an л о

Ю л

Ю о

»»»

О о

° »»

Ю о о о о о о

: !51

i l 3 !

:,(!

«! g A

» а о ю с

4Ч

ЪФ и

) о

+ й! Q о х

»»! и

3j ) а у о ф !

I 4I !

I В! ! (вЂ” -!! вЂ” вЂ” !

»Ч ! !

1403990

aj oov «о о

V X gO IaI

« 6 В

:" Я 3"= о aj

1А! о а

° ф а

Фа ф »И о ,s, и 1 а .. j" > I i

««

j j

j „-А

Р-„" А

Ф»»Ъ Ф г«л м с

° Ia!

34! 403990

1 (»\

1 и

>» о

I» о

I о

b (О л

a»(t а!

v I

o, I а а I 0

8 а

I 1 Й а м о

»о л о

5 и

I о (»

Ol о

5 (о ((i

I»

v (((Р» ( о ж м(оъ»О

a((t( о л л

О»»O о (11

Г Д

I 6(I g ! Р

1»

C) л

1 (I

1 N вЂ” -(й к й

1», » о о юй о"

Мл (((I (a(g а (»»(Ф о

C) о

1 ((;

1» ((( а

1»

v к (»l р о

v о (.:

I o

f I

» 1 а

k (-( мI (I а!

3 о

» и

"".„ i! (»Ъ

1 э ф к

1 Ф Ц (((:ор

I5"

L с»»

Кое био (n Q о» о л л an О о»»О (» л м1 о

0»о т

2 о м1 о

an an n о» »о л. м(м(о о» о л

° Ф (6

g o о (I é

Ф(1

С3 ,»В (» 1

a((1

3 ф

Fl 1

I Ф

1403990

Ю CSC л сЧ

° в

° о

СЧ

1 ф ВСЪ

° Сс O с ° СЧ

В в

Ю о

ЧЭ ЧС в в л

0СС Ос

СЧ

° в

ФФ

1 ф ф ф М1

Q. ф в

° Ф с Ч1 3 в л

1 а

СЧ

1 ф ссс

Сйф в о

CO о сф сф сф ф в о в л

Ю сЧ

1 ф л о

СО о со О в л

00 сЧ

1 ф сс о в с

СЧ

I в

СЧ

1 ф е

g4 в о л

+ о

Е л

CC с в

О сЧ в л о

С о

v о л

СЧ

1 л в

° CV в

Г о л с со сч ! Ю о о л в л в

Ф о савв а хо ес . х а м о с0 сс1 я х 0l 0(а

53и! ф 0

СЧ

Рс

I и и и

3 ф н

3 aЯ ь м f8)

0С О 8 ° ) м со

I" 1 Ìè1

Ссе ф ф г

Рч ф ф о е о ф о

N cc

7 1 (СЧ сс3

СЧ

1 ф ф Ifl о

l асс и

cs а сф сс

52 х 3 а и

0l _#_ 3

01 О ф аg

10Ë Х

С D л съ в в а о

Ф л О с еЪ в в е о

CC с о л с 1 в в

-с ю о

ССс

СЧ

0 сф О в

Щ ССс

СЧ в в э о

° 0 О ос с СЧ в в о о я с 1 в в о о со с ъ

-т о.о

И ссс о с

1403990

Ре С4

) P, о

% о х х

Ц о

tf о а

33М 3а а

kii 3 3 и й и 4 4 й

D о о о л

»о л о

»о л

О о

3 . л о о о

Ю см л

3 ас л

D о о мЪ л

an л

3 л

8 О. С»Ъ С»Ъ л л с} сЪ

- сс} е с}} о мЪ

»/Ъ л

Ф о о о л о о о мъ л о

Ю о мЪ л о о о мЪ л о о л

Ф л о

О о

an л о о о о

»«} с Ъ

A л см л

3 мЪ л

Ю о л л л

3 л

5 л о

an л

Ю о о мЪ л

8 мъ л о о о о

C«a C»} л л

an о

t( о

С}

it !

С Ъ }C}

-, !:i

h о о о мЪ л

Ю л

Ю о о

an л

Ю о о л о

5 л

О о о мЪ л

О о

Рп л

8 3 с»Ъ c»} л о о

3 л о

D о мъ

h о о о мъ л

an л о о л

Ю о л

Ю о

Ю о сч

Cl л

D мЪ л

Ю мЪ л с«>

t о

И сл

0С с»»

I л, л

Ю о о

Cl с»}

Ю мЪ л

Ю о

an л

Cl о л о

Ю мъ л

О о л о

Ю с с л

Ю .о

D о

О л о о о о

С»! 1»Ъ

° «»»

8 мъ л о о о о с 1 л о

Ю мЪ л

Ю о о мЪ л

D о л о о

Ю сч л

8 л

О о

О л

83 о л (»Ъ с»Ъ л л о о

D. D о Ю м\ л

Ю о мъ л

D л о

Ю л

D о о

D, h

8 мъ

С}

Ю о мЪ л

3 .мЪ

}a о о с Ъ с Ъ о о л л

D сч

h о о о мЪ л

Cl о о мъ

h о о

Ю л

Ю л о

Cl л

Ю о о о о с»Ъ л л

О о

»УЪ

О мЪ л о

C»} л

Ю сч л о

° л и !

}ca

D о

Ю л ь

»Сс I л

8 л

3 о о

»Ъ Я л л с}

Ф о

° л

}с

In »л л с»} л

3 8

D о

»/\ л о

Cl о мЪ л о о

3 л

8 ссъ л

O о мъ о л

Ю сч л с»\ С Ъ

« ° л сО

Ю ! о о о

an л

8 мъ мъ л. л

Ю о о

Ю л

3 с»}

I л л о

an л о

an л

О фЪ л

ln л о ф

М ф ф ! v ф

В д a}}

1» }Л Ю

v 5 оф ф

3„..

» (!

}} к

1 .!

С} ф

3 а о

° .a}} } «» }»

Р C}} } O } а! о!

pt В!

Й о}с цц о

„«Ц

}»

Щ 93

Ф1

О с Ъ ф w

}1} Ф г«» с»Ъ

«Ф 1! ! о ф

1 1 ф 1 о с}

-, ) о + 1

Ф. 1

| а l

"„ i .

ca} l с»ъ

В с»}

» (1

Ф ф и!

3 !

1403990

D 3 О Я

5 }.6 б о «аа

}.v

g K a}} а и с! а

3 16=

1403990

Ю о

О о л о

D о о л сч. о а а а * и о а о о о

A о о

Ю о л

D о о . о л о

Ю л л м О а ea ea a еч о Ф

ЮЮ

А о о, Ю

D D ь Ю л л

D л

D ь сч

Ю о

D о (Ч л

Ю о о о л л ej

ei а а л !

Ю о о и л

Ю аеа а а м о о о

Ю о сч

О о

О (ч л

D ъ л о

h о

Ю о

Ю сч л о а а о о

D л л сч

1 а * а

an aЮ о о

h о о о о

СЧ л

Ю о о

D сч л о а а

c4 D

an о л

Ю о о о сч л

Ю о еп л

Ю Ill а а

Фч о e» а

D о

Ю л

Ю о о

D а D и сч л о о

Ю л о а а ° ч о

Ch а о

Ю о

h о

Ю о

Ю о о е л

О an а а . ч О

Ch а о Ф а е о о о о с о л л о е о

it I

3 а ь e e(I(t"th h

3 л (Ч ° О

4 а еа а а

1л e r» еч О л ч о с . а а а а а е - сч О е

Л Ч D а а е ч ч D

О с3 с2 аО

I I t1 а л

<ч,<П е м ъю М ы в6 3 о

Д H 4)h

44 л о м

cv е л л о ф о а. л л о о сл о л

1 с»а! с»а

<Ч

С4

С»

Е»

-Ц о

k( о

Р» о

laa

v ф

1 403990 м an o ц ц р л.а е о а ц g о л а л an o ф ф л а..л Л Ь

Caa ch O а а и о ф в о л а ю а о ц р л!

Способ получения полисахаридов

Патент 1403990