Способ обнаружения энтеробактерий в воде

Способ обнаружения энтеробактерий в воде

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к способам санитарно-бактериологического исследования воды. Цель изобретения - ускорение способа. Для осуществления способа исследуемую воду пропускают через мембранные фильтры, затем непосредственно на поверхность фильтра с микроорганизмами наносят иммунопенициллиназный конъюгат, инкубируют , а затем последовательно наносят субстрат - пенициллин и йодинол в качестве индикатора. Определяют наличие энтеробактерий по исчезновению синей окраски в течение 30 - 50 с. Длительность определения 1,5 - 2ч. 1 з.п, ф-лЫо

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОРИА ЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (sg 4 0 01 N 33/53//С 12 1 04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ /! ;,,/

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (54 ) СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ В ВОДЕ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности (21) 4180156/28-)3 (22) 12,01,87 (46) 30.06.88. Бюл. ¹ 24 (71) Кишиневский государственный медицинский институт (72) В.М.Никитин, В.А.Нахаба и Л.А.Сичинский (53) 616-078 (088.8) (56) Антибиотики и медицинская биотехнология, 1985, № 9, с. 662"665.

„„SU„„1406489 А 1 к способам санитарно-бактериологического исследования воды. Цель изобретения — ускорение способа. Для осуществления способа исследуемую воду. пропускают через мембранные фильтры, затем непосредственно на поверхность фильтра с микроорганизмами наносят иммунопенициллиназный конъюгат, инкубируют, а затем последовательно нано" сят субстрат — пенициллин и йодинол в качестве индикатора. Определяют наличие энтеробактерий по исчезновению синей окраски в течение 30—

50 с. Длительность определения 1,5

2 ч, 1 з.п. ф-лы., 1406489

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к способам санитарно-бактериологического исследования воды.

Цель изобретения - ускорение способа.

Способ осуществляют следующим об" фазом.

Пример 1. Получают сальмо-. 10 неллезный иммуноферментный конъюгат (ИФК): 0,2 мл антисальмонеллеэного (против сальмонелл брюшного тифа) амма-глобулина вносят во флакон с енициллиназой (1 млн ЕД) и затем обавляют 0,05 мл О,l -ного раствора лутаральдегида. Полученную смесь

ыдерживают при +4 С 16 ч, после чефо ее переносят в целлофановый мешочекI подвергают диализу в дистиллирован-2р ой воде в течение двух суток и фиэ- астворе рН 7,0 — сутки. Готовый ИФК роверяют на антительную и фермента1.ивную активность.

Фильтрование исследуемой жидкости: 25 фильтруют через МФ P - 3 7 объемов по

100 мл водопроводной воды, искус"

Ственно зараженной сальмонеллами брюшного тифа в концентрациях от

Д 10 до 3 101 микробных клеток íà 3р

1 мл. Контролем служат две пробы во,фы, незараженные патогенными микро-.

1 организмами„ а также две пробы воды,"

Зараженные другими микробами кишечйой группы (шигеллы Зонне), профильтрованные также через нитроцеллюлоэйые МФ У 3 в тех же объемах.

Постановка иммуноферментной реакции на МФ и учет с помощью йодинола: ембранные фильтры после фильтрации 40 ереносят, не переворачивая, на чистые чашки Петри и на поверхность каж-. дого наносят по 0 05 мл сальмонеллезНого ИФК в рабочем разведении (1

1000).

Закрытые чашки с увлажненными кусочками BBTbt ставят в термостате при

37 С на 1 ч. Затем для удаления несвяэавшегося с бактериями ИФК на мембранные фильтры, уложенные на 8-9 слоев фильтровальной бумаги, наносят по 20-30 мл промывочного фосфатнобуферного раствора рН 7,4 с добавлением твина-80 в разведении 1:5000.

Все мембранные фильтры (опытные и

55 контрольные) переносят в чистые чашки Петри и на них наносят по 0,05 мл пенициллина, иМкубируют при 37ОС на

10 мин, затем наносят по 0,05 мл йодинольного индикатора и сразу учитывают результаты. В положительных случаях синяя окраска йодинольного индикатора на фильтре исчезает в течение

30-50 с, а в отрицательных и конт" рольных пробах исходная окраска сохраняется в течение более 5 мин. Результаты учета иммунопенициллиназного метода при его постановке на мембранных фильтрах и оценке с помощью йодинольного реагента показывают, что предлагаемый способ позволяет в течение не более 1,5-2,0 ч определить в исследуемой жидкости концентрацию микробов не менее 3 х 10 микробных тел/мл, что во времени значительно превосходит классический иммунопенициллиназный метод (19"25 часов), Пример 2. Предлагаемым и известным способами параллельно испытаны 35 сточных вод на различных этапах очистки в которых бактериологическим методом обнаружены сальмонеллы: S.typhimurium - 20, $.Хна - 3, S.Canada — 1, S,Wirhov — 3, S.ЫГапtis — 2, $.ашегзГоог - 3, $.mancester (С ) - 2, S.london - l.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что уже через 1,5 ч обнаружены сальмонеллы. во всех пробах сточных вод (100 ) с помощью предлагаемого метода, в то время как при использовании прототипа результаты получают через 25 ч, Формула и з о б р е т е н и я

1. Способ обнаружения знтеробактерий в воде, включающий концентрирование микроорганизмов, соединение их с иммунопенициллина.зным конъюгатом, инкубирование, последовательное добавление субстрата и индикатора и учет результатов реакции по изменению окраски, о т л и ч а ю щ и й— с я тем, что, с целью ускорения способа, концентрирование осуществляют путем пропускания через мембранный фильтр и реакцию проводят непосредственно на фильтре, на который наносят реагенты.

2, Способ по п,l, о т л и ч а ю— щ и и с .я тем, что.в качестве индикатора используют йодинол.