Способ определения терморезистентности изолированных из печени крыс лизосом

Способ определения терморезистентности изолированных из печени крыс лизосом

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биохи- iии и касается исследований клеточг ных структур. Целью изобретения является упрощение способа. Способ заключается в следующем. Фракцию лизосом, полученную из печени крыс, инкубируют в 0,7 М,растворе сахарозы с рН 6 с ЭДТА при 15-30 С и о.температурной чувствительности судят по скорости понижения оптической плотности суспензии лизосом. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

А1 (191 (П) (sg 4 G.01 N 33/483

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4070989/31-13 (22) 22,05.86 (46) 15.07.89. Бюл. Р 26 (71) Университет дружбы народов им. Патриса Лумумбы (72) С П. Сяткин и В. А. Фролов (53) 591.81(088.8) (56) Покровский А. А. Лизосомы, М., 1976, с. 312 °

Функциональная морфология клетки.

/Под ред, М. H. Мейселя. М., 1963, с. 404, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕРМОРЕЗИСТЕНТНОСТИ ИЗОЛИРОВАННЫХ ИЗ ПЕЧЕНИ

КРЫС ЛИЗОСОМ (57) Изобретение относится к биохимии и касается исследований клеточ:" ных структур. Целью изобретения является упрощение способа. Способ заключается в следующем. Фракцию лизосом, полученную из печени крыс, инкубируют в 0,7 М,растворе сахарозы с рН 6 с

ЗДТА при 15-30 С и о..температурной чувствительности судят по скорости понижения оптической плотности суспензии лизосом. 3 табл.

1409926

Изобретение относится к биохимии и касается исследований клеточных структур.

Цель изобретения — упрощение спо5 соба.

Экспериментальные данные, доказьгвающне оптимальность значений молярности и рН раствора сахарозы и температуры инкубационной среды, приведены в табл. 1 — 3. (Из табл. 1 видно, что при моляр:ности раствора сахарозы выше 0,7 М разрушения лиэосом при инкубации в указанных условиях не происходит.

Из табл. 2 видно, что только при значении рН инкубационной среды, равном.6, разрушение лизосом при инкубации в указанных условиях не происходит. 20

Из табл. 3 видно, что максимальной д7 была в диапазоне температур от 15 до 30 С, Следовательно, этот интервал температур инкубационной среды следует считать оптимальным, поскольку изменения термочувствительности в нем были максимальными.

Способ осуществляют следующим образом, Обогащенную фракцию лиэосом полу- 30 чают дифференциальным центрифугирова-. .нием гомогената печени крыс,. реэуспендируют в 0,7 М растворе сахарозы, рН 7 до концентрации лизосомного белка 3-5 мг/мл и используют в качестве исходной суспензии. Последнюю добавляют к предварительно нагретому до

15-30 раствору 0,7 М сахарозы, рН. 6 с 1 мМ ЭДТА таким образом, что начальная величина. зкстинкции составляет щ около 0,4. Скорость разрушения лизосом измеряют по скорости снижения поглощения при 520 нм (ЬА /мин) при инкубации проб в указанных условиях в течение 1 мин в 1 см термостатированной кювете на регистрирующем спект" рофотометре ДУ-8Б фирмы Белман (СНА).

Пример. В работе используют интактных самцов беспородных белых крыс массой 120-180 r, после 48 ч голодания. Печень берут у декапитиро" ванных животных. Обогащенную фракцию лизосом получают дифференциальным центрифугированием. Далее определение термочувствительности лизосом провоS5 дят согласно предлагаемому способ.у. Исследуют влияние инкубирования исходной суспензии изолированных лизосом при 0-4 в течение 24 ч,на термо-. резистентность этих частиц. Значения температуры инкубированнай среды составляют в интервале от 10 до 50 С.

Таблица 1.

-Влияние молярности раствора сахароэы на стабильность изолированных лизосом

Молярность раствора Степень разрусахарозы, М шения лизосом, Х

0

48

57

098

0,7

0,6

0 3

0,25

Пр и м е ч ан не: инкубацию проб проо водят при 15 С в растворе сахарозы указанной молярности, рН 7 в течение 1 мин, Таблица 2

Влияние кислотности инкубационной среды на стабильность изолированных лизосом

Степень разрушения лизосом, Ж рН инкубационной среды

7,2

22

П р и и е ч а н и е: инкубацию проб проводят при 10,5 в 0,7 М растворе сахарозы при указанных значениях рН в течение 1 мнн.

Формула и эобр етения

Способ определения терморезистентности изолированных из печени крыс лизосом путем инкубации их в растворе сахароэы с ЭДТА, о т л и ч а.ю щ и йс я тем, что, с целью упрощения способа, инкубацию производят в

0,7 N растворе сахарозы с рН 6 при

15-30 С и о температурной чувствительности судят по скорости понижения

Оптической плотности суспензии лизосом.

1409926

Таблица 3

Зависимость терморезистентности изолированных лизосом от температуры инкубационной среды

Изменение терморезистентности изолированных лизосом мин

Температура инкубационной сре ды, C

0 5

l5

30

50 — П р и м е ч а н и е: терморезистентность изолированных лизосом определяют по скорости их разрушения при инкубации проб при указанной температуре инкубационной среды в 0,7 М растворе сахарозы, рН 6 в течение 1 мин. Скорость разрушения лизосом, как функции от температуры инкубационной среды до (Ч ) и после (V ) дополнительной инкубации частиц при 0-4 в течение 24 ч используют для расчета ьЧ= V„- V,.

Составитель Г, Марченко

Редактор И. Касарда Техред М.Дидык Корректор М. Шароши Заказ 3474/40 Тираж 847 Подписно е

BHHHIlH Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий .

133035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4