Способ количественного определения формононетина в растительных материалах

Способ количественного определения формононетина в растительных материалах

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к химическим способам анализа формононетина в растительных материалах и продуктах их переработки. Целью изобрете-t ния является повышение чувствитель, ности и точности определения. Из навески растительного материала этанот лом извлекают фенольные соединения, упаривают экстракт до водного остатка , последний очищают петролейным эфиром, упаривают досуха, гидролизуют 10%-ной серной кислотой. Из гидролизата извлекают этилацетатом фенольные соединения, разделяют их в тонком слое силикагеля с использованием подвижной фазы.состава хлороформ-мета-Нол-вода в соотношении (93-97): :(7-3):(0,5-1,5). Формононетин удаляют с хроматограммы и флуориметри- ( «б 254 нм; 1„,„„ 450 нм) с добавлением к анализируемому раствору 0,03-0,21 мл 0,05 М раствора гидроксйда натрия в метаноле. Чувствительность определения формононетина составляет 0,4-1,О мкг/г. (Л

СОЮЗ СОВЕтСНИХ соцИАлистичесних

РЕСПУ БЛИН (191 (11) А1 иВ4001ыз

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4161 902/30-13 (22) 15.1 2.86 (46) l5.07.88.Áþë. II 26 (71) Украинский научно-исследовательский институт птицеводства (72) А.Д.Рошаль (53) 581 .1 92 (088 .8) (56) А.В.Beck, Aus(:, g.Agric, Res., 1964, 15, 223-230.

Агаев Ф.Н. и др. Физиология и биохимия культурных растений, 1984, т.16, Иу 1, с.46-52, (54) СПОСОБ .КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОРМОНОНЕТИНА В РАСТИТЕЛЬНЫХ

МАТЕРИАПАХ (57) Изобретение относится к химическим способам анализа формононетина в растительных материалах и продуктах их переработки. Целью изобрете-1 ния является повышение чувствитель . ности и точности определения. Из навески растительного материала этано-1 лом извлекают фенольные соединения, упаривают экстракт до водного остатка, последний очищают петролейным эфиром, упаривают досуха, гидролизуют 107.-ной серной кислотой. Из гидро". лизата извлекают этилацетатом фенольные соединения, разделяют их в тонком слое силикагеля с использованием подвижной фазы состава хлороформ-мета-" нол-вода в соотношении (93-97):

:(7-3):(0,5-1,5). Формононетин удаляют с хроматограммы и флуориметри" руют (ьэзв - »4 нм; „„у

450 нм) с добавлением в аналнвнруемому раствору 0,03-0,21 мл 0,05 М раствора гидроксйда натрия в метаноле.

Чувствительность определенна формононетина составляет 0,4-1,0 мкг/г. а

1409938

268 С Y (Ф-Фу) а ° (Ф, — Ф,) (I

Изобретение относится к химичес,ким методам анализа изофлавоноидов ,в растительных материалах и продуктах

| ,их переработки и может быть исполь5 зовано для анализа формононетина и .его гликозида — ононина в кормовых ( травах, и белковых концентратах из сока трав, в фармацевтических препа ратах, при селекции люцерны и клевера по химическому составу и определении их экстрогенной активности.

Цель изобретения — повышение чувствительности и точности способа, Проводят экстракцию фенольных сое 15 динений смесью этанола и воды, упари вание, очистку и гидролиз экстракта,, реэкстракцию флавоноидов органическим„ растворителем, хроматографирование ! экстракта на пластинке со слоем си- 20 ликагеля в подвижной фазе, элюирование формононетина с пластинки. В качестве подвижной фазы используют . систему растворителей хлороформ — ме,танол — вода при объемном соотноше" 25 нии компонентов (93-97):(7-3):(О 51,5), а количество формононетина оп-. ределяют флуориметрическим способом после добавления к элюату 0,03—

0,21 мл 0,05 М раствора гидроксида 30 натрия в метаноле.

При флуориметрировании элюата используют фильтр возбуждения

254 нм, фильтры пропускания 450 нм. Чувствительность определения формононетина составляет от 0,4 до 1,0 мкг/г.

Пример 1. Определение содер,. жания формононетина в растительной

/, муке. с10

Навеску люцерновой муки 10 г экстрагируют. 40-50 мл 90Х-ного этанола на глицериновой или водяной бане (t 60-70 С) в колбе с обратным холодильником в течение 20-30 мин. 45

Извлечение повторяют 4-5 раз. Полученные экстракты объединяют, отфильтровывают и упаривают до водного остатка. Последний очищают в делительной воронке петролейным эфиром 56 порциями (по 50 мл) до тех пор, пока органическая фаза не становится бесцветной или слабо-желтой. Очищенный водный остаток упаривают на роторном вакуумном испарителе досуха, гидролизуют его при нагревании в те55 чение 3 ч с 5-10 мл 10Х-ной серной кислоты. Агликоны фенольных соедине, ний извлекают из гидролизата 5-6 порциями этилацетата. Этилацетатные экстракты объединяют, упаривают досуха, растворяют в 5 мл метанола. Аликво" ту 0,01 мл метанольного раствора наносят в виде полосы на хроматографическую пластинку "Силуфол", предварительно промытую метанолом и активи" рованную нагреванием в течение 30мин при 120 С.

Разделение проводят в камере с насыщенной атмосферой в системе растворителей хлорофом — метанол — вода (95:5:1). По окончании разделенйя пластинку сушат на воздухе 5-10 мин, на 1-2 мин опускают в камеру, насыщенную парами аммиака, а затем облучают УФ-светом Я = 253 нм. Формононетин обнаруживают по светло-голубой флуоресценции с помощью метки-свидетеля или по величине К 0,27 0,02, Флуоресцирующую в УФ-свете полосу очерчивают. Соскребают силикагель с анализируемым веществом с 1роматограV фической пластинки и .заливают 5 мл химически чистого метанола.- Смесь периодически встряхивают. Адсорбент выдерживают в контакте с растворителем в течение 12-15 ч. Затем силикат гель отделяют, используя мелкопористый бумажный фильтр. Добавляют к фильтрату 0,05 мл 0,05 М раствора

Na0H в метаноле и измеряют флуоресценцию полученного раствора. Проводят аналогичные процедуры для растворов сравнения — стандартного и фонового.

Содержание формононетина в растительном сырье определяют по формуле; где Х вЂ” содержание формононетина в растительном сырье, мг/г;

286 — молекулярная масса формононетина;

7 — объем метанола для растворения сухого остатка суммы фенольных соединений ((5 мл)

Cö — концентрация стандартного раствора, моль/л; а — навеска растительного материала, г;

Ф вЂ” интенсивность флуоресцен-, ции исследуемого раствора;

Ф вЂ” интенсивность флуоресценции стандартного раствора;

Ф вЂ” интенсивность флуоресценУ ции фонового раствора, 9938

2 7 268 С о (Фа- Фп) или Х„„ а (Фо- Ф ) 5 где Х,„ общее содержание формононетина (гликозид + агликон, раствор А); содержание свободного формононетина (агликон, раствор Б); содержание гликозида фор— мононетина-анонина; интенсивность флуоресценции раствора А; интенсивность флуоресценции раствора Б (после обработки, так же, как в примере 1, исключая стадию

rидролиза) Хп

ОНОНИН

Фо рмул а изобретения

Составитель Н.Костюнина

Редактор И.Касарда Техред М.Дидык Корректор М.Пожо

Заказ 3474/40 ° Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4!5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 140

Пример 2. Приготовление стандартного и фонового растворов сравнения.

:0,1 мл раствора формононетина известной концентрации наносят на пластинку и подвергают хроматографическому разделению,, так же; как в примере 1 . Все последующие процедуры проводят так же, как и для исследуемых экстрактов.

Фоновый раствор приготавливают по указанной методике из чистого силикагеля, удаляемого с пластинки с площади, примерно равной площади полос формоноиетина на исследуемых хроматограммах. Использование фонового раствора необходимо при измерениях на однолучевых флуориметрах. В двулучевых приборах фоновые растворы использовать не нужно: флуоресценции растворителя, кюветы и примесей силикагеля учитываются автоматически.

Пример 3. Одновременное определение количества формононетина и ононина (7-глюкозида формононетина).

Извлечение фенольных соединений и

1 очистка экстракта от липидов и хлорофиллов проводятся так же, как в примере 1. Очищенный экстракт упаривают до 20-30 мл, количественно переносят в мерную колбу на 1 00 мл, доводят этанолом до метки и разделяют полученный раствор на две равные части А и Б.

Часть А упаривают досуха и гидролизуют. Затем повторяют все опера ции указанные в примере 1. Часть Б обрабатывают в той же последовательности, за исключением стадии гидролиза, Обнаруженное в растворе Б количество изофлавона соответствует содержанию в растительном сырье свободного формононетина — агликона, Количество ононина вычисляют по формуле

Способ количественного определения формононетина в растительных материалах, включающий экстракцию фенольных соединений смесью этанола и воды, упаривание,,очистку и гидролиз экстракта реэкстракцию флавоноидов органическим растворителем,. хро"

Ф матографирование. экстракта на пластинке со слоем силикагеля в подвиж" ной фазе, содержащей хлороформ, элюирование формононетина с пластинки с последующим количественным опредеЗБ лением, а т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повьппения чувствительности и точности способа, в качестве подвижной фазы используют систему

40 растворителей хлороформ — метанол— вода при объемном соотношении компонентов (93-97):(7-3) :(0 5-1,5), а количество формононетина ойределяют флуориметрическим способом после до» бавления к элюату 0,03-0,21 мл 0,05 М раствора гидроксида натрия в метано.ле.