Способ получения экзотоксина а синегнойной палочки

Способ получения экзотоксина а синегнойной палочки

Реферат

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в вакцинно-сывороточном деле. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта, а также интенсификация способа. Сущность способа заключается в том, что токсигенную культуру выращивают в модифицированной питательной среде на основе бульона Мартена, при этом в первые часы подращивание и культивирование ведут при концентрации O₂ 70 - 90% от насыщения, а спустя 3 ч процесс культивирования ведут при концентрации O₂ 20 - 30% от насыщения. Слив культуральной жидкости проводят через 8 - 10 ч культивирования и осветляют целевой продукт микрофильтрацией. Способ осуществляют как периодический, так и многоциклический процессы. Активность экзотоксина А 800 LD₅₀/мл производительность способа 4 л/ч. 1 з.п.ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к медицинской микробиологии, касается способа получения экзотоксина А синегнойной палочки, который может служить антигеном при создании диагностических препаратов с целью изучения патогенеза синегнойной инфекции, а также в атоксической форме может быть использован в качестве компонента ассоциированной вакцины для профилактики и лечения инфекций, обусловленных Рs.aeruginosa. Цель изобретения повышение выхода целевого продукта, а также интенсификация способа. П р и м е р 1. Состав среды: бульон Мартена 7,5 л глицерин 7,5 мл (1%) глюкоза 15 г (0,2%) глутамат натрия 69 г (0,05 М) Условия подращивания: температура 32^оС перемешивание 500 об/мин воздух 14,7 л/мин (840 м²/ч) Для подращивания в ферментере вносят 1,5 л питательной среды указанного состава, 1 мл антифомсилана, 60 мл суспензии микробных клеток Ps.aeruginosa РА-7 с концентрацией 50 х 10⁹ м.кл/мл среды. Выращивают 3 ч при указанных условиях, обеспечивающих 70-90% насыщения среды кислородом, до содержания 10-12x x10⁹ м.кл в 1 мл. После этого в ферментер добавляют еще 6 л свежей питательной среды, получают исходную концентрацию микробных клеток 1,5-210⁹ в 1 мл и культивируют первые 3 ч при тех же условиях, что и при подращивании, далее процент насыщения кислородом поддерживают на уровне 20-30% Через 8 ч количество клеток достигает 20-2410⁹ в 1 мл, активность экзотоксина А 800 LD₅₀ с наличием четкой полосы преципитации с моноспецифической сывороткой в разведении 1:32 и в реакции латекс-агглютинации 1:512 1:1024. П р и м е р 2. Способ осуществляют в соответствии с примером 1, но для проведения многоциклического процесса производят слив только половины реактора и доливают равным объемом свежей питательной среды. Через 2 ч, когда активность токсина достигает 800 LD₅₀, производят следующий слив половины объема реактора и процесс многократно повторяют. При этом за 20 ч можно провести 5 циклов и получить 3 реакторных объема экзотоксина А с активностью 800 LD₅₀. Очистку полученной культуральной жидкости производят на плоскорамных микрофильтрационных установках типа "Pellicon", в которые заложено 0,3 м микропористых капроновых мембран размером пор 0,2 мкм. Производительность установки по продукту 4 л/ч. Результаты изучения свойств культуральной жидкости представлены в таблице. Активность токсина оценивают в биологической пробе на белых беспородных мышах массой 18-20 г путем внутрибрюшинного введения 1 мл ряда серийных разведений осветленной культуральной жидкости в реакции преципитации в агаре с моноспецифической сывороткой, в реакции латекс-агглютинации. Предлагаемый способ обладает высокой производительностью, превышающей в 2-3 раза производительность известного способа, технологичен и безопасен. Получаемый целевой продукт имеет высокую активность (800 LD₅₀). Известный способ позволяет получать экзотоксин с активностью 100-200 LD₅₀/мл, четкая линия преципитации в агаре с моноспецифической сывороткой в разведении 1:8.

Формула изобретения

1. Способ получения экзотоксина А синегнойной палочки путем подращивания токсигенной культуры в жидкой питательной среде на основе бульона Мартена в присутствии глицерина и глютамата натрия с последующим пересевом и культивированием в среде того же состава в условиях аэрации и перемешивания, сливом культуральной жидкости, выделением и очисткой целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, подращивание культуры проводят в течение 2,5 3 ч при посевной дозе на стадии подращивания и культивирования 1,5 2 10⁹ мкл/мл среды, подращивание и культивирование осуществляют в присутствии 0,1 0,2% глюкозы при поддержании концентрации кислорода в течение первых трех часов на уровне 70 90% от насыщения среды, а затем в процессе культивирования концентрацию кислорода поддерживают на уровне 20 30% от насыщения, слив культуральной жидкости для выделения целевого продукта проводят через 8 10 ч от начала культивирования, а очистку проводят путем микрофильтрации на макропористых капроновых мембранах. 2 Способ по п.1, отличающийся тем, что, с целью интенсификации способа, осуществляют слив половины культуральной жидкости для выделения целевого продукта, оставшийся объем культуральной жидкости доводят до исходного объема путем долива питательной среды и последующие сливы и доливы проводят через 1,5 2 ч.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2

MM4A - Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 11.09.2003

Извещение опубликовано: 10.07.2008        БИ: 19/2008