Способ получения гиббереллина

Способ получения гиббереллина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

« ъ

1 и

1.»: ):

Класс ggh 1в,.» № 141352

СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Подппсна» грпппп Л 788

M. Н. Нестюк, Б, Б, Дендзе-Плетман. Н. В. Ионова, P. И. Иофо, Г. И. Клейнер, Б. Ф. Кравченко, P. Л. Крутова, Г. С. Муромцев и Н. В. Русанова

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИББЕРЕЛЛИНА

Заявлено 24 декабря 1960 г. 3a ¹ 690378/23 в Комитет ио делам изобретений и открытий при Совете MIIHllcTpoB СССР

Оиубликоваио в «Бюллетене изобретений» ¹ 18 за l961 г.

Известные способы получения гиббереллина предусматриваюг в качестве источника азота для его биосинтеза виннокислый аммоний, а в качестве элуирующих растворителей при выделении гиббереллина метанол + аммиак, ацетон, ацетон + аммиак.

Существенным недостатком этих способов является дороговизна и дефицитность азота, а также токсичность и взрывоопасность применяемых растворителей.

Предлагаемый способ позволяет заменить дорогое, дефицитное, токсичное и взрывоопасное сырье и заключается в том, что в отличие от известных способов, глубинное культивирование штампов гриба

Fusarium moni1iforme производят на ферментационной среде, состоящей из сахара, ацетата аммония, кислого фосфата калия, сульфатов калия и магния и кашалотового жира при температуре 27 — 28 и значении рН = 6,8 — 7,2. Последующее выделение гиббереллина осуществляют адсорбцией на активированном угле и затем десорбцией смесью бутанол— вода и экстракцией слабым раствором бикарбоната натрия и этила цета том.

Пример 1. Подготовка посевного материала.

Небольшое количество исходной культуры (штаммы С вЂ” !4, 8 — 8 или 8 — 10 из коллекции ВИУА ВАСХНИЛ) с агаризованной синтетической среды засевают в колбы, содержащие 100 мл стерильной культу.ральной среды следующего состава (г/,г): сахар пищевой 25,0; аммоний виннокислый 7,0; калий фосфорнокислый однозамещенный 2,0; магний сернокислый 0,2; калий сернокислый 0,2; смесь микроэлементов

1 0 мл, Культура выращивается в колбах на ротационной качалке при

28, после чего 3 мл жидкой культуры стерильно переносят в стеклянный флакон, содержащий полуразваренное стерильное пшено. Проращивание производят в термостате при 27 на протяжении 5 суток, после чего флаконы с содер.кимым подвергают вакуумной сушке при остаточном давлении 10 — 15 .чм рт. ст. и 25 до оста гочнoи вместимости, не превышающей 7%.

Пример 2. Ферментация.

Небольшое количество пшена с конидиями продуцента вносят в колбу, содержащую 100 ял стерильной среды вышеуказанного состава и продуцент выращивают 48 час на ротационной качалке при 28 . Содержимое колбы передается на инокулятор — ферментер, содержащий

26 л стерильной питательной среды того же состава. Инокулирование производят при перемешивании со скоростью 300 об/мин и продувании

26 л воздуха в минуту, температура регулируется по уровню 27+ 1 .

После 48 час роста инокулит в количестве 10% передают в ферментер для получения гиббереллина. Питательная среда содержит (г/л): сахара пищевого 40,0, аммония уксуснокислого 5,8, калия фосфорнокислого однозамещенного 2,0, калия сернокислого 0,2, магния сернокислого 0,2; раствора микроэлементов I мл, кашалотового жира 5,0; рН вЂ”вЂ”

==6,8 — 7,2. Выращивание производят при температуре 27+1, перемеIIIHBBHHH 400 об/лен. аэрации 1,5 ооъема воздуха на 1 объем среды в м инуту.

3. Выделение активного кристаллического препарата

36 л отфильтрованной культуральной жидкости подкисляют 2н. НС1 до рН=2,5 и адсорби руют активное начало при перемешивании в течение 2 час с активированным углем. Отфильтрованный уголь промывают 1 л дистиллированной воды при отсасывании и элуируют 2,5 л смеси, состоящей из 25 объемных ч. бутилового спирта, 73 ч. воды и

2 ч. 20%-ного водного аммиака. После 8 час перемешивания добавляют к суспензии 125 мл 1 н. раствора однозамещенного фосфорнокислоТо калия, 23 лсл 25%-ного раствора хлористого кальция и отфильтровывают на нутгфильтре. Для повторного элуирования обрабатывают отфильтрованный у оль 0,8 л щелочной смеси бутанола с водой вышеуказанного состава. Объединенные элуаты подкисляют 2 н. НС1 до рН=2, добавляют 2,5% хлористого натрия, после разделения фаз отделяют слой растворителя, а водную фазу повторно экстрагируют 0,5 л бутилового спирта. Ооъединенный бутанольный экстракт обрабатывают последовательно 0,4%, 0,3% и 0,2%-ными растворами оикарбоната .натрия, используя для каждой экстракции 0,2 объема. Объединенный водный экстракт подкисляют 2н. НС1 до рН=2,5 и трижды экстрагируют этилацетатом по 0,2 обьема (от органической части раствора).

Зтилацетатный раствор обезвоживают гранулированным хлористым кальцием, отфильтровывают и отгоняют растворитель при остаточном давлении 10 мм рт. ст. до начала кристаллизации. В результате выделяют 3,5 г бесцветных кристаллов с т. пл. 223 — 224 и удельным вращением (а) = + 76 . Концентрированием маточника получено сще в

0,34 г вещества с т. пл. 220 — 222, вращением ((- „" =+ 76 . Концентрированием маточника получено еще ОЛ4 г вещества с т, пл, 220 — 222, вращением (n("- -70 .

Пред.!ет изобp тения

Способ получения гиобереллина путем глубинного культивирования штаммов Fusarium moniliforme на аитательной среде, содержащей источники азотного и углеродного питания, отличающийся тем, что, с целью расширения сырьевой базы, в качестве источников азотного и углеродного питания, используют сахар, кашалотовый жир и ацстат аммония при нейтральном значении рН, Ле 141352

Описание составил И. М. Петров

Редактор С. А. Барсуков Те. рсд А. A. Кагиыгнникова Коррекrop И. А. Шпынек

Формат бум. 70Х 108,,в

Тираж 500

11БТИ ири Комитете по делам изобретений и открытий при Совете Министров C(:ÑÐ

Москва, Центр, М. Черкасский иср., д. 2!6

Объем 0,26 изгь .в

Цена 5 кон

11одп. к ивti. 25.1Х-61 г ак. 9267

Типография ЦБТИ Комитета ио делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР. Москва, Петровка 1-1.

2. Спосоо по и. 1, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода, гиббереллин выделяют из культуральной среды путем сорбции на активированном угле с последующей десорбцией смесые бутанол — вода H экстрагируют этилацетатом.