Способ определения антиэритроцитарных антител в сыворотке крови животных

Способ определения антиэритроцитарных антител в сыворотке крови животных

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к иммунологин. Цель изобретения - повышение чувствительности способа. Мышам вводят эритроциты барана. Затем внутрибрюшинно животным вводят раствор С-глицина. Через 24-60 ч у животных производят забор крови. Сьшоротку крови разводят и инактивируют. Эритроциты барана добавляют в лунки с сьшороткой крови, инкубируют и центрифугируют .- Радиоактивность антиэритроцитарных антител измеряют с помощью СЦИНТШ1ЛЯЦИОННОГО р-спектрометра о -

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОцИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (5р 4 G 01 N 33/534

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н A BTOPCHOIVIY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР . ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3747799/28-14 (22) 05.06.84 (46) 23.08.88. Бюл. Р 31 (71) Институт биоорганической химии

АН БССР (72) Б.Б. Кузмицкий, fO.Ë. Журавков и А.Л. Журавков (53) 615.375(088.8) (56) Зигепь Э. Иммунологические методы. M.: Мир, 1979. с. 108-112. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИЭРИТРОЦИТАРНЫХ АНТИТЕЛ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

ЖИВОТНЫХ

ÄÄSUÄÄ 1418617 А1 (57) Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения — повьппение чувствительности способа. Мьппам вво" дят эритроциты барана. Затем внутрибрюшннно животным вводят раствор

1 С-глицина ° Через 24-60 ч у животных производят забор крови. Сыворотку крови разводят и инактивируют °

Эритроциты барана добавляют в лунки с сывороткой крови, инкубируют и центрифугируют.- Радиоактивность антиэритроцитарных антител измеряют с помощью сцинтилляционного р -спектрометра.1418617

Формула изобр ет ения

Составитель М. Васильев

Техред Л. Олийнык Корректор В. Романенко

Редактор С. Пекарь

Заказ 4 147/41

Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r, Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для определения антиэритроцитарных антител в сыворотке крови животных.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа за счет метки антител in viva радиоактивной аминокислотой C-глицином и подсчета радиоактивности комплекса меченые антитела — эритроциты в сцинтилляционном счетчике.

Пример 1. Трехмесячных мышей линии СВА массой 20-22 г иммунизировали,внутрибрюшинно Ьведением

2 10 эритроцитов барана в 0,2 мп раствора натрия хлорида. Через 72 ч после иммунизации в хвостовую вену животных вводили раствор 1 С-глицина из расчета 1 мкКи/г массы животного. 20

Спустя 60 ч после введения радиоактивной аминокислоты из заднеорбитального синуса животного пастеровской пипеткой забирали 0,5 мл крови. Полученную сыворотку разводили в 4 раза 0,02 М 25 фосфатным буфером с рН 7,4 на 0,15 M раствора натрия хлорида и инактивиро вали в течение 30 мин при 56 С. По

0,1 мп приготовленной таким образом сыворотки вносили в лунку 96-ячееч- 30 ного пластикового микротитратора для иммунологических реакций с круглым дном. Затем в ту же лунку добавляли

0,1 мл 57.-ной взвеси эритроцитов барана и инкубировали 2 ч при 20 С.

После инкубации эритроциты трижды отмывали центрифугированием (по 5 мин при 1500 об/мин на центрифуге OIIH-1) в 0,02М фосфатном буфере с рН 7,4 на

0,15 М растворе натрия хлорида и пе- 40 реносили в счетные флаконы, содержащие

1 мп сцинтилляционной жидкости. Радиоактивность антиэритроцитарных антител, содержащихся в исследуемом образце сыворотки и присоединившихся к зрит-4 роцитам, измеряли с помощью сцинтилляционного р -спектрометра и выражали в имтт./мин, В этих условиях среднее количество . антител (6 животных) составило

25331,7 + 19,807 имп/мин.

Пример 2. Иммунизацию мышей и подсчет количества антител проводили, как описано в примере 1, но вводили

" С-глицин в дозе 5 мкКи/г за 24 ч до взятия крови и испольэовали 107-ную взвесь эритроцитов.

В таких условиях количество антител составило (среднее из 6 животных)

14002,4 + 19,946 имп/мин.

Пример 3. Иммунизацию мышей и подсчет количества антител проводили, как описано в примере 1, но вводили т С-глицин в дозе 2,5 мкКи/г за

48 ч до взятия крови и использовали

10Х-ную взвесь эритроцитов.

В этих условиях количество антител составило (среднее из 6 животных)

13162, 5 + 62, 0 имп/мин.

Способ определения антиэритроцитарных антител в .сыворотке крови животных, включающий забор крови,. выделение из нее сыворотки, термоактивацию и инкубацию сыворотки с эритроцитами, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности спо-, соба, перед забором крови за 24-60ч . в вену вводят раствор аминокислоты 4 С-глицина в дозе 1 "5 мкКи/г массы тела, а инкубацию сыворотки осуществляют с равным объемом отмытых изотоническим раствором при рН 7,2-7,6.

5-10Х-ной взвесью эритроцитов, далее измеряют радиоактивность и по ее величине определяют количество антиэритроцитарных антител.