Способ распознавания генотипов самоопыленных линий кукурузы

Способ распознавания генотипов самоопыленных линий кукурузы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к селекции и семеноводству. Целью изобретения является повышение точности способа. Распознавание генотипов самоопыленных линий кукурузы проводится изозлектрофокусированием запасных белков, извлеченных спиртовым раствором мочевины из эндосперма, определением изозлектрических точек белковых компонентов, группированием их по субфракциям и составлением белковых фор- .мул, 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

„„SU„„142307

15Р 4 А 01 Н 1/06

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ н двт0РснамЪ СеиДатвъствм гООудАРС"ЩЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ГЮ ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTH4 (21) 4216436/30-13 (22) 06.02.87 (46) 15.09.88. Бюл. Ф 34 (71) Казахский научно-исследовательский институт земледелия им.В.P.Âèëü" ямса (72) И.И.Савич и 10.В. Перуанский (53) 543.548(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Я 1194333, кл. А 01 Н 1/06, 1985.

I (54) СПОСОБ РАСПОЗНАВАНИЯ ГЕНОТИПОВ

СОИООПЫЛЕННЫХ ЛИНИЙ КУКУРУЗЫ (57) Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к селекции и семеноводству. Целью изобретения является повыаение точности . способа. Распознавание генотипов самоопыленных линий кукурузы проводится изоэлектрофокусированием запасных белков, извлеченных спиртовым раствором мочевины Hs эндосперма, определением изоэлектрических точек белковых компонентов, группированием их по субфракциям и составлением белковых фор.мул. 1 табл.

1423070

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к селекции и се меноводству, и может быть использовано научными учреждениями при создании и паспортизации самоопыленных линий кукурузы, Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ заключается в том, что ин- дивидуальная зкстракция белков из эносперма индивидуальных зерен прово-" ится на 2-3 зернах спиртовым раствором мочевины, изоэлектрофокусирование елков осуществляется в полиакрилмидном геле, содержащем 6 моль мочеины и 2% амфолитов-носителей рН 4-9, то позволяет разделить белки на 3 убфракции: М., P, g с последующим опеделением изоэлектрических точек ком- 0 онентов по белкам-маркерам и составением стабильных характеристик форул для каждой самоопыленной линии.

Способ осуществляется следующим

1 бразом. 25

Испольэовали различные самоопыленre линии кукурузы: Грушевская 380„

Г-192, ВИР 133 ТС, НО-14, НО-16, НО-139.

Белок из трех индивидуальных эндо- 30 пермов зерна кукурузы выделяют по едующей методике: растерный эндопери заливают 10-кратным количеством ,0%-ного этанола с 2 моль мочевины

Й выдерживают 30 мин при комнатной ч емпературе, а затем 60 мин при 60 С.

Раствор белка (объем 0,025 мл) наЦосят на 5%-ный полиакриламидный плас-. .тинчатый гель, содержащий 6 моль мочев4ны и 2% амфолитов-носителей рН 4-9, @ . размером 100х200х0,5 ьж. Католитом служит 0,5 М раствор едкого калия, анолитом — 0,5 М раствор фосфорной кислоты. Яа параллельную дорожку наносят смесь белков-маркеров с иэвест45 и ими изоэлектрическими точками (амил1оглюкозидаза 3,5; ферритин 4,4; бычий сывороточный альбумнн 4,7; л@ктоглобулин 5,34;..кональбумин 5 9; миоглобин лошади 7,3; миоглобин к rTs

8,3; рыбонуклеаза 9,45; цитохром

10,65).

Режим изоэлектрофокусирования:

1$ мин — 400 В; 15 мин — 800 В; 2 ч1$00 В. После окончания изоэлектрофо-. кусирования гель фиксируют .,2,57-ным

55 раствором трихлоруксусной кислоты с

3% сульфосалициловой кислоты, промывают 12,5%-ным раствором трихлоруксусной кислоты и окрашивают 0,0017-ным раствором кумасси R-250, приготовленном на 12,5%-ной трихлоруксусной кислоте. Отмывку избыточного краси" теля производят 107.-ным раствором этанола в 57.-ной уксусной кислоте.

Для определения изоэлектрических точек разделенных белковых компонентов строят калибровочную кривую: ось по горизонтали размечают в мм, а на вертикальную ось наносят значения изозлектрических точек. Измеряют рас-, стояние (мм). от катодного края геля до каждого из маркерных белков и по этим значениям строят кривую. Для определения изоэлектрической точки белкового компонента измеряют расстояние до него от катодного края геля и по калибровочному графику находят еГо изоэлектрическую точку.

Изоэлектрофокусировочные спектры (ИЭФ-спектры) белков самоопыленных линий кукурузы состоят из 3 четко вьг раженных групп (субфракций) компонентов:oC, P, g ..а "Субфракция представлена 11-16 компонентами слабой интенсивности, Р -субфракция состоит из 11 — 15 мощных по интенсивности компонентов, на долю которых приходится

80-90% всех белков, -субфракция, наиболее бедная по числу компонен" тов (0-4) слабой интенсивности. е6 и р-субфракции компонентов по характеру локализации их подразделяются на три части: о(, рН 4,00-4,80; < рН 4,816,09; х рН 6,10-6,76; f3 рН 6,777,20; (3 рН 7,21-7,59; /5 рН 7,568,13.

g -Субфракция включает компоненты с изоэлектрическими точками в пределах 8,14-9,00, На основании ИЭФ-спектров составляются белковые формулы самоопыленных линий кукурузы, которые приведены в таблице.

Белковая формула специфично характеризует каждую самоопыленную линию, на ее основе паспортные цифровые данные линии можно хранить в памяти ЭВИ и использовать по мере надобности селекционерами и семеноводами в своей работе.

Использование предложенного способа распознавания гепотипов самоопьгленных линий кукурузы позволяет на минимальном числе зерен (2-3 вместо

10) определять ИЭФ-спектры зеиновых и сопутствующих им запасных белков эндосперма, лишенных вариабельных

СуВфракСамоопыленные линии

ВИР-133 ТС НО-!4

Гр» ым »О (>>Г- >2

НО-Ib НО-13Ó.3

4,30; 4,40;

4,60; 4,70;

4>75

4,30; 4,40;

4>601 4,70;

4,751 4,80

4,40; 4,55;

4,751 4,80

4,30> 4,40;

4,60;

4,5$;

4,40; 4,55;

4,80

4,40;

4,80

5,00; 5,251

5,35; 5,50;

5,70

4,95; 5,00;

5,25; 5 ° 35;

5,50; 5,70

4,95; 5,25;

5,35; 5,50;

5,70

4,95;

5,25;

5,50;

5,93

5,ОО;

5,35;

5,70;

4,95; 5,25;

5>3$ ° 5 ° 50»

5,93

4,95; 5,25;

5,35; 5,93

6,101 6,20;

6,35; 6,45

6,10; 6,35;

6 ° 45

6,10; 6,20;

b,50; 6,65

Ь,!Э; Б»35;

6,1Э; 6,35; . 6»50» 6>Ь5

6 ° 13> 6 ° 35э

6,50; 6,65

6,77; 6,80;

7,03» 7>101

7 ° 15

6,77; 6,80;

7.00; 7,ОЗ;

7,10» 7,!5

6,77; 6,80;

7,03; 7,10;

7,15

6,80; 7,00;

7,031 7,10>

7 1$

6,80;

7,ПО;

7,10;

6,77р 6,801

7,00; 7,03;

7>10; 7,15

6,77;

6,90;

7,03;

7,15

7,331 7,40;

7,50; 7,55

7,33; 7,40;

7,50; 7,55

7 ° 33; 7,40;

7,50; 7,55

7,ЭЗ; 7,40;

7,50, 7, 401

7>55

7,33; 7,40;

7,50

7,33;

7 ° оо> 7р75 ° 7 ° 85;

8,05; 8,13

7,75; 7,80;

8,05

7,75; 7,80;

7;85

7,751 7,80;

7,85; 8»05

7,75; 7,85;

8,05

7,65; 7,75; гю В 05

8,30; 8,55;

8,65; 8,90

8,30; 8,55;

8,65 8,90

8,30; 8,55;

8 ° 65; 8,90

8»30

Составитель В>Демкин

Редактор Т.Лаэоренко Техред N.Дидык Корректор B Романенко. Тираж 661 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 4455/4

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

>4 компонентов от зерна к зерну, и тем ния точности способа, разделение белсамым стабилиэировачь паспортизацию кон ведут иэозлектрофокусировайнем в самоопыленных линий кукурузы. полиакриламидном геле в диапазоне pFl

Ф о р м у л а и э о б р е т е н и я 4-9 с последующим определением изо5 электрических точек компонентов, с

Способ распознавания генотипов са- использованием маркерных белков с измоопыленных линий кукурузы включаю- вестными изоэлектрическими точками, щий извлечение спиртовой мочевиной зе- группированием компонентов в соответина и сопутствующих ему запасных бел- 10 ствии с их локализацией и интенсивноков эндосперма зерна, о т л и ч а ю- стью и составлением специфических шийся тем, что, с целью повыше- белковых формул.