Способ получения n-нитрозо-n-(бэта-хлорэтил)- карбамоилпептидов или их кислотно-аддитивных солей

Патент 1424739

Авторы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение касается замещенных пептидов, в частности получения NHHTpO30-N- (бэта-хлорэтил)карбамоилпептидов ф-лы I ClCH,(-«-NO)- -C(0)NH }h R, где , R - Lys-Pro- Val-NHj ; Gly-Lys-Pro-Val-NH,; Тгр-Ыт Leu-Asp-Phe-NH ; Trp-Gly-Lys-Pro-Val- Trp-Leu-Asp-Phe-NH,, R - Lys-Pro-Val-NHj, или их кислотно-аддитивных солей, которые могут быть использованы в медицине. Цель - создание новых более активных пептидов. Их синтез ведут из соединений ф-л II и III: (H2N)n-R (II), Cl-CH CHj-N- - 0(0) (III), где Кип имеют указанные значения, с последующим нитрованием с помопуью азотистой кислоты или хлористого нитрозила. Целевой продукт выделяют в свободном виде или в виде соли. Новые пептиды обладают в сравнении с известными аналогами (не содержащими нитрозогруппы) лучшими противоопухолевой активностью и токсичностью ( мг/кг).8 табл, о со

СОЮЗ СОЕЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИ4ЕСНИ Х

РЕСПУБ ЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ПАТЕНТУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPbITPM (21) 3506053/23-04 (22) 22.10.82 (31) 3073/8 1 (32) 22.10.81 (33) HU (46) 15.09.88. Бюл. || 34 (71) Хиноин Дьедьсер еш Ведьесети

Термекек Дьяра PT (HU) (72) Хелга Шюли, Кальман Медэихрадс" ки, Хедвиг Медзихрадски, Карой Лапиш, Ласло Коппер и Андраш Йенеи (HU) ,(53) 547.964.4 ° 07(088.8) (56) Вейганд-Хильгетаг, Современные методы эксперимента в органической химии. М.: Химия, 1967, с. 377. (54) N-НИТРОЗО-N(БЭТА-ХЛОРЭТИЛ) КАРБАМОИЛПЕПТИДОВ ИЛИ

ИХ КИСЛОТНО-АЛДИТИВНЪ|Х СОЛЕЙ (57) Изобретение касается замещенных пептидов, в частности получения N""

„„SU „„1424739 А 3 (SD 4 С 07 К 5/10 // А 61 К 37/02 нитрозо-К-(бзта-хлорэтил)карбамоилпептидов ф-лы I (CICH< СН -N(NO)-C(0)NHQ„ R, rye и 1, R - Lys-ProVal-||Н,; Gly-Lys-Pro-Val-NH<, Trp-Ит

1.eu-Asp-Phe-NH<, Trp-Gly-Lyа-Pro-ValNHz, Trp-Leu-Asp-Phe-NH<, n=2; R

Lys-Pro-Val-NH<, или их кислотно-адднтивных солей, которые могут быть использованы в медицине. Цель вЂ” создание новых более активных. пептидов.

Их синтез ведут из соединений ф-л II и III: (H N)„ -R (II), С1-СH CH -NC(О) (III), где R и п имеют укаэанные значения, с последующим нитрова нием с помощью азотистой кислоты или хлористого нитрозипа. Пелевой продукт выделяют в свободном виде или в виде соли. Новые пептиды обладают в сравнении с иэвестнъпчи аналогами (не содержащими нитрозогруппы) лучшими противоопухолевой активностью и токсичностью (LD =360 мг/кг).8 табл.

1424739

Изобретение относится к способу получения N-нитрозо-N-(бета-хлорэтил) карбамоилпептидов или их кислотноаддитивных солей вЂ” новых биологичес5 ки активных соединений, которые могут найти применение в медицине, Цель изобретения - получение новых производных в ряду пептидов, обладающих более высокой противоопухолевой 1ð активностью.

Синтез N-(2-хлорэтил)карбамоилпептидов, К 10Х-ному раствору пептида, содержащего один эквивалент свободной 15 аминотерминальной функции в диметилформамиде, по каплям при 0 С добавляют 1,1 эквивалента 2-хлорэтилизоцианата ° Реакционную смесь перемешио вают в течение 2 ч при 0 С, а затем 2р отстаивают ночь при комнатной темпе1 ратуре. Диметилформамид отгоняют в вакууме, остаток обрабатывают водой и фильтруют.

Синтез N-/(2-хлорэтил)-N-нитрозокарбамоил/-пептидов: а) Нитрование смесью NaNO /ìóðàâüиная кислота.

1 ммоль N-(2-хлорэтил)карбамоилпепт да растворяют в 8 мп 98-100Х-ной 30 о муравьиной кислоты при 0 С, охлаждая и перемешивая, По каплям добавляют

300 мг нитрита натрия в 2 мл воды..

Реакционную смесь выстаивают в течение ночи в холодильнике, после чего отгоняют растворитель. Дистилляционный остаток обрабатывают водой и фильтруют. При необходимости продукт можно дополнительно очистить на ко> ленке с силикагелем методом хромато- 4р графин; в) Нитрование с помощью хлористого нитрозила в присутствии трет-бутоксикарбонкл (защитной группы).

1 ммоль N-(2-хлорэтил) карбамоил- 45 пептида растворяют в 10 мл безводногс о пиридина при -20 С. К раствору по каплям при перемешивании добавляют

1 мл дихлорметана, содержащего 12 ммоль хлористого нитрозила. После 5р перемешиваиия в течение часа реакционную смесь концентрируют в вакууме.

Дистилляционный остаток растворяют в этилацетате и дважды экстрагируют ледяной водой. Органический слой сушат над сульфатом натрия, раствор отфильтровывают, этилацетат упаривают в вакууме.Дистилляционный остаток о выстаивается 2 ч при 0 С в 5 мл 981ООХ-ной муравьиной кислоты. Затем к нему добавляют 1 мл муравьиной кис" лоты> содержащей 0,12 ммоль хлористоводородной кислоты. Полученный раствор выпаривают в течение 10 мин. Дистилляционный остаток растворяют в воде и лиофилиэируют. В случае необходимости продукт может быть очищен методом хроматографии на колонке с силикагелем.

Пример 1. Альфа, эпсилонбис-(бета-хлорэтилкарбамоил)-лиэилпролилвалинамид.

Раствор 736 мг (1,6 ммоль) лиэил" пролилвалинамиддиацетата в 8 мл диметилформамида охлаждают до 0 С. Далее в раствор по каплям добавляют

0,46 мл (3,2 ммоль) триэтиламина и

0,34 мл (4 ммоль) бета-хлорэтилиэоцианата. Реакционную смесь перемешивают при 0 С в течение 4 ч, после чего дают ей постоять и перегоняют в вакууме. Остаток смешивают с водой, выпавший в осадок продукт отделяют фильтрованием и сушат. Таким образом получают 480 мг указанного в назваt нии примера соединения. Выход 54Х; о т,пл. 183-185 С, К.> 0,75 (смесь н-бутанола с пиридином, ледяной уксусной кислотой и водой в соотношении 4:1:

1:1; тонкослойная хроматографическая обработка с использованием Киэельгеля G" фирмы Мерк).

Найдено, С 47,90, Н 7,60; N 17 >41 >

С1 13,26.

С, Н>,Нт О С12 (552,5)

Вычислено, Х: С 47,82, Н 7, 11;

N 17>74 Сl 12,83.

Пример 2, Альфа, эпсилон-бис

/N-нитрозо-N-(бета-хлорэтил)-карбамоил/-лизилпролилвалинамид

К 552 мг (1 ммоль) альфа, эпсилонбис-(бета-хлорэтилкарбамоил)"лизилпролилвалинамида добавляют 10 мл 99Хной муравьиной кислоты, после чего в течение часа добавляют в эту смесь по каплям раствор 500 мг нитрита нат" рия и 3 мл воды. На следующий день реакционную смесь выпаривают в вакууме ° Остаток обрабатывают водой, фильтруют и промывают водой. Таким образом получают 460 мг указанного в названии примера соединения; выход

75Х °

R 0,80 (смесь метанола с этилаце. татой в соотношении 1:3, тонкослойная хроматографическая обработка с

739 р,1 мл (1,2 ммоль) р -хлорэтилизоциа ната. Реакционной смеси дают отстояться в течение ночи при комнатной

5 температуре затем растворитель упаЪ ривают в вакууме. Остаток очищают хроматографией на колонке, заполненной силикагелем. В качестве элюента используют смесь метанола и этилаце10 тата в соотношении 3:1. Фракции, содержащие основной продукт, собирают.

Растворитель отгоняют в вакууме. Таким образом получают 430 мг М,-/"(pхлорэтил)-карбамоил/-третичный бутилоксикарбониллизилпролилвалинамида.Выход составляет 78X, R> 0,90 (смесь метанола и этилацетата в соотношении 3: 1, тонкослойная хромато2 графия (Kieselgel С, Merck)1 R 0,44

20 (смесь этилацетата, пиридина ледяной уксусной кислоты, воды в соотношении

240:20:6:11, тонкослойная хроматография, Kieselgel Merck)

Найдено, Х: С1 6,56.

СмН4 И О С1 (547, 1)

Выч ислено, Х: Cl Ь, 48, К раствору из 547 мг (1 ммоль)

1 о -(Н-(p-хлорэтил)-карбамоил) -E. â€” òðåò.

30 бутилоксикарбонил-лизилпропилвалинамида и 10 мл безводного пиридина до бавляют по капле смесь из 1 мл t (1,2 ммоль) нитрозилхлорида и 1 мл дихлорметана при -20 С с одновремен

35 ным перемешиванием раствора. После перемешивания в течение часа реакционную смесь упаривают в вакууме. Ос таток растворяют в этилацетате при

О С и дважды экстрагируют ледяной

40 водой. Этилацетатную фазу сушат над безводным сульфатом натрия, этилацетат отгоняют в вакууме. Остаток отстаивается в течение нескольких часов в 5 мл 98-100Х-ной муравьиной кислоты

45 при 0 С. Затем добавляют 1 мп муравьиной кислоты, содержащей 0,12 ммоль хлористо-водородной кислоты>и через

10 мин упаривают раствор в вакууме.

Остаток очищают хроматографией на ко50 .лонке, заполненной силикагелем, при

0 С смесью этилацетата, пиридина ледяной уксусной кислоты и воды в соотношении 60:20:6:11.

1424 использованием продукта "Кизельгель

G" фирмы Мерк), Я=184 (N-нитроэогруппа, 397 нм).

Найдено, Х: Cl 11,41; К 20,10.

С,Н И ОтС1 (611,51)

Вычислено, Х: Cl 11,59; N 20,61, Пример 3. Бета-хлорэтилкарбамоил-триптофил-норлейцкп-альфа-аспарагил-фенилаланинамид, 615 мл (1 ммоль) триптофил-норлейцил-альфа-аспарагил-фенилаланинамидгидрохлорида растворяют в 6 мл безводного диметилформамида, после чего в приготовленный раствор добавляют

0,14 мл (1 ммоль) триэтиламина и

0,1 мл (1,2 ммоль) бета-хлорэтилизоцианата, в дальнейшем реакцию проводят аналогично примеру 1. Таким о6разом получают 600 мг укаэанного в названии примера соединения; выход 88Х, R 0,72 (смесь н-бутанола, уксусной кислоты, воды в соотношении 4:1:1), т.пл. 201-202 С.

Найдено, Х: Cl 4,94 N 13,78.

С„Н4,N OC1 (684,19)

Вычислено, Х: С1 5,18, И 14,33.

Пример 4. N-нитроэо-N-(бетахлорэтил)карбамоилтриптофилнорлейцилальфа-аспарагил-фенилаланинамид III.

684 мг (1 ммоль) бета-хлорэтилкарбамоил-триптофил-норлейцил-альфа-ас-парагил-фенилаланинамида используют для реакции с раствором 300 мг нитри-! та натрия и 2 мл воды, как изложено в примере 3. Таким образом получают

605 мг указанного в названии примера соединения. Выход 85X. R< 0,80 (смесь н-бутанола с ледяной уксусной кислотой и водой в соотношении 4:1:1, продукт Кизельгель С" фирмы Керк).

Найдено, Х: Cl 4,73; N 15,28;

No 3,87, С 55,50; Н 5,77.

C„q,NaosCl (713,20)

Вычислено, Х: Cl 4,97, N 15,71;

N0 4,20; С 55,52; Н 5,75.

Поскольку в диапазоне поглощения нитрозогруппы имеет место поглощение самого пептида, нитроэную группу определяют по методу Лоси Диона.

Пример 5.ot.-/N-нитрозо-N(хлорэтил)-карбамоип/-лиэилпролилвалинамидацетат II, К 614 мг (1 ммоль) 6-третичного бутилоксикарбонил-лизилпролилвалинамидтоэилата в 10 мл безводного диме тилформамида при охлаждении снегом и перемешивании добавляют по каплям

0,14 мл (1 ммоль) триэтипамина и

Фракции, содержащие основной продукт, собирают, упаривают, остаток лиофилиэируют путем растворения в воде.

Выход вЂ” 390 мг (72Х).

1424739

Таблица1

Испытуемое Доза, вн. МЯТ, дни MST эффек- Средняя поте- Число живых соединение брюш., тивность, ря веса на мьппей к 5-му мг/кг 7, Т/С 5-й день, г (47-му) дню

40 47,0 783 1,4 6/6 (5) BCNU

>4),0 783 0,8 6/6 (5) 30

6/6

142

8,5

1,5

200

6/6 (2)

6/6 (3) 12,0

200

0,6

130

47,0

783

0,8

6/6

233

14,0

0,3

Целевое соединение: R< 0,33 (смесь этилацетата, пиридина, ледяной уксусной кислоты и воды в соотношении

60:20:6:11) тонкослойная хроматогра5 фия, Kieselgel G.Merck; R 0,64 (смесь этилацетата, пиридина, ледяной уксусной кислоты, воды тонкослойная хроматография, «ieselgel G. Merck)

Найдено, 7.: Cl 6,32, N 17,72, С 47,03, Н 7,11.

С,Нщ 1 0 С1 (536,05)

Вычислено, 7.: Cl 6,611 N 18,29, С 47,01, Н 7 i09, 86,2 (N-нитрозогруппа, 397 нм) . 15

В описываемых условиях получены.

eL-(N-(2-хлорэтил)-N-нитрозокарбамоил) триптофил-лейцил-аспарагин-фенилалянинамид IV. Выход 807., Rg 0,80 (бутанол:ледяная уксусная кислота:вода 4: 20

:1:1),R 0,72 (бутанол. пиридин:ледяная уксусная кислота. вода 4:1:1:1), R 0,42 (этилацетат:пирндин:ледяная уксусная кислота:вода 120:20:6:11).

Найдено, 7.: Cl 4,81, N 15,43, NO 3,98, М еОВС1 (7 13 20)

Вычислено, 7.: Cl 4,971 N 15,71;

NO 4,20. а г (N- (2-хлор этил) -N-нитроз о-карба30 моил) -глицил-лизилпролилвалинамидгидрохлорид Ч. Выход 547, К 0,65 (этилацетат:пиридин:муравьиная кислота:

:вода = 60:20:6:5,5); R 0,10 (мета- нол:этилацетат 3:1); Ri 0,66 (этилацетат:пиридин:ледяная кислота .вода

60:40:12:22)

Найдено, 7: Cl 12,101 N 19,02.

C„H>N OqC1 (569,59)

Вычислено, 7.: С 12,45; N 19,67.

N-нитрозо-N-(бета-хлорэтил)-карбамоил-триптофил-глициллизилпролилва7 линамидгидрохлорид VI.

Ri 0,25 (этилацетат:пиридин:ледяная уксусная кислота:вода 60:20:2:

:11), К 0,64 (бутанол:пиридин:ледяная уксусная кислота: вода 4:1:1:1), Найдено, 7.: С 49,71; 5,85;

И 17,08; 0 15,71, Сl 8,88.

С„Н„Р„0,С1, (755,77)

Вычислено, 7: С 50,85; 6,40;

N 18 53, 0 14,82, Сl 9,83.

Эжилон корр.: 88,40 нм. Измерен при использовании метанола в качестве растворителя, концентрация 104 моль/л, при 25-C.

Проведены биологические испытания полученных соединений.

При изучении влияния соединений на лейкемию L-1210, имплантированную мышам, в качестве тестовых соединений испольэовали ot.,Я-бис-/N-нитроэо-N/ -хлорэтил/-карбамоил/лизилпролилвалинамид (далее в тексте соединение I) и E --/N-нитрозо-N-// -хлорэтил/-карбамоил-лизилпролилвалинамид гидрохлорид (далее в тексте соединение II).

Полученные результаты приведены в табл.1-4.

В табл.1 показано влияние соединений I u II на внутрибрюшинно имплантированную мышам лейкемию T.-1210.

Оба соединения оказались более активными, чем 1,3-бисф-хлорэтил/-1нитрозомочевина (далее в тексте

BCNU) и 2-/3-(2-хлорэтил) -3-нитрозоуреидо/2-дезокси-0-глюкопираноза (далее в тексте вЂ” хлороэотицин), использованные для сравнения.

1424739

Продолжение табл. 1

Число a мышей к 5-му (47-му) дню

Средняя потеря веса на

5-й день, г

MST эффективность, Xs Т/С

Мят, дни

Доза, вн. брюш., мг/кг

Испытуемое соединение

150

10,5 47,0 783

29,5

100

0,7

6/6

217

13,0

0,7

6/6

1,3

Хлорозотицин

5/6 (3) 32

1,2

6/6

0,8

6/6

9,0 150

+ 1,2

10/10

+2,5 физиоло гический раствор

NaC1

П р и м е ч а н и я: += обе мыши больны.

Опухолевый прививочный материал вЂ” 10 асцитных клеток, внутрибрюшинно.

Животное-хозяин вЂ” самки мьппей разновидности CDF.

Лечение 3 дня.

Токсичность вЂ” на 5-й день выживают менее 4/6 мышей.

Оценка вЂ” MST = средний период выживания.

МБТ лечебной гр ппы

MST контрольной группы вЂ” Т/С 125, значительная противоопухолевая активность.

Эффект

Критический предел

Результаты взаимосвязи между эффектом и химической структурой соединений, аналогичных соединению форму- 45 лы II иа мышах, страдающих лейке" мней L-1210, приведены в табл.2.

Та блица2

Токсично

100

230

150

ILS вЂ” увеличение периода выживания.

Результаты влияния соединения формулы II в комбинации с формацевтичес10

8,5 142

47,0 >783

20,5 342

6/6 (1)

e/Ü (3)

6/6 (2) 1424739

Выживание, 7

ILS

Табл ица4

Доза, Дни мкг/кг

Выживание, «чЮ

Соединение

Лечение П.S

+к

Доза, Дни мг/кг

1 50

1 87

1 25

1 110

12,5

1, II

2. II

3. BCNY

50,0

325

2 44

1 25

3 «10

1, 80

5,9

1, 250

5,9

1,2, 110

5,6

1 50 2 44

3>50

2 О

2 77

1% 50

1 10

4i10 30 ние, соответствующее 7+8

12. Лече77

35 ние, соответствующее 7+9

13. Лече44

40 ние, соответствующее 7+10

14. I лечения

3 33

3 70

1<50

1 20

15. BCNU

16. Лечение, соответствующее 14+15

В,а меланома

Опухоль Льюиса

Лечение

Средняя дли- ILS тельность вы- 7 живания, дни

Средняя дли- ILS, тельность вы- Ж живания, дни

21 0

26,0

Контроль

Соединение II:

100 мг/кг

31,5

21,5

22,0 кими добавками на мышей, страдающих лейкемией L-1210, приведены в табл,3.

Таблица 3

Соединени Лечение

4 е ECTLY

5. Лечение, соответствующее 2+3

6. Лечение, соответствующее 1+4

7. II

8. 11икло-фосфамид

9.Дибромдульцитол

10.BCNY

11. ЛечеРезультаты влияния соединения формулы II на выживание мышей, страдающих лейкемией L-1210, приведены в табл.4.

II 1 12,5 1 50

1<50 1 87

1"133 1

1 25 2 44

1"25 3 33

1 100 3 45

Внутрибрюшинное применение в день, указанный после трансплантации.

Время выживания Время выживау мышей лечеб- ния в группе ной группы вЂ” без лечения

Т LS-- вЂ” вЂ” вЂ” вЂ” вЂ” вЂ” вЂ” вЂ” вЂ” вЂ” -- вЂ” --"----- x

Время выживания в группе без х 100

Ф 4f4

Выживание на 60-й день после трансплантации, 45

Результаты влияния соединения II на твердые опухоли приведены в табл.5.

Т а б л и ц а 5

1424739

Лродо:скеkutu тзбл.

Опухоль Льюиса

В,< меланома

Лечение Средняя дли- ILS, Средняя дли- ILS, тельность вы- Х тельность вы- Х живания, дни живания, дни

5«20 мг/кг 27,0

35,0

В С%1

20 мг/кг 28,5

42,0

5«4 мг/кг 25,0

34,0

Внутрибрюшинное применение с l-го дня после трансплантации

TD CD

А) опухоль $, „ (подкожно). Дозировка 100 мг/кг или 5«20 мг/кг,внутрибрюшинное введение (начало лечения в день после трансплантации), оказалось неэффективным.

В) Легочная меланома Льюиса и меланома В, вЂ” метастазирующие опухоли мьппей (i m.).

С) Опухолевые ксенографты .человега (S. с.):

НТ18 (arne 1 anat icus

me 1 anoma) Контроль (среднее), дней 22,5

100 мг/кг 50,0 1,0

5"20 мг/кг 56 25 1,5

НТ22 (крупная карцинома толстой кишки)

Контроль 17,0

100 мг/кг 24,0 0,29

5"20 мг/кг 21,5 0,26

НТ17 (аденоматозная карцинома толстой кишки)

Контроль 16,5

100 мг/кг 14,75 0,0

5«20 мг/кг 5,0 0,0

Время начала лечения вЂ” наличие опухоли, имеюшей размер примерно

8 мм °

Способ лечения: внутрибрюшинное введение.

ТР=удвоение объема опухоли.

Т1)„-TD„

СП=замедление роста= вЂ” --- вЂ” ---.

Т ) к0

К -лечебная группа; К -контРоль ная группа.

Влияние производных пептид-нитрозомочевпны на рост экспериментальных твердых опухолей и опухолевых ксенографтов человека приведены в табл.

61 7 °

Исследуемые соединения:

N-нитрозо-N-(3-хлорэтил)-карбамоил-лизилпролилвалинамид НС1 (соединение II);

N-нитрозо-N-(P-хлорэтил)-карбамоил-глицил-лизилпролилвалинамид НС1 (соединение Ч).

Основные объекты: а) экспериментальная твердая опухоль-: мышиная опухсль S, „, легочная опухоль Льюиса и мышиная В меланома; б) опухолевые ксенографты человека: амеланотигная меланома НТ18, колоректальная аденокарцинома НТ17, колоректальная аденокарцинома НТ22 (муиипозная), карцинома годжелудочной железы НТ27.

Опыты на экспериментальных твердых опухолях: опухоль разрезали на мелкие куски, которые трансплантировали под шкуру на спине мыши разновидности

СIFP Лечение начинали на следующий после трансплантации день. Размер орухоли измеряли кронциркулем, объем рассчитывали по диаметру.

Соединение II применяемое «нутрибрюшинно в дозе 100 мг/кг и 5«20 мг/кг (одна дозировка в течение 5 дней), не оказывало влияния на рост опухоли.

Легочная опухоль Льюиса: опухоль трансплантировали в виде клеточной суспензии в бедренную мь.шцу инбредных

1424739

Таблица 6

В„

Опухоль Льюиса

Лечение

Средняя выжи- ILS ваемость, дни 7

Средняя вы ILS, живаемость, K дни

Контроль 21 >О

Соединение II

100 мг/кг 22,0

26,0

31,5

5» 20 мг/кг 27,0

BCNU

20 мг/кг 28,5

35,0 35

42,0 61

34,0 31

5,4 мг/кг 25,0

ILS вЂ” увеличение периода выживания

Объем обработанной Объем обработанной опухоли на 21-й вЂ” опухоли в 0-й день день

Эффект ингибирования опухоли

Объем контрольной опухоли на 21-й день

Объем контрольной опухоли в 0-й день

100 мьппей разновидности С57В1 при количестве клеток 10 . Растущая опухоль регулярно давала легочные метастазы, Лечение начинали в день, следующий эа 5 трансплантацией. Наблюдали выживаемость животных в лечебной и контрольной группах, Меланома В, : опухоль трансплантировали под шкуру на спине инбредных

Согласно полученным результатам соединение II умеренно увеличивает длительность жизни животных как при опухоли Льюиса, так и при меланоме

В, . Степень эффекта ингибирования опухоли практически эквивалентна эффекту от BCNU, используемому в качестве сравнительного соединения.

Изучение опухолевых ксенографтов 40 человека: кусочки опухолей, которые можно серийно трансплантировать (взрослая тимектомия, полное облучение с 8,5 Gy, мозговая перестройка с помощью 5»10 сингенных мозговых 45

6 клеток), трансплантировали под шкуру (1007 полное ингибирование роста опухоли) °

Результаты экспериментов показывают, что производные пептидо-нитроэомочевины оказывают значительное мышей разновидности СН7В1 в виде кусочков опухоли ° Растущая опухоль индуцировала легочные метастазы. Лечение и оценку эффекта осуществпяли способом, описанным для легочной опухоли Льюиса.

Результаты, относяшиеся к легочной опухоли Льюиса и меланоме В 6, приведены в табл.Ь. на спине искусственно имуннодепрессированных мьппей разновидности СВА/

/СА. Лечение (внутрибрюшинное введение) начинали, когда опухоли достигали диаметра 0,7-1,0 см и можно было наблюдать их прогрессирующий рост. Диаметры опухолей измеряли кронциркулем, объем рассчитывали по диаметру. (Y= s/6»D, D вЂ” средний диаметр). Степень эффекта ингибирования опухоли определяли по разности в объеме опухоли, измеренном на 21-й день после трансплантации, в контрольной и лечебной группах (каждая экспериментальная группа включала по крайней мере 6 опухолей). ингибирующее влияние на рост амеланотивной меланомы, тогда как их влияние на рост колоректальных и панкреатических опухолей оказалось более слабым (табл.7,8).

1424739

Та блица 7

Г(рэ(;о!!жо}!!!Р Габ!!. г

Лечение 50 мг/кг 100 мг/кг 5 «20 мг/кг Лечение 50

НТ18

H 1 22

Соединение формуль! II

Соединение формулы Ч

Соединение

Ф рму лы II

НТ18

BCNU

Ч 15

НТ17

Эффект ингибирования опухоли

N нитрозо-((5-хлорэтил)-карбамоилпептидными фрагментами у мышей, зараженных лейкемией L-1210, отражен в

20 табл.8.

Соединение формулы II

Таблица8

Доза (внутрибрю- шинно) ILSэ 7

Соединение мг/кг м/кг

Q(NO)-Lys-Pro-Val-NH, НС1 (формула II) 12,5 0,024

25 0,048

50 0,097

100 0,197

130 0,254

200 0,390

25 0,043

50 0,087

100 0,175

200 0,351

50 0,07

100 0,014

150 0,21

200 0,280

5 0,028

10 О,G52

100

263

607-чое выживание на 60-й день

Токсично

100

Токсично

230

Токсично

BCNU

Q(NO)Gly-Lys-Pro-Va1-NH НС1 (формула V) Q(NO)-Trp-N-Lbu-Asp-Phe-NH< (формула III) мг/кг 100 мг/кг 5 20 иг/кг

1424739

Прополвение табл.8. оэа (ввутриб инно) ILS, Х

Соединение

I мг/кг м/кг

115

Токсично

19,9

100

300

160

Не onределяли

230

Токсично

Не onределяли

20 0,036

80 0,144

50 0,109

Не onределяли

Не on50 0,085 ределяли

П.S Х 7 600.

Q(NO)-Trp-Gly-Lys-Pro"×à1-NH

Ьув"Рго-Val-NH (формула II) Н-Lys-Pro-Val-AH 2СН СООН аФ

Н-Lys-Pro-Gly-Lys-Pro"Val-ИН

П р и м е ч а н и е. R Cl-СН СН -N-С)

Реэультаты исследований покаэывают, что полученные по иэобретению соединения являются более эффективны20 0,1 12

38 О, 212

12 0,015

25 0,030

50 0,061

100 О, 122

200 0,244

300 0,366

50 0,070

100 О, 140

150 0,210

200 0,280

10 0,018 ми цитостатическими агентами, чем

BCNU, хлороэотицин, пептидамнды, не содержащие нитроэогруппы.

1424739

Формула изобретения т С1СН2 СН2 N CONIIQR

4 1п

Составитель В. Волкова

Редактор А.Маковская Техред g,дидык Корректор А.Обручар

Заказ 4701/59 Тирам 348 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производств ила-полиграфическое предприятие, г. Умгород, ул, Проектная, 4

Токсичность полученных соединений составляет 180 вЂ” 360 мг/кг (1 П т.е. соединения могут быть отнесены к категории среднетоксичных.

Способ получения N-нитрозо-И(бэта-хлорэтил, карбамоилпептидов об- 10 щей формулы

1 где и 1

1,ув-pro-Val-NH<, Gly Lys

Pro-Ча .-NH ; Trp-N-Leu-AspPhe-NH<, Тrр-Glу-Lys-Pro-Val- 20

NH<, Trp-Leu-Asp"Phe-NH<, или

n = 2;

R = -Lys-Pro-Ча1-NH ; или их кислотно-аддитивных солей, о т л и ч а ю щ н и с я тем, что пептид или его защищенное производное общей формулы (H7N)nRt где и и R имеют указанные значения, вводят во взаимодействие с изоцнанатом формулы

С1СН СН NCO и полученное соединение (С1СН,СН,NHCONHQ R, где и и R имеют указанные значения, нитрозируют с помощью азотистой кислоты или хлористого нитрозила и целевой продукт выделяют в свободном виде илм в виде соли.