Способ получения иммобилизованного протосубтилина

Способ получения иммобилизованного протосубтилина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к химикофармацевтической промышленности, а именно к биологически активным соединениям , конкретно к иммобилизованным протеазам, которые могут быть использованы в производстве биопрепаратов , добавок к синтетическим моющим средствам, парфюмерии, ветеринарии , медицине. Цель изобретения - повышение качества целевого продукта. Способ заключается в иммобилизации протосубтилина на органическом носителе . В качестве носителя используют полиэтиленоксид с мол.м. 600-2000 килодальтон при соотношении носителя и фермента 1:7,5-1:8,5. Смесь носителя и фермента в водном растворе подвергают обработке у-лучами дозой 2,3- 2,7 мрад. Полученный npenapat обладает повьппенной активностью и термостабильностью и, кроме того, активен в более широком диапазоне рН. 5S (Л 4 4 rs: ел 4 00

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ:

РЕСПУБЛИН (5Н 4 С 12 N 11/00, 9/56

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО.ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4035527/31-13 (22) 23.12.85 (46) 07.12.88. Бюл. N - 45 (71) Институт цитологии и генетики

СО АН СССР и Бердский,. химический завод (72) Р.И.Салганик, A.M.Гончар, А.В,Троицкий, Л.А.Богданова, С.И.Смирных, Ф.Н.Чегодаев, Т.Ф.Ломовская, А.И.Пахтуев и Л.В.Плаксюк (53) 5?7.15(088.8) ,(56) Maeda Н. et. al. Biotechnology

Bioeng. 1973, 15, р. 607-609.

Земцова Л.В. и др. Иммобилизация протосубтилина и исследование свойств иммобилизованного фермента. — В кн.:

Иммобилизованные протеолитические ферменты в лечении гнойно- некротических процессов. — Новосибирск: ИЦ и ГСО АН СССР, 1981 с. 9-23.

„,SU„„1442548 А 1 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИЖ1ОБИЛИЗОВАННОГО ПРОТОСУБТЙЛИНА (57) Изобретение относится к химикофармацевтической промышленности, а именно к биологически активным соединениям, конкретно к иммобилизованным протеазам, которые могут быть использованы в производстве биопрепаратов, добавок к синтетическим моющим средствам, парфюмерии, ветеринарии, медицине. Цель изобретения — повьппение качества целевого продукта, Способ заключается в иммобилизации протосубтилина на органическом носите. ле. В качестве носителя используют полиэтиленоксид с мол.м. 600-2000 ки- М лодальтон при соотношении носителя и фермента 1:7,5-1:8,5. Смесь носите- Ф Ф ля и фермента в водном растворе под- ( вергают обработке -лучами дозой 2,32,7 мрад. Полученный препарат обла- ф дает повьппенной активностью и термостабильностью и, кроме того, активен в более широком диапазоне рН. 4ь

1442548

Изобретение относится к химико-фармацевтической промьппленности, а именно к биологически активным химическим соединениям, конкретно к иммобилизованным протеазам, которые могут быть использованы в производстве биопрепаратов, добавок к синтетическим моющим средствам, парфюмерии, ветеринарии, медицине и т.д. 10

Цель изобретения — повышение качества иммобилизованного протосубтилина.

Способ заключается в иммобилизации протосубтилина на полиэтиленоксиде с 15 мол. массой 600-2000 к0 при соотношении носителя и фермента 1:7,5 — 1:8,5.

Смесь носителя и фермента в водном растворе подвергают обработке -лучами в дозе 2,3-2,7 мрад. 20

Связанные между протосубтилином и полимерным носителем осуществляется радиохимическим воздействием в растворе. Это позволяет получать конечный продукт в виде водного раст- 25 вора иммобилизованных протеаз, обладающих высокой протеолитической активностью (по казенну) до 100 ПЕ/мл, высокой термостабильностью в присутствии субстрата, способных гидролизовать субстрат в широком дипазоне рН, проявляя при этом высокую активность. Неспецифическое комплексообразование между полиэтиленоксидом ,и протосубтилином в водном растворе способствует иммобилизации в результате сближения реагирующих молекул в момент радиохимического взаимодействия.

Пример 1. 5 г протосубтилина растворяют в 95 мл 0,05 М боратного буфера рН 8,4 при 2-4 С в течение

30 мин. Нерастворившийся осадок отделяют центрифугированием при 7100 g в течение 30 мин. К 8 мл супернатанта 5 добавляют 42,S мл 10,0 -ного водного раствора полиэтиленоксида 1500. Соот" ношение,aecoaoe) протосубтилин:полиэтиленоксид i:8,S. Смесь фермента с носителем облучают тормозным (:-из50 лучением в дозе 2,5 мрад.

При этом получается продукт со следующими свойствами.

Протеолитическая активность

93,0 ПЕ/мл, Термостабильность.

С: 37 45 50 60 70 80

Активность, .: 34 46 71 100 49 8

Зависимость активности от рН субстрата (1 . сывороточного альбумина):

«рН 6ю0 8,2 8;6 11ю0

Активность, %: 47 66 68 100

Продукт растворим. Выход 98,021,0%.

Пример 2 ° Готовят раствор протосубтилина по методике, описанной в примере 1. К 8 мл раствора протосубтилина (супернатанта) добавляют

37,5 мл 10,0 -ного раствора полиэтиленоксида 1500. Массовое соотношение протосубтилин:полиэтиленоксид 1:7,5.

Смесь облучают тормозным -излучением в дозе 2,5 мрад.

Свойства получаемого продукта.

Протолитическая активность

105,0 ПЕ/мл.

Термостабильность.

t, C::37 45 50 60 70 80

Активность, .: 34 46 71 100 49 8

Зависимость активности от рН субстрата (1 . сывороточного альбумина): рН: 6,0 .8,2 8,6 11,0

Активность, 7 i 47 66 78 100

Продукт растворим . Выход 98,0.1

+1,0 .

Пример 3. Готовят раствор протосубтилина по методике, описанной в примере 1. К 8 мл раствора протосубтилина (супернатанта) добавляют 40,0 мл 10,0 -ного раствора полиэтиленоксида 1500. Смесь облучают тормозным -излучением в дозе

2,3 мрад.

Свойства получаемого продукта.

Протеолитическая активность

120,0 ПЕ/мл.

Термостабильность.

t, Ñ: 37 45 50 60 70 80

Активность, : 40 49 70 100 48 8

Зависимость активности от рН субстрата (1 сывороточного альбумина): рН: 6,0 8,2 8,6 11,0

Активность, .: 50 65 71 100

%.

Продукт водорастворим. Выход 98,0 й1,0%.

Пример 4. Готовят раствор протосубтилина по методике, описан-. ной в примере 1. К 8 мл раствора протосубтилина (супернатанта) добав14425

Активность.7: 40 47 67 100 50 10

С: 37 45 50 60 70 80

Активность,X: 41 60 71 100 60 15

Зависимость активности от-рН субстрата (1 сывороточного альбумина): рН 6,0 8,2 8,6 11,0

АктивностьуХ: 53 69 70 100

С: 37 45 50 60 70 80 формула изобретения

Активность,Х: 38 51 70 100 45 11

Зависимость активности от рН субстрата (1 сывороточного альбумина): рН, 6,0 8,2 8,6 11,0

Активность,Х: 51 70 78 100

Продукт водорастворим. Выход

98,04.1,0 .

1 Составитель В.Иуронец

Редактор. Н.Гунько . Техред М.Дидык Корректор M.Âàñèëüåâà

Заказ 6355/23 Тираж 520 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 ляют 40,0 мл 10,0 -ного раствора полиэтиленоксида 1500. Смесь облучают тормозным -излучением в-дозе

2,7 мрад.

Свойства полученного продукта.

Протеолитическая активность

80 ПЕ/мл.

Термостабильность.

Е, С: 37 45 50 60 70 80 10

Зависимость активности от рН субстрата (1 сывороточного альбумина). рН 6,0 8,2 8,6 11 0 15

Продукт водорастворим. Выход 98,0»+1, Q .

Пример 5. Готовят раствор про"

20 тосубтилина по методике, описанной в примере 1. К 8 мл раствора протосубтилина (супернатанта) добавляют

40,0 мл 10,0Х-ного раствора полиэтилеиоксида 600. Смесь облучают тормозным -излучением в дозе 2,5 мрад.

Свойства получаемого продукта.

Протеолитическая активность

85,0 ПЕ/мл.

Термостабильность.

Пример 6. Готовят раствор протосубтилина Г10Х по методике, описанной в примере 1. К 8 мл раство- 45

48 4 ра протосубтилина (супернатанта) добавляют 40,0 мл 10,0 -ного раствора полиэтиленоксида 2000. Смесь облучают тормозным -излучением в дозе

2,5 мрад.

Свойства полученного продукта.

Протеолитическая активность

110,0 ПЕ/мл.

Термостабильность °

Активность,Х: 56 80 81 100

Продукт водорастворим. Выход 98,0й

«1,0Х.

Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет получать иммобилизованный протосубтнлин с улучшенными качественными характеристиками, а именно с высокой протеологической активностью, с повышенной термостабильностью в присутствии субстрата и с расширенным рН-оптимумом активности.

Способ получения иммобилизованного протосубтилина, включающий взаимодействие раствора ферментного препарата .с органическим носителем, о г.— л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения качества целецого продукта, в качестве носителя используют полиэтиленоксид с мол.массой 600...

2000 kD устанавливают соотношение носитель-фермент t:7,5 — 1:8,5 с последующим облучением смеси $ --лучами дозой 2,3-2,7 мрад. э