Способ определения церулоплазмина в крови

Способ определения церулоплазмина в крови

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине , а именно к биохимии. Целыо изобретения является повьаиение точности и чувствительности способа наряду с его упрощением. Для этого к раствору субстратно-буферной смеси добавляют жидкость, содержапсто фермент пропускают слабый высокочастотный ток и по величине сопротивления этому току объективно определяют скорость накопления продуктов ферментативной реакции . 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (1% (И) А1

gg y G 01 N 33!49 / G О1 N 33 68

К ASТOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ с

E 1

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4103543/28-14 (22) 25.07.86 (46} 23. 12.88. Бюл. Р 47 (71) Киевский медицинский институт им. акад. А.А.Богомольца (72) Ю.В.Руль, Д.А.Базыка, И.В.Савицкий, Т.И.Анистратенко, Г,Б-,Яндуловская и П.И.Скрипка (53) 616.07 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

9 1216265, кл. 6 01 Н 33!48, 07,03.86. (54} СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦЕРУЛОПЛАЗИИНА В КРОВИ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к биохимии. Целью изобретения является повьииение точности и чувствительности способа наряду с его упрощением. Для этого к раствору субстратно-буферной смеси добавляют жидкость, содержащ ю фермент, пропускают слабый высокочастотный ток и по величине сопротивления этому току объективно определяют скорость накопления продуктов ферментативной реакции. 1 табл.

1446571

Изобретение относится к медицине, конкретно к биохимии.

Целью изобретения является повышение чувствительности и упрощения способа.

Способ осуществляется следующим образом.

0,05»1,0 мл исследуемои биологической жидкости разбавляют в 50500 раз. В кювету прибора вносят 12 мл (в зависимости от количества исследуемой жидкости) раствора субстратно-буферной смеси, состоящей из ацетатного буфера и нарафенилендиамина, при включенном термостате прибора t = 37 С + 1 С. Кювету с элект родами подсоединяют к прибору. Через отверстие в электроде вводят раствор биологической жидкости, исследуемой на активность фермента. Регистрируют ход накопления продуктов ферментативной реакции при помощи самописца (КСП-4,. Н-39, Н-339).

Активность фермента оценивают как 25 по количеству, так н по скорости максимального накопления продуктов реакциив

Субстратно-буферную смесь готовят

:путем растворения 0,125 г парафенилендиамина солянокислого (х/ч или чда) в 25 мл дистиллированной воды.

Затем к 5 мл полученного раствора до" бавляют 5 мл 0,1 И ацетатного буфера рН 6,0 и 40 мл дистиллированной воды, Полученная субстратно-буферная смесь

Содержит субстрат-парафенилендиамин в концентрации 4,62 мИ/л.

В соответствии с инструкцией к прибору АФ-1, на котором проводилось измерение, характеристики тока следующие: частота тока 880 кГц, сила тока 20 мкА.

Частота тока является стабильной характеристикой прибора, не подлежащей коррекции. Сила тока является оптимальной.

Для индикации используется типовой датчик с двумя серебрянными электродами, покрытыми керамической пористой оболочкой.

Активность церулоплазмина рассчитывают по формуле

А ——

h 1 3 10 1000

11 ° 151000 (мкмоль/л ч); где h — отклонение пера самописца (мВ);

1,3 — коэффициент перехода от показаний милливольтметра при предлагаемом способе на концентрацию церулоплазмина при условии строгого соблюдения всех параметров опыта (мг %);

10 — коэффициент пересчета

100 мг на 1 л;

1000 — коэффициент пересчета мг в мкг

1 — длительность реакции (ч);

151000 — мол. м церулоплазмина.

Пример. О, 1 мл.сыворотки крови разбавляют в 100 раз 0,9Х-ным раствором натрия хлорида. В кювету анализатора вносят 2 мл субстратнобуферной смеси, состоящей из

0,1 N ацетатного буфера рН 6,0, раствора парафенилендиамина, приготовленного из расчета 0,125 мг парафенилендиамина íà 23 мл дистиллированной воды, и дистиллированной воды.

Ингредиенты субстратно-буферной смеси берут в соотношении 1:1:8 соответственно. Полученная субстратно-буферная смесь содержит субстрат"парафени" лендиамин в концентрации 4 62 мм/л.

Кюветы помещают в термостат при" бора Т = 37 С, вставляют датчики с электродами и при достижении постоянной температуры подключают к прибору.

Через отверстие в крышке датчика вводят О, 1 мл разведенной в 100 раз сыворотки крови белой крысы. Ход ферментативной реакции регистрируют на „циаграммной ленте самописца.

Параметры работы приборного комплекса: сила тока 20 мкА; напряжение

50 мВ; скорость движения ленты самописца Н-339 180 мм/ч.

Результаты эксперимента представлены в таблице.

Оценку точности измерений проводят с помощью среднего арифметического единичных отклонений отдельных измерений от среднего арифметического.

Показатель точности способа f при коэффициенте надежности 0,95 и К -"

= 9 Я = 0,2.71.

Таким образом, х, P<, m полностью определяют точность (воспроизводимость и правильность) анализа.

В примере точность предлагаемого способа характеризуется следующими показателями: х = 6,177; Г,с= 0,271;

+m = + 0,12.

1446571 4 мени исследования одной пробы в

4 раза в сравнении с известным способом. Чувствительность повыпается до т

10 при равенстве ее в известном способе 10

Формула изобретения эф- Отклонение Продолжифициент стрелки тельность ре- мм (мВ) реакции, ета мм (ч) Шкала прибора, мВ тивность рмента, моль/л. ч

50 1 3 39(19 5) 48(0 27) 6 2

38(19, 0) 54 (О, 30) 5,45

39(19,5) 50(0,28) 6,0

3995(19,8) 46(0%26) 6,56

38,5(19,2) 52(0,29) 6,36

38(19,0) 51(0,28) 5,84

39(19,5) 47(0,26) 6,46

38,5(19„2) 47(0,26) 6,36

38,5(19,2) 46(0,26) 6,36

П р и м е ч а н и е. Х = 6 177 3 = 0 354; ш = +0,12; С = 1,9.

Составитель Л. Шилина

Техред Л.Олийнык

Редактор Г.Волкова

Корректор М.Иаксимишинец

Заказ 6744/51 Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. ужгород, ул. Проектная, 4

Показатели точности известного способа х = 1,146; E<= 1,7 прн k

7;,+ш = g 0,065.

Чем вьппе величина показателя точности Я, тем ниже точность способа.

Таким образом, известный способ является менее точным (воспроизводимым и правильным) по сравнению с предлагаемым способом. 10

Статистические параметрырассеяния данных активности церулоплазмина выше при использовании известного способа в связи с тем, что в нем не учитывается фактическая продолжитель- 15 ность индивидуальных реакций, а используется один и тот же показатель продолжительности реакций, определенный.методикой (1 ч).

Хаким образом, предлагаемый 20 способ позволяет получить более точ ные и обьективиые данные об активности церулоплазмииа, чем известный способ. Достигается уменьшение вреСпособ определения церулоплазмина в крови путем внесения ее в субстратно-буферную смесь, содержащую парафенилендиамин и ацетатный буфер с последующей инкубацией исследуемой пробы и учетом результатов реакции, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения способа, после внесения крови в субстратно-буферную смесь через исследуемую пробу пропускают слабый высокочастотный ток, а учет результатов активности церулоплаэми на проводят по величине сопротивления этому току.