Способ анализа биологических объектов

Способ анализа биологических объектов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУЬЛИК (19) (11) 1) 4 G 03 С 7/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BT0PGH0MV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4236113/24-10 (22) 23.02.87 (46) 23. 12.88. Бюл. Р 47 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов (72) В.А.Долматов и И.И.Захаров (53) 771.72 (088.8) (56) Деже С. Цветная медицинская микрофотография. 1978.

Советское фото, 1985, 1(3, с.43. (54) СПОСОБ АНАЛИЗА БИОЛОГИЧЕСКИХ

ОБЪЕКТОВ . (57) Изобретение относится к прикладной биологии, а именно к методам анализа биологических объектов с использованием микрофотосъемки. Для повышения точности воспроизведения объекта микрофотосъемки биологического объекта в УФ-лучах с помощью микроскопа съемку осуществляют на цветную негативную пленку типа ЦНД-32, которую обрабатывают в режиме прямопозитивной цветной пленки, но с измененными временными характеристиками основных стадий процесса. 1 табл.

1446593

50

Точность воспроизведения объекта микрофотосъемки при использовании предлагаемого и известного способов иллюстрирует таблица.

1,5

0,3 л

Изобретение относится к прикладной биологии, а именно к методам анализа

1, биологических объектов c,èñïoëüçîâàнием лабораторной микрофотосъемки.

Цель изобретения — повышение точности анализа за счет улучшения качества снимка.

Пример 1. Биологический объект — взвесь клеток лимфомы мьппи, 10 флуорохромированный хлортетрациклином и этидиумбромидом, исследуется с помощью микроскопа МБИ-15 или серии

"Люмам с ртутной лампой сверхвысокого давления в качестве источника ос- 15 вещения (ДРШ-250-3), светофильтрами возубждения, люминесценции ФС-1, С3С24, БС-8 и светофильтрами эмиссии

ЖС-18 + ЖЗС-19 и соответствующей светоделительной пластинкой, объективом 20 (90 1.25 (ЛОМО). Микрофотосъемка ве дется на цветную негативную пленку типа ЦНД-32.

Фотопленку обрабатывают по следущей схеме: первое проявление 8 — 25

12 мин (25+2 С), оптимум 10 мин, промывка 1 мин (13-20 С); остановка проявления 3 мин (20 С), промывка 5 мин (13-20 С); засветка 5 мин; цветное проявление 6-10 мин (25+2 С), опти- 30 мум 8 мин, промывка 20 мин (13-20 С); отбеливание 5-7 мин (20 С) промывка о

t.

5 мин (13-20 С); фиксирование 10—

12 мин (20 С), промывка 30 мин (13 —, 20 С).

Составы используемых растворов, содержащие, г/л: черно-белый проявитель "Орвоколор" С-07

Трилон Б 2

Натрий тетраборнокислый 15

Сульфат натрия безводный 40

Гидрохинон 4,5

Метилфенидон 0,25

Калий углекислый 25

Калий роданистый 2

Калии иодистыи 0,007 стоп-ванна "Орвоколор С-37":

Квасцы алюмокалиевые 20 цветной проявитель "Орвоколор С-17"; раствор А

Гексаметофосфат натрия 3

Гидроксиламинсульфат

ЦПВ-1

Вода раствор Б

Гексаметофос ат натрия 1

Калий углекислый 75

Сульфит натрия безводный 3

Калий бромистый 2

Вода 0 5 л отбеливатель "Орвоколор С-57":

Калий железосинеродистый 100

Калий бромистый 15

Калий фосфорнокислый однозамещенный 5,8

Натрий фосфорнокислый двузамещенный 4,3 фиксаж "Орвоколор С-71":

Тиосульфат натрия кристаллический 200

Для приготовления всех растворов используют дистиллированную воду.

На слайдах, полученных предлагаемым способом, правильно воспроизводится биологический объект с характерной желто-зеленой люминесценцией митохондрий (локализация тетрациклина) и красной люминесценцией нуклеиновых кислот в ядре (взаимодействие этидиумбромида с двухцепочными нуклеиновыми кислотами). Слайды, полученные при фазово-контрастном освещении: с желто-зеленым светофильтром, имеют соответствующий цвет.

Пример 2. Экспонированную фотопленку типа ЦНД-32 обрабатывают как в примере 1 с временем чернобелого проявления, цветного проявления, отбеливания и фиксирования меньше 8, 6, 5, 10 мин соответственно. Изображение на слайдах в этом случае имеет неправильную цветопередачу и пурпурную вуаль.

Пример 3. Экспонированную фотопленку типа ЦНД-32 обрабатывают как в примере 1 с временем чернобелого проявления, цветного проявления, отбеливания и фиксирования больше 12, 10, 7, 12 мин соответственно. Слайды в этом случае перепроявлены, т.е. сплошь черные.

1446593

Характеристики биологического объекта

Способ

2,0

15,0

40,0

4,5

0,25

25,0

2,0

0,007

До 1 л проявиизвестHblA предлагаемый

Количество митохондриальных частиц в одной клетке

1 0-20

30-40

Цвет люминесценции

Желтый

Желтоэеленый

4,0

1 ф 5

4,0

75,0

3,0

2,0

До 1 л теле

Ядерные включения

Обн аруживаются слабо

Четко видны

Цвет люминесценции

Красный

Розовый

100

5,8

4,3

Составитель В.Андреев

Редактор Н.Рогулич Техред М. Ходанич Корректор М.Васильева

Заказ 6746/52 Тираж 442 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Формула изобретения

Способ анализа биологических объектов, включающий введение в них зондов, микрофотосъемку на цветную фотопленку, ее черно-белое проявление, остановку проявления, засветку, цветное проявление, отбеливание и фиксирование, о т л и ч а ю щ и и -,- с я тем,что, с целью повышения точности анализа за счет улучшения качества снимка, съемку осуществляют на негативную фотопленку, проявляют

8-12 мин в черно-белом проявителе следующего состава, г/л:

Динатриевая соль с этилендиамин-N,N,N,,N— тетраукусуной кислоты

Тетраборат натрия

Сульфат натрия безводный

Гидрохинон

Иетилфенидон

Карбонат калия

Роданид калия

Йодид калия

Вода дистиллированная

6-10 мин проявляют в цветном теле состава, г/л:

Гексаметафосфат натрия

Гидроксиламинсульфат

Диэтил-п-фенилендиамин

Карбонат калия

Сульфит натрия безводный

Бромид калия

Вода дистиллированная

5-7 мин отбеливают в отбелива состав, г/л:

Феррициакид калия

Фосфат калия однозамещенный

Фосфат натрия двуэамещенный

Вода дистиллированная До 1 л и 10-12 мин фиксируют в водном растворе тиосулъфата натрия кристаллического в концентрации 200 г/л, причем об " ч проявления проводят при о

25+0,5 С, а отбеливание и фиксирование при 20+1 C.