Способ очистки тиреоидных гормонов, меченых иодом-125

Способ очистки тиреоидных гормонов, меченых иодом-125

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, точнее к технологии радиоиммунного анализа. Цель изобретения - повышение чистоты целевого продукта. Для этого к препарату А (реакционная смесь, содержащая синтезированный [¹²⁵I]T₄ прибавляют гель иммуноаффинного сорбента и инкубируют при 18 - 22С 2 ч. Суспензию на микроколонке промывают водным щелочным раствором pH 11,0 до исчезновения детектируемой радиоактивности в элюате. Адсорбированный [¹²⁵I]T₄ элюируют 15 - 50% -ным раствором ацетонитрила, подкисленным до pH 2,0 - 4,0. 2 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно технологии радиоимпульсного анализа, а именно к способу очистки тиреоидных гормонов, меченых йодом-125 и предназначенных для радиоиммунного анализа. Целью изобретения является повышение чистоты целевого продукта. П р и м е р 1. Очистка [¹²⁵I] T4 при оптимальных значениях количественных показателей осуществления способа. В качестве исходного материала для очистки используют препарат А (реакционная смесь, содержащая синтезированный [¹²⁵I] T₄ или же препарат Б (хранившийся в течение 2,5 месяцев коммерческий препарат [¹²⁵I] T₄, изготовленный по ТУ 6-02-2-777-84). Специфическая связывающая емкость иммуноаффинного сорбента составляет 2,5 10^-9моль Т₄ в расчете на 1 мл уплотненного геля сорбента. К 2 мл препарата А или Б прибавляют 0,5 мл геля иммуноаффинного сорбента и инкубируют 2 ч при комнатной температуре. Затем суспензию переносят в микроколонку и промывают водным щелочным раствором с pH 11,0 (примерно 0,001 М NaOH) до исчезновения детектируемой радиоактивности в элюате. Адсорбированный [¹²⁵I] T₄ элюируют 20% -ным раствором ацетонитрила, подкисленным до pH 2,9. Значения параметров качества очищенного [¹²⁵I] T₄ приведены в табл. 1. П р и м е р 2. Очистка [¹²⁵I] T₃ при оптимальных значениях качественных показателей осуществления способа. В качестве исходного материала для очистки используют препарат А (реакционная смесь, содержащая синтезированный [¹²⁵I] T₃ или же препарат Б (хранившийся в течение 2,5 месяцев коммерческий препарат [¹²⁵I] T₃, изготовленный по ТУ 6-02-2-777-84). Специфическая связывающая емкость иммуноаффинного сорбента составляет 3,0 10^-9 моль Т₃ в расчете на 1 мл уплотненного геля. Все остальные операции выполняют, как описано в примере 1. Значения параметров качества очищенного [¹²⁵] T₃ приведены в табл. 2. П р и м е р 3. Очистка меченых тиреоидных гормонов при нижних граничных значениях количественных показателей осуществления способа. Используют те же исходные препараты и реагенты и проводят те же операции, как описано в примерах 1 и 2, за исключением того, что адсорбированные [¹²⁵I] T₄ или [¹²⁵I] Т₃ элюируют 15% -ным раствором ацетонитрила, подкисленным до pH 2,0. Значения параметров качества очищенных [¹²⁵I] T₄ и [¹²⁵I] T₃₃ приведены в табл. 1 и 2 соответственно. П р и м е р 4. Очистка меченых тиреоидных гормонов при верхних граничных значениях количественных показателей осуществления способа. Используют те же исходные препараты и реагенты и проводят те же операции, как описано в примерах 1 и 2, за исключением того, что адсорбированные [¹²⁵I] T₄ и [¹²⁵I] T₃ элюируют 50% -ным раствором ацетонитрила, подкисленным до pH 4,0. Значения параметров качества очищенных [¹²⁵I] T₄ и [¹²⁵I] T₃приведены в табл. 1 и 2 соответственно. П р и м е р 5. Экспериментальная оценка качества меченых тиреоидных гормонов, очищенных по способу-прототипу. Препараты А и Б (пример 1) очищают в точном соответствии с методикой способа-прототипа. Для целевых продуктов измеряют значения показателя иммунореактивности и коэффициента D = (B_о-B_макс)/T. Для определения D были использованы компоненты серийных радиоиммунных наборов рио-Т₄-ПГ (ТУ 42 11-84) и рио-Т₃-ПГ (ТУ 42 7-84). В формуле B_o - количество связанного меченого гормона в пробе с нулевой концентрацией стандарта из набора, B_макс - количество связанного меченого гормона в пробе с максимальной концентрацией стандарта из набора. Значения найденных параметров качества приведены в табл. 1 и 2. Из данных табл. 1 видно, что меченые тиреоидные гормоны, очищенные по предлагаемому способу, имеют более высокое качество, чем меченые тиреоидные гормоны, получаемые по способу-прототипу, так как первые имеют лучшие параметры радиохимической чистоты (РХЧ), иммунореактивности и коэффициента D. Кроме того, важнейшим преимуществом предлагаемого способа является то, что он обеспечивает воспроизводимое получение эталонных меченых соединений -[¹²⁵I] T₄ и [¹²⁵I] T₃ со 100% -ной РХЧ и иммунореактивностью. Эти ранее не достижимые характеристики качества дают возможность стандартизировать другие компоненты радиоиммунологических систем по эталонным [125I] T4 и [125I] T3. (56) Мишин В. И. , Колесникова И. И. , Утсаль О. Г. , Пономарева А. А. Разработка метода синтеза тиреоидных гормонов, меченых йодом-125, для радиоиммуноанализа, химия и технология изотопов и меченых соединений. - ГИПХ, Л. , 1984, с. 38-43.

Формула изобретения

СПОСОБ ОЧИСТКИ ТИРЕОИДНЫХ ГОРМОНОВ, МЕЧЕНЫХ ИОДОМ-125 включающий хроматографию с использованием в качестве элюентов раствора щелочи и органического растворителя, отличающийся тем, что, с целью повышения чистоты целевого продукта, хроматографию проводят на антителах, иммобилизованных на нерастворимой матрице, а в качестве органического растворителя используют 15 - 50% -ный водный раствор ацетонитрила, подкисленный до pH 2,0 - 4,0.

РИСУНКИ

Рисунок 1