Способ изготовления диагностического средства для определения лактатдегидрогеназы в биологических жидкостях
Иллюстрации
Показать всеРеферат
Изобретение относится к медицине , точнее к способам получения средства для обнаружения повышенной концентрации лактатдегидрогеназы. Цель изобретения - повышение диагностической точности средства. Для этого готовят водный р-р из следующих компонентов , мг п-нитроблаунитрозолийхлорид (0,490), гидрохлорид триэтаноламина 49,00, ацетат натрия 18,500, НАВ(аденозин 5 -тpигидpoдифocфaт З -(5 -эфир с гидроокисью 3-)аминокарбонил (-1-р-П-рибофуранозил-ш1ридина, внутренняя соль) 2, фенацинметасульфат 0,049, вода очищенная ,961. Добавляя 3 н.НС устанавливают рН р-ра равной 3, смесь наносят на гигиенический тампон, находящийся в оболочке из сополимера винипхлорида и поливинипиденхлорида. . 2 з.п. ф-лы, 2 табл. О)
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
КСПУБ ЛИК
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К IlATEHTV
ГОСУДАРСТВЕННЬЙ КОМИТЕТ СССР
I (2! ) 3633940/28-14 (22) 05. 08 ° 83 (31) P 3231288. 1 (32) 23.08.82 (33) РЕ (46) 30. 12.88. Бюл. I 48 (71) Меди-Фарма Фертрибс-Гезельшафт
МБХ (РЕ) (72) P. В. Штайбах. (DE), А. К. Роу (IN) и П. Краусс (DE) (53) 612.015 (088.8) (56) Патент Англии Ф 893301,: кл. С 12 Я 1/32, 1978. (54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКОГО СРЕДСТВА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛАКТАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ В БИОЛОГИЧЕСКИХ МИДКОСТЯХ (57) Изобретение относится к медицине, точнее к способам получения сред. SU„„1449012 АЗ (я) 4 С 12 Q 1/32 С 01 N 33 48 ства для обнаружения повышенной концентрации лактатдегндрогеназы. Цель изобретения - повышение диагностической точности средства. Для этого готовят водный р-р из следующих компонентов, мг: п-нитроблаунитроэолийхлорид (0,490), гидрохлорид триэтаноламина 49,00, ацетат натрия 18,500, ИА0(аденозин 5 -тригидродифосфатс)
5 -(5 -эфир с гидроокисью 3-)аминокарбонил (-1-p-D-рибофураноэил-пиридина, внутренняя соль) 2, фенацинметасульфат 0,049, вода очищенная
1948,961. Добавляя 3 í.НС1 устанавливают рН р-ра равной 3, смесь нано- сят на гигиенический тампон, находя- Я щийся в оболочке иэ сополимера винкпхлорида и поливинкпиденхпорида.
2 з.п. ф-лы, 2 табл.
1449012
2,000
0,049
1948,961
2019 000 30
Шерсть
Белки
Природный
Дралон
Найлон
Изобретение относится к медицине, в частности к способам получения средства для обнаружения повышенной концентрации лактатдегидрогеназы.
Цель изобретения — йовышение диагностической точности средства.
Пример 1. Готовят водный раствор из укаэанных ниже компонентов.
Указанные количества наносят соответ- 10 ственно на тампон.
Состав раствора следующий, мг: п-Нитробляунитрозолийхпорид 0,490
Гидрохпорид триэта- 15 ноламина 49,000
Натрий ацетат 18,500
ЯАЭ(аденоэин
Ф
5 -тригидродифосфат) 5 — (5 -эфир с гидрокисью 3-)аминокарбонил(-1-рD-рибофуранозиппиридина, внутренняя соль)
Фенацинметасульфат
Вода очищенная
Соответствует 2,00 мл.
Добавлением 3 н.соляной кислоты устанавливают РН-3 и затем в количестве 2,00 мл смесь наносят на обычHbIH гигиенический тампон, котоРый на- 35 ходится в упаковочной коробочке с внутренним покрытием из химически инерционной пленки, состоящей из сополимера винилхлорида и поливинилиденхпорида, Эта оболочка в свою оче- 40 редь находится в алюминиевой трубочке.
Всю систему высушивают при замораживании. Непосредственно после этого алюминиевую трубочку закрывают В Ва 45 кууме резиновой пробкой. Алюминиевую трубочку открывают лишь непосредственно перед применением содержащегося в ней диагностического средства, которое вынимают.
Пример 2. Готовят водный раствор иэ компонентов, укаэанных в примере 1.
Затем добавлением 3 н, соляной кислоты устанавливают РН = 4,9 н
5 поступают, как описано в примере 1.
Полученное таким образом диагностическое средство дает такой же положительный эффект.
Диагностическое средство предназначено для распознавания патологических состояний организма путем выявления с его помощью повышенных концентраций лактатдегидрогеназы во внеклеточных жидкостях, Так могут быть установлены раковые заболевания женских органов, а также могут быть определены инфекции, взыванные бактериями, паразитами, грибами. При серийных исследованиях с гистологически определенными карциномами в генитальной области на стадиях I u IV только
107 диагнозов оказались неправильными, Средство в виде тампона, применяемое для исследования внутри тела, например во влагалище, не вызывает раздражения слизистой оболочки, прн этом перехода красителя на слизистую и другие ткани не происходит и не вызывает побочных реакций внутри и на теле исследуемого пациента.
В отсутствии носителя полярными группами окрашивания смеси не происходит. Исследованию могут подвергаться: влагалищный секрет, сыворотка крови, желудочный и кишечный сок, желчь, выделения бронхов, простаты, уретры.
В качестве субстрата в средстве предпочтителен лактат натрия, но может использоваться лактат калия или кальция.
В качестве буферной системы используют триэтаноламингидрохлорид или эквивалентную смесь триэтаноламина н соляной кислоты.
В качестве красителя используют соли тетразолия, бензидиновые красители, индофенолы.
Соединением, передающим водород, могут быть фенозинметасульфат, диафоразен, менадион, мелдола-блау.
Опытные данные об испытаниях различных носителей приведены в табл. 1.
Таблица l
Полиакрило- Синтетичеснитрил кий
Полиамид 6.6 СинтетичесКН A
1449012
Продолжение табл.1 кие группы, как в случае полиакрилонитрила. Полиэфиры - поликонденсатные волокна с сложноэфирными группами дикарбоновых кислот и двувалентных спиртов, и соответствуют, например, след лощей структуре:
-О-CH
И 11
10 О О
Используемые волокнистые носители экстрагировали в течение 1О мин при о
35 С метиленхлоридом.
Из экстрагированных волокон прнб15 лизительно одинаковые количества помещали в реакционный сосуд и смешивали с 1 мл индикаторного раствора следующего состава, мг: и-Нитроблаутетразолийхлорид 0,490
Гидрохлорид триэтаноламина
Ацетат натрия
ИА0(аденозин 5 дигидрофосфат)5 / (5 -эфир с 3-)аминокар бонил (1- р; — 1рибофуранознл-пиридинийгидроксидом, 30 внутренняя соль)
Фенацинметасульфат
Вода очищенная
1 1
Полиноэик
Целл апоза, модифицированная
Полиакрил, модифицированный
Полиэфир
Регенерат
Дунова
Синтетический
Диолен
Синтетический шерсти - кератин:
49,000
18,500
2,000
0,049
1948,961
Полиамид 6,6 (найлон): поликонденсат со структурой амида кислоты (белковая связь) из гексаметилендиамина и адапиновой кислоты следующей структуры:
-нн-(сн,)-мн- с — сн,) — с—
26 24 о о
Регенерат целлюлозы. Различие в вискозных волокнах лежит лишь в гистологическом строении волокон. Функциональными группами являются гидвоксильные, ацетальные, альдегидные и кар- 45 боксильные группы.
Полиакрилонитрил (дунова): различие для обычных полиакриловых волокон (дралона) лежит в строении волокна. функциональными группами являются та- 50
Носитель
5-8
Белок (шерсть) Темносиняя
Носители имели следующие химические строения.
Персть: полипептид иэ различных аминокислот ° Главная составная часть
Н Н
I 1
МН вЂ” С вЂ” СΠ— NH — С вЂ” СО—
I I
В1 2
Полиакрилонитрил - полимерное волокно следующей структуры:
-сн -сн-сн — сн- сн —
2 2 2
CN CN
2019,000
Соответствует 2,00 мл.
Раствор, добавлением 3 н. соляной кислоты, устанавливают на значении рН 4,4-4,6. Пробы носителей, приготовленные с полученным индикаторным раствором, вымораживали в течение 2 ч в морозильном шкафу и затем высушивали вымораживанием в течение 17 ч.
Затем в заключение в результате добавления соответственно 1 мп 1 М раствора аскорбата натрия проводили реакцию, протекающую как при применении средства в соответствии с изобретением в случае положительного диагноза (образование красителя).
Результаты приведены в табл. 2.
Таблица 2
1449012
Полиакрилонитрил (драло н) 3-5
1-2
Полиамид 6.6(найлон) 5-8
Полинозик (модифицированная целлюлоза) Полиакрил (дунова) 3-5
Полиэфир (ди олен) 4-6
2-3
Полиноэик (модифицированная целлюлоза)
Полиакрил (дунова) т5
Метиленхлорид
Полна крил оНИTPEUI (дралон) увеличивается.
Слегка синий
Прозрачная 4
Полиамид
Ь,Ь(найлон) В табл. 2 в графе "смачивание" указаны цифровые значения, которые дают ступень смачиваемости носителя индикаторным раствором при визуальной оценке. Шкала оценки принята от 1 (очень хорошо) до 5 (недостаточно). г
Для определения "прочности окраски" или степени фиксирования образукяцегося на волокне красителя (диформазана) на соответствующем носите- 30 ле испытывали окрашенные пробы следующим образом: а) пробы промывали в моющей ванне при соотношении 1:40, т.е. 1 г о носителя в 40 мп жидкости, при 20 С 35 в течение 5 мин, После этого визуально оценивали соответствующее помутнение или окрашивание воды; б) пробы были промыты метиленхлоридом или хлороформом, окрашивание растворителя также оценивали визуально.
Результаты, полученные в пунктах а и б, даны дополнительно в табл.3.
Та блица 345
Носитель Вода
Белок (шерсть)Прозрач- Слегка синий ная 2 2
Проэрач- Слегка синий на я 3 1-2
Продолжение табл.2
Г 1
Продолжение табл.3
Проэнач- Слегка синий ная 1 1-2
Проэрач Слегка синий ная 3 3 4
При применении хлороформа в качестве растворителя в основном получают такие же результаты, как в случае метиленхлорида.
Как видно из табл. 3, краситель диформаэан глубоко фиксируется на волокнах. В то время, как при обработке водой смывается лишь незафиксированный диформаэан, метиленхпоридом или хлороформом он частично растворяется. В результате этого следует также подкрашивание органического растворителя, В табл, 3 в графах "вода" и
"метиленхлорид" указаны цифровые значения, которые соответствуют количеству незафиксированного красителя (в случае воды смываемого с волокна красителя, в случае органического растворителя красителя, перешедшего в раствор). С увеличением числовых значений количество смываемого или растворенного красителя
Во всех случаях испытаний прочности окраски носитель имел темносинее окрашнна, т. е. краситель
144901 2 был резвычайно прочно зафиксирован на носителе °
Как видно из результатов опытов, все исследованные носители пригодны для применения средства в соответствии с изобретением.
Составитель А. Агуреев
Техред Л.Олийнык
Корректор Л. Пилипенко
Редактор А. Долинич
Заказ 6856/58 Тираж 520 Подписное
ВН1ЯПИ Государственного комитета по Изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, r Ужгород, ул. Проектная, 4
Формула изобретения
1. Сп пособ изготовления диагностического средства для определения лактатдегидрогенаэы в биологических жидкостях, включающий растворение окислительно-восстановительного красите15 ,ля, буферной системы, никотинамицаденин-динуклеотида, соединения,. передающего водород, и лактата, коррекцию рН полученной смеси, нанесения этой смеси на носитель, связывающий окислительно-восстановительный краситель, отличающийся тем, что, с целью повышения диагностической точйости средства, используют носитель, имеющий полярные группы, а рН смеси корректируют в диапазоне 3,0-4,9.
2. Способ по и. 1, о т л и ч аю шийся тем, что в качестве носителя используют целлюлозные волокна.
3. Способ по пп. t и 2, о т л и ч а ю щ и и r я тем, что буферную систему используют в виде триэтаноламингидрохлорида или в форме нестехиометрической смеси иэ триэтаноламина и хлористого водорода.