Способ идентификации микробов
Иллюстрации
Реферат
ОПИСАН И Е
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
l4496l
Союз Советских
Социалистических
Республик
Зависимое GT авт, сзидетельства ¹â€”
Кл. 301г, 14
Заявлено 15Х(11 1959 (№ 636694/31) с присоединением заявки ¹
Приоритет
Опубликовано 31 V.1967. Бюллетень № 12
Дата опубликования описания 4Л III.1967
МПК А 61k
УДК 615.45: 576.8,093.1 (088.8) йомитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров
СССР
Автор изобретения
А. К. Адамов
Заявитель
С11ОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКРОБОВ
Адсорбционные связи антигенов и антител с различными обьсктами используются в микробиологии с различной степенью эффективности для идентификации микробов.
Предлагаемый способ идентификации микробов обеспечивает значительное упрощение и ускорение исследований. Отличительной особенностью em является использование при идентификации микробов путем агглютинации на стекле иммунных сывороток, адсорбированных на ализариновой суспензии. Иммунные сыворотки должны быть консервированы борной кислотой.
Для осуществления способа вначале приготовляют «лизариновую суспензию, к которой затем добавляют диагностическую агглютинирующую сыворотку, консервированную борной кислотой. Ализариновые частицы суспензии адсорбируют агглютинины видовой монорецепторной сыворотки (титр не ниже
1: 800). Полученный препарат сохраняют и используют для реакции агплютинации микробов на стекле.
Для приготовления ализариновой суспензии в фарфоровую ступку помещают 1,0 порошка кристаллического ализарина и 3 час растирают его пестиком с 2 — 3 л бидистиллированной воды (рН=7,0 — 7,2). Через 3 час полученную суспензию разводят 18 лгл бидистиллированной воды. При этом образуется равномерная однородная суспензия, которую дважды центрифугируют с декатпрованием надссадочной жидкости н суспендированием получаемых осадков в оидистпллированной воде (20 лг.г первый раз и 90 лг г второй). Полученную суспензию переносят в колбочку с фарфоровыми бусами и встряхивают в течение 15 лгин.
Крупные частицы удаляют центрифугиро10 ванием, а надосадочную жидкость фильтруют под небольшим вакуумом через мембранные фильтры с диаметром пор 3 — 5 лгк, получая в фильтрате преимущественно (свыше 90%) частицгп величиной 1,0 — 1,6 лгк. Получение
1> устойчивой суспензии с такой величиной частиц требует высококачественных реактивов и определенного навыка работы с суспензиями.
Для адсорбции агглютининов на частицы
20 ализариновой суспензии к 10 лг г последней добавляют 2 лгл диагностической видовой монорецепторной агглютинирующей сыворотки с титром не ниже 1: 800, разведенной 1:5 или 1: 10 физиологическим раствором, содер25 жащим 1% борной кислоты. Смесь, периодически перемешивая, выдерживают 2 час при
37 С, затем помещают на 18 час в холодильник (температура +4 — 8 ), перемешивают и центрифугируют до полного просветления
30 жидкости. Надосадочную жидкость удаляют
144961
Предмет изобретения
Редактор Т. II. Караиова Техред T. П. Курилко Корректоры; М. П. Ромашова и T. д. Чуиаева
Заказ 2381 6 Тираж 535 Подписное
ЦНИИПИ Комитета пс делам изоорстений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, Центр, пр. Серова, д. 4
Типография, пр. Сапунова, 2 декантацией, а к осадку добавляют 10 л л физиологического раствора, содержащего
0,5в/в борной кислоты.
Препарат, консервированный 0,5в в борной кислоты, в запаянных ампулах при температуре +8 — 12 сохраняет иммунологическую активность и специфичность около 12 месяцев.
Для осуществления реакции агломерации на тщательно обезжиренное предметное стекло наносят каплю препарата и к ней добавляют две капли исследуемой микробной взвеси. Капли перемешивают платиновой петлей и распределяют по предметному стеклу в виде квадрата 20Х20 мм. Контролем служит 15 капля препарата, смешанная с двумя каплями гетерологичных микробов, капля препарата, смешанная с двумя каплями физиологического раствора, и капля адсорбированного на ализариновой суспензии нормального кро- 20 личьего глобулина (приготовляется аналогично описываемому препарату), смешанная с двумя каплями исследуемой микробной взвеси. При легком покачивании предметного стекла через 5 — 10 иия (в зависимости от концентрации гомолог1ичных микробов в исследуемой взвеси) происходит скучивание частиц ализарина в крупные агломераты с частичным или полным просветлением жидкости, тогда как контрольные капли остаются гомогенными.
Способ идентификации микробов при помощи агглютинации на стекло, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения исследования, применяют иммунные сыворотки, консервированные борной кислотой, адсорбированные на ализариновой суспензии.