Питательная среда для культивирования инфузорий

Питательная среда для культивирования инфузорий

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к области прикладной биологии и может быть использовано для культивирования простейших при токсико-биологических исследованиях в условиях сельскохозяйственного производства. Целью изобретения является повышение выхода биомассы инфузорий. Питательная среда для культивирования инфузорий содержит глюкозу, морскую соль, лиофилизат куколок дубового щелкопряда и воду при следующем соотношении компонентов (1 г на 100 мл среды): глюкоза 0,49-1,50; морская соль 0,09- 0,76, лиофилизат куколок дубового шелкопряда 0,3-1,50; вода до 100 мл, рН среды составляет 7,1-7,5. Среда позволяет увеличить рост клеток инфузорий с 45,6 до 93,4%, сохранить их высокую подвижность без функциональных и морфологических изменений. 4 табл. (Л

1160 А1

СОЮЗ СО8ЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) ИИ

1511 4 С 12 N 1/00, r:,rÃ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЭОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4151993/31-13 (22) 28.11.87 (46) 15.01.89. Бюл. Ф 2 (71) Украинская сельскохозяйственная

Академия и Украинский научно-исследовательский ветеринарный институт (72) Т.Б.Аретинская, В.Я.Шаблий, А.И.Собко, В.П.Сапейко, Ю.А.Колос и Т.А.Атражева (53) 576.8 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

В 77046, кл. С 12 N 1/20, 1949 °

Авторское свидетельство СССР

N2 810813, кл. С 12 N 1/12, 1981 ° (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДПЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ИНФУЗОРИЙ (57) Изобретение относится к области прикладной биологии и может быть использовано для культивирования простейших при токсико-биологических исследованиях в условиях сельскохозяйственного производства. Целью изобретения является повышение выхода биомассы инфузорий. Питательная среда для культивирования инфузорий содержит глюкозу, морскую соль, лиофилизат куколок дубового щелкопряда и воду при следующем соотношении компонентов (1 г на 100 мл среды): глюкоза 0,49-1 50 морская соль 0,090,76; лиофилизат куколок дубового шелкопряда 0,3-1,50; вода до 100 мл, рН среды составляет 7,1-7,5. Среда позволяет увеличить рост клеток инфузорий с 45,6 до 93,47, сохранить их а высокую подвижность без функциональных и морфологических изменений.

4 табл.

1451160

Изобретение относится к прикладной биологии и может быть использовано для культивирования простейших при токсико-биологических исследова5 ниях в условиях сельскохозяйственного производства.

Цель изобретения — повышение выхо" да биомассы инфузорий.

Питательная среда для культивирования инфузорий содержит глюкозу, морскую соль, лиофилиэат куколок дубового шелкопрядв и воду при следующем соотношении компонентов, 1 r на 100 мл среды: глюкоза 0,49-1,50, морская соль 0,09-0,70, лиофилизат куколок дубового шелкопряда 0,31,50, вода до 100 мл, рН среды составляет 7,1-7,5.

Используемые куколки дубового 20 шелкопряда являются отходами шелкомотального производства и образуются на стадии раэмотки или расчески коконного сырья.

Лиофилизат куколок готовят следующим образом.

Куколки моновольтинной породы дубового шелкопряда гомогенизируют, гомогенат пропускают через несколько слоев марли, разливают во флаконы и сублимируют.

Промораживают гомогенаты в течео ние 3 5-4 ч при -43-45 С, высушивают.

Изобретение иллюстрируется приведенными примерами.

Пример 1. В мерную колбу на

100 мл вносят 1,0 г лиофилизата куколок дубового шелкопряда, 0,1 г морской соли и 1,5 г глюкозы, доливают до 100 мл дистиллированную воду, ро- 40 водя рН среды до 7, 1. Смесь переносят в пробирки по 1,5 мл, а в плоскодоцные колбы по 10-20 мл с тем, чтобы слой не превышал 1 см. Стерилизуют в течение 20 мин при давлении 45

0 5 атм. Затем культуру инфузорий в количестве 0,2 мл высевают в среду и выращивают в течение 24 ч при комнатной температура (18-20 С). В пос" . л% ующем среды с культурой инфузории 50 о переносят в холодильник при 4 С.

Через 6 мес. хранения количество .клеток в среде составляет 41-63 ° 10 в 1 мл и наблюдается их высокая биологическая активность (за 1 мин пересекают одну сторону малого квадрата камеры Фукса-Розенталя 50-60 особей), в то время как на известной (пептонной). среде наблюдается снижение

Таблица 1

Субстрат

Среднее количество

Содержание субстрата в 1 мл среды, мг выросших клеток инфузорий в

10 квадратах камеры

Фукса-Розенталя,шт

100

25,5

2,0

Лиофилиэат куриного яйца.4,0

100

35,2

100

56,7

6,0

100

50,9

8,0

164,9

193,4

171,9

145,6

41,3

2,0

Лиофилизат куколок

68,1

4,0

107,5

6,0

74,1

8,0

При визуальных наблюдениях отмечается бурный рост и высокая активность инфузорий через 24 ч роста.

Как видно из табл.1, при внесении равного количества. сравниваемых лиофилизатов — куриного яйца и куколок — количество выросших клеток инфузорий на субстрате куколок значительно выше, чем на субстрате куриного яйца. Полученные результаты свидетельствуют о высокой питательной ценности и биологической активности предлагаемого компонента среды.

Количество выросших клеток инфузорий в зависимости от концентрации лиофилизата представлено в табл.2 ° активности (po 20-30 особей) и разложение клеток через 7 дней хранения.

Лиофилизат куколок шелкопряда обладает более высокой биологической ценностью по сравнению со стандартом — белком цельного куриного яйца (табл.1).

Рост клеток инфузорий на известном и предлагаемом белковом компоненте показан в табл. 1.

1451160

Таблица 2

Количество ннфуеорнй в десяти квадратах канары ФухсаРоеекталя

Содеркание лиофили э а» та куколок г/100 ил среды (3

28 37

0,3 33 28 28 26 35 33

Рост клеток культуры инфузорий и активность особей зависят от состава среды (табл.3).

Установлено, что наибольший рост инфузорий наблюдается при содержании в среде лиофилизата куколок в количестве 0,3-1,50 r на 100 мл среды. л

Таблица 3

Показатели

Весовые показатели компонентов среды

0,25 0,49 1,00 1,50 3,00

0,04 0,09 0,3 0,70 1,00

Глюкоза, r

Морская соль, г

Лиофилизат куколок, r

0,015 0,3

1,00 1, 50 3,00

Вода дистиллированная, мл

100 100

100 100 100

Количество клеток (шт) 17,8 62,9 74,1 39,3 Единичные клетки

Активность особей 22

60 45 Атаксия

П р и м е ч а н и е: активность особей выражена количеством особей, пересекающих одну сторону малого квадрата камеры

Фукса-Розенталя.

При соотношении компонентов . рону квадрата камеры Фукса-Розенталя. (г/100 мл) глюкозы 0,49-1,50, морс- Уменьшение компонентов приводит к кой соли 0,09-0,7, лиофилизата куко- снижению роста и активности клеток, лок 0,3-1,50 количество выросших в увеличение заграничных параметров течение 3 сут инкубации клеток сос- вызывает атаксию (неподвижность) тавляет 62,9-39,3, активность 51-45 и гибель клеток. особей пересекает эа 1 мин малую сто0,1 17 19 17 17 16 13 26 14

0,50 55 39 51 34 34 45 38 52

1,00 67 - 56 73 77 79 76 83 76

1 50 72 65 67 53 76 80 81 75

2,00 36 31 33 25 21 23 26 21

16 19 17,4

30 26 30,4

40 35 42,3

77 75 73,9

72 73 71,4

23 25 26,4

5 14511

Пример 2. В мерную колбу на

100 мл вносят 0,4 r глюкозы и 0,09 г морской соли, затем добавляют 0,3 r лиофилизата куколок дубового шелко-

5 пряда, доливают до 100 мл дистиллированную воду, доводя рН среды до

7, 1. Смесь переносят в пробирки по

1,5 мл, а в плоскодонные колбы по

10-20 мл с тем, чтобы слой не превы- 1ð шал 1 см. Стерилизуют в течение

20 мин при добавлении 0 5 атм. Затем культуру инфузорий в количестве

0,2 мл высевают в среду и выращивают в течение 24 ч при комнатной темпера- 16 туре (18-20 С).

В последующем среды с культурой инфузорий переносят в холодильник и хранят при 4 С. Как свидетельствуют результаты наблюдений, при исполь- 20 зовании данного соотношения компонентов среды наблюдается интенсивный рост клеток инфузорий (их количество составляет 62,9 шт). и максимальная их

Таблица 4.Среднее количество клеток инфузорий в 10 квадратах камеры Фукса-Розенталя, шт, за период инкубации, сут

Исследуемый субстрат

Г Г

2 3 4

Лиофилизат куколок дубового шелкопряда 1,5 г/мл 40,0

61,1 101,5 100,8

Экстракт куколок тутового шелкопряда 1,5 мл/мл

8,0

3,2

15 0 ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, g6 она дополнительно содержит лиофилизат куколок дубового, шелкопряда при следующем соотношении компонентов, 1.г на 100 мл среды: Глюкоза, 0,49-1,50

Морская соль 0,09-0,70

Лиофилизат куколок дубового шелО, 3-1, 5()

Остальное копряда

Вода

ВНИИПИ Заказ 7036/20 Тираж 500 Подписное

Произв,-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Таким образом, предлагаемый состав среды с использованием дубового шелкопряда является более эффективным для культивирования инфузорий тетрахимена периформис, используемых при токсико-биохимических исследованиях.

Формула изобретения

Питательная среда для культивирования инфузорий, содержащая глюкозу, морскую соль и воду, о т л и— активность (за 1 мин пересекают одну сторону малого квадрата-камеры ФуксаРозенталя 51 особь, табл.3). Приведенные данные примера показывают, что данное соотношение компонентов среры позволяет максимально увеличить рост клеток инфузорий и их активность.

Таким образом, установлено, что высокопитательная добавка в среде, состоящая из глюкозы, морской соли и лиофилизата куколок дубового шелкопряда в количестве 0,1-1,5 г, обладает высокой эффективностью, позволяет увеличить выход и биологическую активность инфузорий.

Пример 3. Культивирование инфузорий осуществляют по способу, приведенному в примере 1, но в качестве белковой основы используют в одном случае лиофилизат куколок дубового шелкопряда, в другом — экстракт куколок тутового шелкопряда. (табл.4),