Способ определения жизнеспособности клеток

Способ определения жизнеспособности клеток

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

!

Класс 45 og

/ (СССР

Мо 145398

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Подписная группа JH 188

Петре Илие Диакону

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ КЛЕТОК

Заявлено 28 декабря 1960 г. за ¹ 691164/30-!5 в Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Опубликовано в «Бюллетене изобретений> № 5 за !962 г.

Известны способы определения жизнеспособности клеток путем помещения их в раствор трифенилтетразол хлорида, в котором живые клетки окрашиваются в красный цвет.

В отличие от известного, с целью использования этого способа для определения жизнеспособности пыльцевых зерен, которые лопаются в водном растворе, пыльцевые зерна помещают в раствор трифенилтетразол хлорида в буфере с рН = 7,2 приготовленном, например, из солей

NaHPO4 . 2Н О и КН2Р04

На фиг. изображена жизнеспособная (на чертеже черная) пыльца кукурузы; на фиг. 2 — смесь жизнеспособной и мертвой (на чертеже светлая) пыльцы.

Определение жизнеспособности клеток основано на том, что с прекращением жизнеспособности прекращается дыхание. В основе предлагаемого способа лежит выявление активности ферментов дегидразной системы в процессе дыхания живой пыльцы.

Дегидразы катализируют отнятие водорода и тем самым окисление данного вещества и осуществляют перенос водорода к другому веществу.

Для определения активности дегидраз используется реактив трифенилтетразол хлорид, который присоединяет катализируемый дегидразами водород и дает цветную реакцию, позволяющую четко отличить мертвые клетки от живых.

Красное соединение формазан (в случае живой пыльцы) образуется по следующей формуле:

N — N — С,Н, N — NH — С,Н, у +2H

«

CH — C — C6H5 — С

N=N — С,Н, N = N — СвН„, CI № 145398

Для определения жизнеспособности пыльцы предлагаемым методом рекомендуется следующая последовательность работы:

Приготовить О,1",ь раствор трифенилтетразол хлорида в 0,1 я фосфатного буфера (рН = 7,2), нанести пыльцу на предметное стекло, капнуть на пыльцу фосфатный буфер (pH = 7,2) и выдержать 4 — 5 мин.

После этого буферный раствор осторожно отсосать фильтровальной бумагой. Затем нанести 1 — 2 капли раствора трифенилтетразол хлорида, накрыть покровным стеклом и поставить в термостат на 30 лия. при температуре 37 .

Для определения процента жизнеспособности пыльцы под микроскопом просматривается не менее 3 — 5 препаратов по 5 полей зрения в каждом. Красное окрашивание пыльцевых зерен указывает на присутствие дегпдразной активности, то есть на жизнеспособность пыльцы.

Мертвые зерна не окоашиваются и остаются желтыми (на чертеже светлые) .

Предложенный метод дает точное представление о качестве пыльцы в момент цветения исследуемых самоопыленных линий, что особенно важно и необходимо при осуществлении перехода к семеноводству гибридной кукурузы на стерильной основе.

Всесоюзный научно-исследовательский институт кукурузы одобряет предложенный спосо6, та«как oat представляет интерес Zap npaxTv teских работ в области селекции, генетики и других смежных наук в тех случаях, когда необходимо проверить способность пыльцы к оплодотворению после определенного периода ее хранения.

Предмет изобретения

Способ определения жизнеспособности клеток путем помещения их в раствор трифенилтетразол хлорида, в котором живые. клетки окрашиваются в красный цвет, отличающийся тем, что, с целью использования этого способа для определения жизнеспособности пыльцевых зерен, которые лопаются в водном растворе, пыльцевые зерна помещают в раствор указанной соли в буфере с рН=7,2, приготовленном, например, из солей NaHPO4 2Н О и КН Р04. № 145398

Фиг I

Pup 2

Составитель описания А. С. Акимов

Редактор М. И. Бородина Техред А. А. Кудрявицкая Корректор Н И. Кулешова

Подп. к. печ 13.IV-62 г. формат бум. 70Х108 /,а Объем 0 26 нзд. л.

Зак. 3568 Тираж 600 Цена 4 коп.

UETH Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Центр, М, Черкасский пер., д. 2/6.

Типография ЦБТИ, Москва, Петровка, 14.