Способ контроля безвредности коклюшной вакцины

Способ контроля безвредности коклюшной вакцины

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к способам оценки безвредности коклюшной вакцины. Цель изобретения - повьшгение чувствительности способа. Для осуществления способа выделяют альвеолярные макрофаги мьш1ей, смешивают их с агарозой и вносят на дно планшетов. Затем добавляют исследуемую вакцину. После инкубирования оценивают подвижность макрофагов по величине индекса миграции. Безвредная вакцина не должна оказывать ингибирукнцего действия на подвижность альвеолярных макрофагов. По чувствительности способ превосходит сушествукнцие методы контроля. 1 табл.

СОЮЗ СО8ЕТСНИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧЕСНИХ

РЕ(ЮУБЛИН

„„Я0„„) 454473 д1

yII 4 А 61 К 39/10 С 12 Q 1/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к способам оценки безвредности коклюшной вакцины.

Целью изобретения является повыше-. 5 ние чувствительности способа.

Пример. Вьщеляют альвеолярные макрофаги мышей, доводят их концентрацию до 1х10 и кл в мл среды 199. 10

В 3, 5 мл среды 199 добавляют 20 мг агарозы и растворяют на кипящей водяной бане. После полного растворенная агарозы температуру раствора доводят до

60 С и добавляют 1,5 мл инактивиро- 15 ванной прогреванием сыворотки крупного рогатого скота. Суспензию клеток смешивают с равным объемом раствора агарозы и поддерживают температуру

60 С. С помощью микрошприца на дно 20 прогретых до 37 С пластиковых плано шетов наносят по 1 мкл смеси клеток

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И (Л11РЫТИЯМ

ПРИ ГХНТ СССР (21) 4115016/28-13 (22) 10.09.86 (46) 30.01.89. Бюл. р 4 (71) Центральный научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова (72) В.А.Таранов, Л.Н.Падюков и M.Н.Озерецковская (53) 576.8.093.35 (088.8) (56) ЖИЭИ, 1982, II 5, с.53-57. (54) СПОСОБ КОНТРОЛЯ БЕЗВРЕДНОСТИ

КОКЛЮШНОЙ ВАКЦИНЫ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к спосо6аМ оценки безвредности коклюшной вакцины. Цель изобретения — повьппение чувствительности способа. Для осуществления способа выделяют альвеолярные макрофаги мьппей, смешивают их с агарозой и вносят на дно планшетов.

Затем добавляют исследуемую вакцину.

После инкубирования оценивают подвижность макрофагов по величине индекса миграции. Безвредная вакцина не должна оказывать ингибирующего действия на подвижность альвеолярных макрофагов. По чувствительности способ превосходит существующие методы контроля. 1 табл. с раствором агарозы. Затем планшеты

С. охлаждают до 4ОС 10 мин для застыва- Я ния нанесенных капель смеси, после чего в лунки добавляют 0,4 мл среды Э

199 с добавлением 50 ед/мл пеницилли- пф, на и исследуемой вакцины. Лунки герметизируют нетоксичной лентой для заклеивания планшетов и помещают в ф термостат при 37 С на 20 ч. 3

По окончании времени инкубации планшеты рассматривают под микроскопом, предварительно перевернув их дном лунок вверх. Подвижность клеток оценивают, измеряя диаметр зон миграции в двух взаимно перпендикулярных направлениях с помощью шкалы микрометра. Изменение подвижности макрофагов оценивают по величине индекса миграции (ИМ), который рассчитывают по формуле:

1454473 диаметр зоны миграции в опыте

Диаметр зоны миграции в контроле

1 !1007

Вакцина не должна оказывать ингибирующего действия на подвижность альвеолярных макрофагов.

Изменением подвижности считают т оказатели ИИ, отличающиеся от контоля при р ь 0,05.

При исследовании действия корпусулярной коклюшной вакцины из штамма

05 на подвижность альвеолярных макофагов установлено, что угнетение одвижности происходит при использоании вакцины в концентрациях

00 млн.м.кл/мл, 1 мпра и 10 мпра .кл/мл (см. таблицу).

При испытании той же вакцины по

° ° ° ° ° ° способу-прототипу было установлено, то последняя безвредна в концентра-. менее 312,5 млн.м.к./мл. По даитеста на токсичность для мьппей анная вакцина была токсична в дозе 25

10 мпра м.к.

Таким образом, предложенный способ контроля безвредностикоклюшной вакцины в 3 раза чувствительнее способа-прототипа и в 10 раз чувствительнее теста на токсичность для мышей.

Аналогичные результаты получены . при испытании коклюшных вакцин, приготовленных из Bordetela pertussis

35 ,штаммов 38, 312, 345, что свидетель ствует об универсальности способа.

I культуры in vitro с последующим учетом результатов по сравнению с контролем, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве тест-культуры клеток используют альвеолярные макрофаги мьппей и безвредность вакцины определяют по изменению подвижности макрофагов.

Влияние коклюшной вакцины (штамм 305} на подвижность альвеолярных макрофагов

Индекс миграции, 7

КоклюшКонцентрация микр.кл/м ианая вакцина штамм

305 метр зон мигра ции

109+ 7 + 0+6

101+8

100+6

100+7

10

83+9 -24

76+7 -30 б 5+1 0 -40

10

Формула изобретения

Диаметр зон миграции в мкм (доверительный интервал с вероятностью больше или равной

957.) .

Способ контроля безвредности коклюшной вакцины при совместном инкубировании исследуемой вакцины и тестСоставитель В.Дроздов

Редактор Н.Горват Техред М.Ходанич Корректор И.Муска

Заказ 7375/11

Подписное

Тираж 644

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, N-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r Ужгород, ул. Проектная, 4