Способ культивирования нервной ткани

Способ культивирования нервной ткани

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биологии и медицине и позволяет в условиязс in vivo получить высококачественные культуры нервной ткани за срав- - нительно короткий срок с повышенным выходом зрелых нейронов и глиальных клеток. С целью получения высокодифференцированной нервной ткани из эмбриональных зачатков закладки эмбриональных нейральных тканей помещают на нуклеопоровые фильтры, из которых изготовлены диффузионные камеры. Диффузионные камеры после герметиз - ции имплантируются свободно в илеоцекальную область полости крыс-рецепиентов сроком до 20 сут. Предлагаемый способ может быть использован в экспериментальной нейробиологии для изучения закономерностей гистогенеза и в клинической практике для лечения ряда дистрофических заболеваний, связанных с дефицитом , нейромедиаторных и нейроэндокринных состояний.. § (Л С

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (5D 4 С 12 М 1/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

Н А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 403509 á/25-14 (22) 17.03.86 (46) 30.01 89. Бил.N - 4 (71) Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины

АМН СССР (72) Е.И.Чумасов и П.А.Дыбан (53) 615.475(088.8) (56) Методы, Техника, Проблемы. Руководство по культивированию нервной ткани. M. Наука, 1976, с.352. выходом зрелых нейронов и глиальных клеток. С целью получения высокодифференцированной нервной ткани из эмбриональных зачатков закладки эмбриональных нейральных тканей помещают на нуклеопоровые фильтры, из которых изготовлены диффузионные камеры.

Диффузионные камеры после герметизации имплантируются свободно в илеоцекальную область брюшной полости крыс-рецепиентов сроком до 20 сут.

Предлагаемый способ может быть использован в экспериментальной нейробиологии для изучения закономерностей гистогенеза и в клинической практике для лечения ряда дистрофических заболеваний, связанных с дефицитом ,нейромедиаторных и нейроэндокринных состояний. (54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ НЕРВНОЙ

ТКАНИ (57) Изобретение относится к биологии и медицине и позволяет в условиях in vivo получить высококачественtule культуры нервной ткани за срав- . нительно короткий срок с повышенным

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной и клини ческой медицине.

Цель изобретения — получение высо кодифференцированной нервной ткани из эмбриональных зачатков.

Пример . Диффузионную камеру готовят следующим образом.

На торцовые стенки наружного и внутреннего колец из оргстекла приклеивают нуклеопоровые фильтры. Изготовленные таким образом половинки диффузионных камер стерилизуют, проверяю т на г ерме тич нос ть, об раб атыв ают уль-15 трафиолетом, . На внутреннюю поверх- . ность филь тра наружного кольца в капле культуральной среды (1,99 или Хенкса) помещают эмбриональные ганглии, взятые от зародышей крыс 18 и 20 дня развития, Это кольцо закрывают внут" ренним кольцом при помощи клея в стерильных условиях.

Каждой из 30 наркотизированных при помощи эфира крыс, самцов линии Вистар, имплантируют свободно по 2 камеры в илеоцекальную область брюшной полости. Из извлеченных из брюшной полости камер приготавливают тотальные препараты, которые исследуют с помо-. щью известных нейрогистологических методик.

В исходном материале, используемом для культивирования, нейтральные эле.менты представлены незрелыми нейро10

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

1454838.бластами и молодыми нейронами, Клет ки эти имеют крупное ядро с двумя

t ядрышками, небольшой объем цитоплазмы, а у некоторых выявляется и один тонкий безмякотныйотросток. Между нейробластами находятся немногочислен ные сателлиты, некоторые из которых осуществляют митотическое деление.

Через 7 сут после трансплангации на нуклеопоровых фильтрах, также как и в культурах in vitro, отчетливо видны две зоны: 1 — центральная, представленная нейронами чувствительных ганглиев, которые, как правило, не мигрируют, и 2 — зона роста, состоящая из леммоцитов и сателлитов.

Нейтроны в центральной зоне располагаются разрежено и количество их по сравнению с исходным материалом уменьшается. Нервные клетки имеют разнообразную форму тела: округлун, многоугольнун, веретенообразную, неправильнун. Часть нейронов, прилегающих к зоне роста, приобретает вытянутый вид, причем продольная ось их тела совпадает с направлением миграции тяжей леммоцитов из центра ганглия. В процессе дифференцировки нейронов увеличиваются размеры их тела: если исходный эмбриональный материал содержит только нейробласты диаметром 15 15 мкм, то в 7-суточных трансплантатах уже встречаются округлые нейроны (45 50 мкм) и вытянутые (от 15х40 до 25w55 мкм). 0 степени дифференцировки нервных клеток свидетельствует не только формирование в их цитоплазме хроматофильного вещества, но и увеличение числа и диаметра образующихся отростков. В восьмисуточных имплантатах обнаружены нейроны трех типов: уни, бии мультиполярные. Наибольший процент составляют мультиполярные нейроны, а .наименьший — псевдоуниполярные нейроны, столь характерные для нормального организма. Нейроны снабжены хорошо развитыми ветвящимися отростками, которые следуют от центра ганглия к периферии, образуя там широкопетлистое нервное сплетение. Наиболее плотное сплетение нервных волокон наблюдается в центральной зоне между нейронами.

Зона роста, располагающаяся от

\ 1 центра ганглия к периферии, занимает обширную площадь до 4-6 мм в диаметметром аксона 1-2 мкм и интернадальным сегментом 100-250 мкм. Такие леммоцит-аксонные взаимоотношения очень сходны со стадией предмиелинизации нервного волокна в процессе нормаль40 ного онтогенеза.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что в нуклеопоровых диффузионных камерах нейробласты не

„ -только сохраняют свою жизнеспособность, но и дифференцируются в зрелые .нейроны с присущими им описанными гистотипическими особенностями.

Для сравнения качества выхода зрелой нервной ткани в различного типа диффузионных камерах.все те же процедуры были проделаны и на миллиопоровых фильтрах. В миллиопоровых диффузионных камерах через 7 сут посре и состоит, в основном из мигрирующих тяжей и пластов леммоцитов с заключенными в них новообразунщимися и регенерирунщими отростками нервных. клеток. На периферии трансплантата глиальные клетки образуют монослойную выстилку из полигональных клеток. На поверхности этой выстилки находятся простирающиеся на большом протяжении тяжи веретенообразных леммоцитов, формирующих сложнун трехмернун сеть.

В тяжах, расположенных ближе к центру, леммоциты располагаются в несколь15 ко пучков, плотно прилегающих друг к другу, а по мере удаления к перифе" рии тяжи делятся на более тонкие ветви, выстраиваются в один ряд, образуя характерные цепочки из верете20 нообразных клеток, соединяющихся своими отростками, Длина отдельных клеток составляет 20-40 мкм. Наиболее дифференцированные .леммоциты находятся в центральной и промежуточной

25 зонах, а менее дифференцированные на периферии эксплантата и у самой его поверхности. Растущие в тесной связи с леммоцитами аксоны повторяют весь сложный путь образуемых этими

30 клетками сетей и за пределы их не выходят. Аксоны, растущие по цепочкам леммоцитов, заканчиваются, как правило, конусами роста на терминальной одноядерной клетке. На ранних сроках

З5 в тяжах леммоцитов выявляются тонкие пучки безмякотных аксонов (от 3 до

7). Через 8-12 сут после трансплантации уже встречаются вполне дифференцированные нервные волокна с диаСоставитель М. Позняк

Техред М.Ходанич Корректор О.Кундрик Редактор Н.Киштулинец

Заказ 7410/29.

Тираж 500

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета .по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4!5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 1454838 6 ле имплантации обиаруживали, как пра- в друга колец из биологически активно вило, только погибшие нейроны и гли- го материала, торцовые стенки которой альные клетки. выполнены из фильтров, о т л и ч а— ю шийся тем, что, с целью полуФ о р м у л а и з о б р е т е н и я чения высокодифференцированной нервI ной ткани из эмбриональных зачатков, Способ культивирования нервной в качестве фильтров используют нуклеоткани in vivo в диффузионной камере, поровые, а камеру имплантируют свосостоящей из двух, вставленных друг 10 бодно в брюшную полость животного.