Способ получения антибиотика олеандомицина

Способ получения антибиотика олеандомицина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВЙДЕТЕЛЬСТВУ

l45 j2O

Союз Советскими

Социалистических

Республик

Зависимое ог авт. свидетельства №

Заявлено 05.И1.1961 (№ 736944/31-16) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 11.И1.1973. Бюллетень № 30

Дата опубликования описания 21.XI.1973

М. Кл. С 12d 9 02

Государственный комитет

Соввта Министров СССР по делам изобретений и открытий

УДК—

Авторы изобретения

Г. И. Клейнер, Р. И. Иофо, А, Д. Касянич, В. Я. Лаздиня, 3. И. Родионовская, Е. И. Сурикова и Д. М. Трахтенберг

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛНТИЬИО1ИКА ОЛЕАНДОМИЦИНА

Известно культивирование продуцснта антибиотика олеандомицина на средах, содержащих муку бобовых, барду илп энзиматичсский гидролизат белка в качестве источника азота, а глюкозу и крахмал в качестве источников углевода. Также известны очистка антибиотика, основанная на экстракцпп его пз культуральной жидкости нс смешпвающимися с водой растворителями, и выделение свободного основания путем испарения растворителя при пониженном давлении пли выделении соли основания прп действии соответствующей кислотой на раствор основания в воде или органическом растворителе.

Предлагаемый способ получения антибиотика олеандомицпна позволяет значительно увеличить выход препарата и упрощает технологический процссс. Это достигается тем, что на первой стадии получения антибиотика (на стадии ферментации) применяется среда, в состав которой вводится H-пропиловый спирт и кашалотовый жир, а на стадии выделения, вместо известного метода выделения твердого препарата солянокислого олеандомицина путем упаривания .водного раствора и последующей сушки концентрата, проводится добавление к бутилацетатному экстракту раствора соляной кислоты в бутилацстатс.

При осуществлении способа часть кашалотового жира (0,5%) добавляют при приготовленни питательной среды, а остальное количество (0,5 — 1,0%) в процессе фсрмснтацип.

Пропиловый спирт вводят в фсрмсптацпонную среду непосредственно перед посевом мицелия гриба. Такая среда обсспсчпваст получение культуральной жидкости, содержащей примерно в два раза (180%) больше олеа.,домицпна, чем полу насмыс раисе культуральные жидкости. Выделение антибиотика

10 из культуральной жидкости основано на извлечении антибиотика бутилацстатом прп рН

9,5 — 10,0, рсэкстракцпп его подкисленной водой, погторного перевода в тот же растворитель и осаждеьпш соли доб,",влснисм раство15 ра соотвстстьующсй кислоты в том жс растворителе к предварительно сконцснтрпрованпом1 tt вак1" ме бi.тилацстатпом1 31 cTpttKT) олсандомпцина.

П р и м с р 1. Среду, содержащую 2,5% сое20 вой муки, 0,5% кукурузного экстракта (сухой гсс), 0,75% гл1окозь1, 0,75% крахмала, 0,2% карбоната кальция, разливают в колбы 3рленмайера, стсрилизуют в автоклавс при

120 С и засевают спорами, полученными на

25 пшене. После посева культуру выращивают в тс.змостате при 27 —:1 С на круговой качалке в течение 24 час. Содержимое колб ассптичсски псрсдают в поссвпой аппарат, содержащий среду того жс состага, и выращивание

30 продолжают еще 40 — 48 час при 27+-1 С. Го145720

Корректоры: В. Федулова и С. Сатагулова

Техред Л. Грачева

Редактор Н. Цалихииа

Заказ 3059/! Изд. М 1754 Тираж 467 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР ио делам изобретений и открытий

Москва, %-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 товый посевной мицелий в возрасте 40—

48 час в количестве 10 /, по объему асептически добавляют в ферментационную среду, состоящую из посевной среды с добавлением при ес приготовлении кашалотового жира в количестве 0,5% . Непосредственно перед посевом мицелия в ферментационную среду ассптически добавляют пропиловый спирт в количестве 0,75%. В процессе ферментации до 96 чис прибавляют остальное количество кашалотового жира 0,5 — 1%. Через 160 час содержание олеандомицина, определяемого биологическим методом, достигает 650 иг/,ил.

Для выделения антибиотика фильтрат культуральной жидкости помещают в экстрактор, оборудованный мешалкой, добавляют 0,5 объема бутилацетата и доводят рН 20е/ -ным раствором едкого натра до значения 9,5 — 10,0 при постоянном перемешиванип. К бутилацетатному экстракту добавляют подкисленную воду в количестве 30 /о к объему взятого экстракта и реэкстрагируют антибиотик при рН

1,8 — 2,0. Водный раствор повторно извлекают бутилацетатом при рН 9,5 — 10,0 и соотношении объемов водная фаза †бутилацет 1:0,5.

Второй бутилацетатный экстракт концентрируют в вакууме до /7 — /10 исходного объема.

Солянокислый олеандомицин осаждают прибавлением 4 — 5% раствора соляной кислоты в бутилацетате, промывают бутилацетатом и высушивают в вакууме при 70 С и остаточном давлении 10 — 15 л я рт. ст. После перекристаллизации из этилацетата получают кристаллический продукт с т. пл. 129 †1 С и содержанием 725 иг/ял. Выход от активно5 сти культуральной жидкости составляет 55%.

Пример 2. 1(10%-ному раствору солянокислого олеандомицина, полученному как описано в примере 1, добавляют один объем бутилацетата и доводят рН 20%-ным раство10 ром едкого натра до значешгя 9,3 — 9,6. После разделения фаз к бутилацетатному экстракту добавляют при персмешивании 15%-ный раствор фосфорной кислоты в бутилацетате в количестве 1 люль на 1 люль исходного соля15 нокислого олеандомицина и выпавший осадок отфильтровывают. Получают белый кристаллический препарат фосфорнокислой соли олеандомицина с т. пл. 146 — 148 С и содержанием 715 лг/ил.

Предмет изобретения

Способ получения антибиотика олеандомицнна на питательной среде, содержащей соевую муку, кукурузный экстракт, глюкозу, крахмал и углекислый кальций, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода и упрощения процесса, в питательную среду добавляют Н-пропиловый спирт и кашалотовый жир, а выделение его производят добавле30 нием к бутилацетатному экстракту раствора соляной кислоты в бутилацетате.