Способ культивирования ткани пшеницы

Способ культивирования ткани пшеницы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биотехнологии , в частности к культивированию изолированных тканей растений, и может быть использовано в селекционной практике для создания новых и ускоренного размножения: уже существующих сортов растений. Целью изобретения является увеличение выхода растений-регенерантов и числа морфогенетическйх каллусных зон. Способ осуществляется за счет введения в стебель стимулятора - п-аминобензойной кислоты, что приводит к увеличению регенерации при культивировании незрелых зародышей на среде Линсмайера и Скуга.

. СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (5.1) 4 С 12 N 5/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4269813/31-13 (22) 18.05.87 (46) 15.02.89. Бюл. М 6 (71) Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова (72) Г.Н. Охрименко, А,К. Гапоненко и А.А. Созинов (53) 578.085.23(088,8) . (56) Т. Shimada, Y. Yamada. reheat

plants regenerated from embryo cell

cultures. Japan. J. Genetics, 1979, чо1. 54, р. 379-385. (54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ТКАНИ

ПНЕНИЦЪ| (57) Изобретение относится к биотехИзобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию изолированных тканей растений, и может быть использовано в .селекционной практике для создания новых и уско- ренного размножения уже известных сортов растений.

Одним из лимитирующих факторов выращивания изолированных тканей и клеток элаковых культур является низкая регенерация растений.

Целью изобретения является увеличение выхода растении-регенерантов, а также числа зон морфогенеза (для воэможности получения суспензии клеток).

В отличие от традиционных способов повышения регенерационной способности культуры соматических клеток пшеницы, основанных на подборе типа эксплан" татов и оптимального состава среды, изобретение осуществляется эа счет ..

„.,SU„„1458386 A 1 нологии, в частности к культивированию изолированных тканей растений, и может быть использовано в селекционной практике для создания новых и ускоренного размножения уже существующих сортов растений . Целью изобретения является увеличение выхода растений-регенерантов и числа морфогенетических каллусных зон. Способ осуществляется за счет введения в стебель стимулятора — n-аминобенэой. ной кислоты, что приводит к увеличению регенерации при культивировании незрелых эародыпей на среде Линсмайера и Скуга.

2 предварительной обработки растений, из колосьев которых в качестве эксплантата для получения каллуса вычленяется незрелый зародыш водным раст- шараа вором стимулятора — ь -аминобензойной ф кислоты,(ПАБК).

Способ осуществляют следующим об" разом.

Перед вычленением эксплаитатов в растения, из которых они вычленяются, вводят шприцем под колос за 5"6 дней до цветения водный раствор "аминобензойной кислоты, содержащий 10

5 10 r данного стимулятора на расте,ние . Это количество ПАБК вводят в стебель растения, благодаря использованию водного раствора концентрацией

0,17, в дозах от 1 до 5 лл.

9-дневные незрелые зародьппи вычленяют в асептических условиях и пересаживают на питательную среду Линсмайер и Скуг с добавкой 2,4 D в конФормула изобретения

Способ культивирования ткани пше55 ницы, включающий посадку на среду

3 14583 центрации 2 мг/л с дальнейшим получением каллуса.

Каллусную ткань выращивают в термостате при 26-28 С с перенесением каж5 дые 35-40 дней на свежую питательную среду. Затем после роста каллусной ткани отделенный морфогенетический каллус переносят на среду для регенерации Линсмайер и Скуг с добавкой 10

ИУК в концентрации 0,5 мг/л, таким образом получая растения-регенеранты.

Пример 1. Растения гомозиготной линии 20/47 яровой пшеницы Саратовская 52 выращивают в теплице в сосудах с почвой, В момент цветения колоса каждое растение отмечают этикеткой с указанием даты :цветения.

Через 5 дней после цветения в теплице проводят обработку колосьев водным 20 раствором ПАБК. При этом ПАБК кон-. " центрацией 0,1% вводят в стебель пшеницы под колос шприцем в дозе 1 л, т.е. в растение вводят 10 r ПАБК, Через 9 дней после цветения колосья 25 срезают, отделяют зерновки, стерили,зуют в ламинаре 70%-ным этанолом в

;течение 7 мин. После этого стерили,зованные эерновки трижды промывают стерильной дистиллированной водой. щ Затем из них стерильными препаровальными иглами вычленяют зародыши и сажают щитком вверх на среду Линсмайер и Скуг с добавкой 2,4 D в количестве

2 мг/л.

Через 35-40 дней выросший каллус пересаживают на свежую питательную

1 среду, одновременно морфогенетические зоны каллуса пересаживают на среду Линсмайер и Скуг с добавкой 40 0,5 мг/л ИУК. В последующих пассажах проводят аналогичную работу. В каждом пассаже учитывают количество полученных растений регенерантов и образовавшихся зон морфогенеэа.

Hp и м е .р 2, Способ осуществляют аналогично примеру l, только вводят

5 10 г ПАБ1(на растение, т.е, 0,1%.

ПАБК в дозе 5 рл

Пример 3. Вводят 10 4r ПАБК 50 на растение (0,1% — концентрация и

100 л — доза введения). Остальные приемы осуществляют аналогично примеру ), 86 4

Кроме того, проводят испытания способа, аналогичные примерам 1-4, отличающиеся тем, что ПАБК вводят в стебель через 6 дней после цветения °

В качестве контроля используют наблюдения, полученнь1е при культиви ровании ткани пшеницы беэ добавления

ПАБК, как в прототипе.

Наблюдения проводят в течение трех пассажей, В результате исполь зования ПАБК было установлено, что предварительная обработка ее растений привела к следующим результатам.

Ускорился s 1,5 раза процесс образования эон морфогенеэа и зачатков побегов. Через 20 дней .после посадки зародышей на питательную среду в ва-. риантах обработки 10 -5 10 г ПАБК на растение наблюдали образование зон морфогенеэа и зачатки побегов, В контроле этот процесс, длился 30.35 дней.

Увеличилась частота образования морфогенетйческих линий в 1,5 раза по сравнению с контролем. Так, в контроле за 3 пассажа регенерация наблюдалась у 48,1+6,8% каллусных линий, при обработке ПАБК в количестве 10 -5 .10 г на растение она наблюдалась у 70,0+!0,2% линий.

В 3,8 раза возросло число эон .морфогенеза по сравнению с контролем

Контроль Предлагаемый

1 пассаж 9,3% 35, 0%.

1 l пассаж 18,5% > 55,0%

+ Приведен процент каллусных линий, давших наибольшее количество морфогенетических зон.

В 2,1 раза увеличилось число растений-регенерантов, полученных на

1 каллусную линию (2,6-- в контроле, 5,5 — при обработке ПАБК).

Кроме того, ускорился рост регенерантов в пробирках. Через 30 дней после посадки морфогенетического каллуса в среду для регенерации часть регенерантов была пригодна для пересадки в перлит (a контроле зто не наблюдалось).

Пример 4. Вводят 2 ° 10 г

ПАБК на растение, т.е ° 0,1% ПАБК в дозе 200 рл. Остальные приемы осуществляют аналогично примеру l. незрелых зародышей с последующим получением растений-регенерантов, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью увеличения выхода растений-pere!

458386 6 раствор -аминобензойной кислоты, содержащий l0 -5 .! 0 г -аминобенойной кислоты на растение. нерантов и числа зон морфогенеза, в стебель растения через 5-6 дней после цветения вводят шприцем водный

Составитель В. Демкин

Редактор А. Лежнина Техред М.Дидык Корректор М. Демчик

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Заказ 326/29 Тираж 500 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГЕНТ СССР

f13035, Москва, Ж«35, Раувская наб., д. 4/5