1466663 - Средство для определения лейкоцитов в моче

Средство для определения лейкоцитов в моче

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к биохимии . Цель изобретения - повьшение чувствительности средства. Фильтровальную бумагу пропитьшают средством, содержащим водный буфер из буры и соляной кислоты, основной реактив и дополнительный. Затем фильтровальную бумагу погружают в ьючу, содержащую 200 лейкоцитов/мкл. Чувствительность средства тем выше, чем интенсивнее окраска. 7 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

yg 4 G 01 М 33/б8

К ПАТЕНТЪ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 3278845/28-14 (22) 08.05 ° 81 (31) Р 3017721.0 (32) 09.05.80 (33) DE (4б) 15.03.89. Бюл. 1t- 10 (7 1) Берингер Маннхайм ГмбХ (DE) (72) Дитер Бергер, Гюнтер Фрей, Вольфганг-Райнхольд Киаппе, Манфред

Кур, Вальтер Риттерсдорф и Вольфганг

Вернер (ВЕ) (53) б12.015 (088.8) (5б) Заявка на патент ФРГ

11 2240471, кл. G 01 N 33/1б, 1974.!

Изобретение относится к медицине, в частности к средствам для визуального или фотометрического опреде-. ления лейкоцитов в моче по уровню ферментов.

Цель изобретения вЂ” повышение . чувствительности средства.

Поставленная цель достигается эа счет использования реактива на осно-. ве диаэониевой соли производных бензола общей формулы 1 где R, - водород, хлор, бром, С„-С = алкил, С,-С -алкокси, группа метилмеркапто, N-морфолино „N-тиоморфолино,N„„SU „„1466663 A 3 (54) СРЕДСТВО ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ В МОЧЕ (57) Изобретение относится к биохимии. Цель иэббретения вЂ” повышение чувствительности средства. Фильтровальную бумагу пропитывают средством, содержащим водный буфер иэ буры и соляной кислоты, основной реактив и дополнительный. Затем фильтроваль" ную бумагу погружают в мочу, содержащую 200 лейкоцитов/мкл. Чувствительность средства тем выше, .ем интенсивнее окраска. 7 табл.

2 пиррилидино, в случае необходимости замещенная метилом группа N-пипераэино, группа N-пиперидино;

Кд Водород1 С1 (5 BJIKHJI метокси, бром;

R вЂ” водород, фтор, хлор, бром, гидроксил С С алкил, С, С алкок сил, группа метйламино, С„ -С -диалкиламино, в случае необходимости замещенная метилом или метокси фенильная группа, группа фенокси, Nморфолино, N-тиоморфолино, группа

N-пирролидино, в случае необходимости замещенная метилом группа N-пиперазино, N-пи еридино, метилмеркапто;

R - водород, метил, метокси, бром; я. - водород, С„-С -алкил, 5

С, -С -алкокси, метилмеркапто, бром и хлор;

1466663

Х вЂ” тетрафторборат, перхлорат и тетрахлорцинкат, и в качестве дополнительного реакти-1 ва содержит соединение общей формулы

10 где R вЂ” водород, хлор, бром, метокси, пентил; i5

R вЂ” водород, бром, С -с -алкил, метокси, нитро, ацетиламино, аннели- рованное бензольное кольцо;

R - водород, бром, метил, эток-; си, бензил, аннелированное бензоль- 20 ное кольцо;

R вЂ” водород, бром, метил, фенил;

А вЂ” аланил, I.-аланил-аланил, L-ал анил-ап анил-ал анил, глицил, в а."лил, Ь-лейцил, фенилаланил;

В - бензоил, толуолсульфанил, ацетил, бензилоксикарбонил, анетимидо-бензолсульфонил и метокситозил, или содержит соединение общей формуJIbl III 30

OH г1 1З 12 где Rщ вЂ” К„- имеют укаэанные значения, 35 с соединением общей формулы.U

1 >

НО-А -В

) где А и В имеют указанное значение, 1 или его реакционноспособным производ40. ным.

Реакцию проводят известными в химии пептидов приемами.

В приведенных примерах испытывают средств а, содержащие реактивы, при45 веденные в табл,1-3.

Таблица1

Г т„„, С

Ре актив

Ra. Кз (раэл ) 8

5 6

117

142

С1 4

ВГа

ВР+

ВР

BP%

ВР4 н сн, н н н с,н„

ОСН н Oc í„ н s-сн н снс,н„, н н с,н,„ н н сн н н н

Сн

3 7 с,н„

ОСН ос н„

S-CH

Р где К16 вЂ” водород, C„-с„„-алкил, С

С -алкокси, метиламино, диметиламино;

К„- водород, этил, метил, метокси, диметиламино, диэтиламино;

R вЂ” водород, метил, С, -С -алкокси, С,-С -алкиламщю, дипропиламино;

R Ä>- водород, метил, этил, метокси, а также два соседних заместителя К„„, К„, R „и R вЂ” аннелированное бензольное кольцо;

А. вЂ” аланил, L-ал ан ил-аланил, L-аланил-аланил-аланил, валил, фенилаланил, лейцил, глицил; !

В вЂ” толуолсульфонил, ацил, бензоил, бензилоксикарбонил, ацетамидо-бензолсульфонил, б ензоилкарб онил и метокситозил, при следующих соотношениях компонентов, мол./%; . Соединение формулы 1 0,05-25

Соединение формулы II или соединение формулы III 0,05-25

Буфер с рН 6-10 Остальное

Средство получают путем простого смешивания его ингредиентов в указанном соотношении.

Соединение общей формулы III получают путем взаимодействия соединения общей Формулы IV

1466663

Продолжение тебл.1.

5 6 7 8 (1 4

1 2

Н . l

122

Ос н Н Н

BF4

119

Н Н

Г 1

9 ЦЗС- У н

105

Н Н

BF4 н HN н н

108

10 Н

m ю

/ 1

ВР

108

ВР

Н ° Н

Н Н н К С К н н

ВР4

ОСН

102

ВР сн н

Н N Н Н

OCHý

127

123

ВР

0СН Н

Br Br

ll7

СН9

Н Н ВР, Н Н ВР4

Н Н ВР

Н СНэ ВР

121

ВРф

Н Н

-СН

108

BF4

Н Н

117

Н Н

128

Cl0

Н Н

25 Н .26 Н

Ю-.Н Н

184

ZnC 4

27, Осн

153

ВР4

Н Н

0СН, 31

137

ВР4

Н Н

ОСН

Н снз. 0СН

0СН

-S-СНЭ

-и(с,й„), -NHCHэ

ОСНОВ

Omç

N(CH3) 1 1

Н Cl

Вг Br

Н Н

OCH H

Н Н

BF4

ВР4

142

146

137

127

lO8

145

1466663

Продолжение табл.1

6 8

115 н осн BF4

ОСН Н Н

129 вг„

Дополнительный реактиВ

Таблица2 о

Т,„, С

Р, 1,-Аlа

L-Ala

L-Аlа

L-Ala

Н Н

Br Вг

Н Н

СНэ СН3

Н Н Н Н

0СH H н -с -,<Д}-н

201

L-Ala

То с

L Ala

L-Ala

Глицил

В,Ь-aжЫ

L-лейцил

?.-фенилеланил

L-(Аlа) .L-(Ala)

L-Ala

Юа

СН -СО-NH э

-СН=СН

127

114

Тос

БензилН

19 20 оксикарбонил

То же и

СН

Н Н

Br Н

ОСНэ Н

СН

L-Ala

L-Аlа

L-Ala

137

128

103

147

164

Сl

Аце тамидобензолсульфонил

Иетилок185

1.-А1а

Н ситозил

Аланил, ++

Толуолсульфонил

Н сн, 0-СН э

Н.

C584(Н

0СН

Н Н

-CH=CH- Н

Н Н

Н H

Н Н

Тпс

Тос

Бензоил

Тос

Ацетил

162

187

123

128

156

177

184

135(разл)

142(разл)

137

119

1О

1466663

Таблица3

Дополни тельный о тпл, с

А к«

Кла

Кл3 реактив осн, ос,н, СН3

С н«

-1!(Сн )

VII

СН

Н ОСН, Н Н н

Н Н с,Н сн, н

Ы(С3НТ)2 Н

134

187

152 !

147 к10,72

142

Тос

Ацил

Тос

Бензоил

173

124

128

-юнсн

Н сн

Н н

VIII

Тос

БензоилН Н

11НСН Н

NHC7H, н сн оксикарбонил

117

0CH L-Ala

Тос

Аннелиров анный бензол

ХХХ

Ацетами 132 добензолсульфонил

Бензоил- 154 карбонил

L-лейцил

Аннелированный Н бензол

XIII, осн

Аннелированный бензол

L-Ala

ОС3 Н7

XIV

Тос 142

L-(Ala) 7

Аннелиро ванный бензол

Н Н

Н ОСН

Н ос н, Тос 119

Тос 121

Тос 182

Метокси- 153 тозил

Тос

Э L-в алил л

1.-Ala

L-Ala

L-Аlа

ы(сн )

Н(стнр а осн

0Н3

XVI

XVII

XXVIII

XXX

Глицил

L-Ala

Н Н

ОСЗН7 Н

158

152

127

131

156

Тос

L-Ala

L-Аlа

L-Ala

ОСН

158

L-Ala

Тпс осн н

147

Ос Н7 н

Тос

XXIX

ОС,Н«

176

Тос

L-Ala

Пример 1. Фильтровальную бумагу пропитывают средством, содержащим 99-99,9 мол.% водного буфера из буры и соляной кислоты, 0,05 мол.% имеющего рН, указанного в табл.4 реактива и 0,05 мол.%, указанного в табл,4 дополнительно г о реактив а, с о

55 последующей сумской при С.

Приготовленную таким образом фильтровальную бумагу погружают на

3 мин в содержащую 200 лейкоцитов/мкл мочу, после чего визуально определяXXII

ХХШ.

XXIV

XXV

XXVI

XXVII

XXVIII

Н осн, Аннелиров анный бензол

Н Н н сн, N(C 34

Н ОСН3

Анн елир о в анный

Аннелиров анный бензол

Аннелированный бензол

L-Ala

L-Al a

13,L-Ala

L-Ala !.â€” âàëèë

L-Ala-Ü-Аlа

1.-фенилаланил

L-Аlа

L-Ala

L-AlaЬ-Ala

1466663

12 ют получаемую окраску. Чувствительность средства тем выше, чем интенТ аблица4

Активные вещества средства

О кр аск а по ис т еч енин 3 мин

Дополнительный .

P еактив реактив

Предлагаемое средство красно-коричневая красно-коричневая серо-голубая красная св етло-красная фиолетовая

Я рковыраженная

11 лиловая красно-фиолетовая фиолет ов ая серо-голубая лиловая лиловая светло-красная светло-красная к р а с но- фиол ет о в ая красно-фиолетовая

Согласно прототипу

Красноватая

Слабо красно-коричневая

Серо-голу-боватая

Известное средство

Синеватая

Т аб лиц а5

Сравнение данных по окраске, приведенных в табл.4, свидетельствует о том, что предлагаемое средство проявляет более высокую чувствительность, чем известные.

) 45

Активные вещества средства

Дополнительный реактив

Реактив

mr.Пример 2. 1 мп.средства, содержащего 98 мол.% водного фосфатного буфера с рН 7,0, 1 мол.% указанного в табл.5 реактива и 1 мол.% указанного в табл.5 дополнительного реактива, смешивают с 1мл мочи,,содержащей 100 лейкоцитов /мкл. Через

3 мин после смешивания фотометром определяют экстинкцию при 600 нм.

Результаты опытов приведены в табл,5, средство1

2,4

2 ° 5 г з г,1

Предлагаемое

Ктт1

XIII

XX II ххах т ххсдт

XXVIII

XXIX

XVI

Хчтт

Х7ХХТ сивнее соответствующая окраска, Результаты огпттов приведены в табл.4 °

1466663!

Продолжение табл.5

Активные вещества средства!

1 эмс!

1 экс

Реактив

Дополнительный реактив

Реактив ДополниNr тельный ре актив

XXIII

2,4

2,7

15 24

26 го 26

ЗО

25 30

XXI V

XXV

XXVI

XXVI I

XXVI I 7

XXIX

III

2,5

2,6

2,4

2 5

2,8

2,6

2,1

2,4

2,7

2,6

2,4

2,2

2,5

2,6

2,7

2,4

2,6

Согласно прототипу

0,3

Известное средство

0,8

4О

22 !

III

«Х

VII

VIII

XII

XIII

XIV

XVI

XVII

XVIII

XIX

ХХ

2:1

ХХ1

XXI I

2,7

2,5

2,6

214

2,8

2,7

2,2

2,4

2,9

3,0

2,5

2,3

2,6

2,3

2,1

2,3

2,8

2,6

2,5

2,9

2,7

2,1

2,2

2,4

2,6

2,2

2,0

2,6

2,4

2,9

3,0

2,1

2,2

2,6

2,7

2,3

2,5

2,8

2,6

Активные вещества

5 средств а

Сравнение данных по экстинкции через 3 мин, приведенных в табл,5, свидетельствует и том, что предлагаемое средство проявляет более высо45 кую чувствительность, чем известное °

Пример 3. Процесс проводят согласно примеру 2, за исключением того,что используют средства, содержащие по 10 или 25 мол.Х реактива и дополнительного реактива, указанных в табл.6.

1466663

Таблицаб ополРеакодержаие доСодержание реакэкс ительый тив полни тельного peреактив тив а, мол. актива, мол.

Согласно прототипу

0,4

0,5

Извес тное средство

0,9

1,1

25 ж) трис-буфер с рН 6; з) трис-буфер с рН 8.

Результаты опытов приведены в табл.7.

Т аб лица7 экс.

Опыт

Дополнительный реактив Х ополниельный еактнв 1

2,7

2,4

2,6

2,2

2,4

2,6

2,3

2,3.

2,5

2,2

2,3

2,5

a) б} в)

r) д)

a) ж) з) Активные вещества средства

Предл аг ае мое ср едс тв о

1 10 1 10

1 - 25 1 25

1 10 1 10

1 25 1 25

10 .10 10 10

10 25 10 25

10 10 Х 10

10 25 Х 25

20 10 20 10

20 25 20 25

20 10 ХХ 10

20 25 ХХ 25

30 10 26 . 10

30 25 26 25

30 10 XXV 10

30 25 XXV 25

1 ао . Сравнение данных табл.б свидетельствует о том, что при высоком содержании активных веществ известные средства уступают по чувствительности предлагаемому составу.

Пример 4. Процесс ведут аналогично примеру 2, за исключением того,. что используют средство, содержащее 1 мол.X реактива, 1,1 мол. дополнительного реактива 1 или 1.и 60

98 мол.X следующего водного буфера: а) натриево-боратный/соляная кислота с рН 8; б) натриево-боратный(борная кислота с,рН 8; . 55 в) натриево-боратный с рН 6;

r) калиево-фосфатный с рН 6; д) калиево-фосфатный с рН 8; е) калиево-фосфатный с рН 10;

2,6

2,7

2,6

2,8

2,3 2,5

2,5

2,7

2,9

2,8

3,0

2,8

2,9

2,7

2,9

Средство для определения лейкоцитов в моче, содержащее реактив на основе диазониевой соли производных бензола и буферное вещество, о т л ич а ю щ е е с я тем, что, с целью повышения чувствительности средства, оно содержит в качестве диазониевой 1р соли соединение общей формулы 1

"г

Ьд 13

25 где R„- водород, С,-С -алкил, С -С -алкокси метиламино; диметил{ 5 амино;

R вЂ” водород, этил, метил, ме,10 токси, диметиламино, диэтиламино;

R вЂ” водород, метил, С,-С -алкокси, С„-С>-алкиламино, дипропиламино;

R вЂ” водород, метил, этил, метОкси я тяже двя сОседних замести» теля К о R„ю В " R,з аннелиро" ванное бензольное кольцо;

А вЂ” ал анил, L- алан ил-аланил, L-аланил-аланил-аланил, валил, фе40 нилаланил, лейцил, глицил;

В вЂ” толуолсульфонил, ацкп, бенэоил, бензилоксикарбонил, ацетамидо-бензолсульфонил, бензоилкарбонил и метокситозил, 45 при следукицих соотношениях компонентов мол Ж

Соединение общей формулы Г 0,05-25

Соединение общей

50 Формулы >> динение общей формулы III

Буферное вещество

q рН 6-10 .Остальное

0,05-25 формул а изобретения где R вЂ” водород, хлор, бром, С<-Су-алкил, С, вЂ” С -алкокси, группа метилмеркапто, N-морфолино, N-тиоморфолино, N-пиррилидино, в случае необходимости замешенная метилом группа N-пиперазино, группа N-пиперцдино;

R вЂ” водород, С,-С -алкил, метокси, бром;

R вЂ” водород, фтор, хлор, бром, гидр оксил у С С . Ялкил р С, С ЯлкОк сил, группа метиламино, С„-С -диалкиламино, в случае необходимости эамещенная метилом или метокси фенильная .группа, группа фенокси, N-морфолино, М-тиоморфолино, группà Nпирролидино, в случае необходимости эамещенная метилом группа N-пипера-. эино, N"ïèíåðèäèío, метилмеркапто;

R4 вЂ” водород, метил, метокси, бром;

11.5 водород С -С Ялкил

С<-С -алкокси, метилмеркапто, бром и хлор;

Х - тетрафторборат, перхло рат и тетрахлорцинкат, и и качестве дополнительного реактива содержит соединение общей формулы II где R6 вЂ” водород, хлор, бром, метокси, пентил;

R вЂ” водород, бром, С -С --алкил, метокси, нитро, ацетиламино, аннелированное бензольное кольцо;

R вЂ” водород, бром, метил, этокси, бензил, аннелированное бензольное кольцо;

R вЂ” водород, бром, метил, фенил;

А вЂ” ал анил, 1.- ал анил-ал анил, L-аланил-аланил-аланил, глицил, валил, Ь-лейцил,, фенилаланил;

В вЂ” б ензоил, толуолсульфонил, ацетил, 6ензилоксикарбонил, ацетимидо-бензолсульфонил и метокситоэил, или содержит соединение общей формулы III 1

О-Л-

Средство для определения лейкоцитов в моче

Патент 1466663