Способ определения активности тимуса
Иллюстрации
Реферат
Изобретение относится к иммунологии . Цель изобретения - повышение точности способа. Суспензию мононуклеарных клеток смешивают с взвесью эритро1Д1Тов барана. Смесь клеток осаждают центрифугированием. Осадок инкубируют, суспендируют, вновь центрифугируют и инкубируют. Определяют количество комплексных розеткообра- ,зующих и тотальных Е-розеткообразукгщих клеток. По их отношению определяют показатель функции тимуса. Если показатель равен 0,75-1,25, то диагностируют нормальную функцию тимуса.
СОЮЗ COBETCHHX
СООИАЛИСТИЧЕСНИХ
PECr1VSЛИН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ!
1 тРОК
ПФТ кРОКх66 ООУААРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ
fO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ
flPM П<НТ СССР (46) 23. 09. 90.Бюл. У 35 (2 ) 4071002/28-14 (22) 22.05,86 .(71) Институт клинической иммунологии CO AMH CCCP (72) В.С.Кожевников и В.П.Лозовой (53) 615.375(088.8) (56) Vogcl J.Å., Insefy С.S., Go"
od R.À. — Proc. N. Acad. Sci, USA, 1975, v. 72, Б 3, р. 1175-1178. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ
ТИИУСА (57) Изобретение относится к иммуно" логии. Цель изобретения — повышение
Изобретение относится к медицине, а именно к исследованию биологичес; ких материалов иммунологическими методами. Оно может быть использовано в клинической иммунологии, терапии, хирургии и других областях медицины в диагностических целях.
Целью изобретения является повы. шение точности способа.
Поставленная цель достигается за счет того, что кроме тотальных
Е-розеткообразующих клеток (т-POK) определяют количество комплексных розеткообраэующих клеток (к-POK), показатель функции тимуса Определяют по формулегде 66 — среднее значение т-РОК у здоровых людей.
: При ПФТ от 0,75 до 1,25 диагностируют,нормальную функцию тимуса, прй
;,. SU„„1470056 A 1 („1) 5 G 01 N 33/53//G 01 N 33/49 точности способа. Суспенэию мононуклеарных клеток смешивают с взвесью эритроцитов барана. Смесь клеток осаждают центрифугированием. Осадок инкубируют, суспендируют, вновь центрифугируют и инкубируют. Определяют количество комплексных роэеткообра,зующих и тотальных Е-роэеткообразующих клеток. По их отношению определяют показатель функции тимуса. Если показатель равен 0,75-1,25, то диагностируют нормальную функцию тимуса.
ПФТ "- 0,75 — недостаточную, при
ПФТ 1,25 - повышенную. С.
Способ осуществляется следующим образом.
Мононуклеарные клетки (МНК) выделяют их 5 мл венозной крови, стабилизированной гепарином (250 ед/мл), наслаивают на 3 мл раствора верогра- 4 фин-фчколл (d = 1,082 г/см ). После . 4Р центрифугирования при 400 g 40 мин 1 )
ИНК собирают пипеткой с поверхности ЯД раствора верографин"фиколл и трижды ф отмывают: первый раз при 400 g
10 мин, второй при 200 g 5 мин (в забуференном физрастворе) и третий— при 200 g 5 мин в среде 199. Клетки суспендируют в 1 мл среды, подсчиты-,), Э вают в камере Горяева и разводят и средой до концентрации 2,5 10 кл/мл.
Для приготовления эритроцитов ба.рана (ЭБ) веноэную кровь -барана хранят не более двух недель после забора с консервантом (153 от общего объема), 14 70056 используют трижды отмытые средой 199 (первая и вторая отмывки при 200 g
5 мин, третья — при 400 я 5 мин) ЭБ в виде 17.-ной суспенэии (О 1 мл осад-, 1 5 ка ЭБ плюс 9,9 мл среды) . . Для проведения реакции роэеткообразования 0,2 кл суспензии ИНК смешивают с 0,2 мл взвеси ЭБ в двух пробирках, смесь клеток -осаждают центри- 10 фугированием при 200 g 5 мин. Для подсчета к-РОК осадок инкубируют при
37 С 1,5 ч, суспендируют энергичным встряхиванием до получения гомогенной суспенэии (без видимых на глаз сгустков), вновь центрифугируют при
200 g 5 мин и инкубируют при 4 С.
16-18 ч. Перед подсчетом удаляют
0,2 мл надосадочной жидкости, осадок суспендируют осторожным покачивани- 20 ем пробирки (обычно fO-15 движений), каплю полученной суспензия помещают на предметное стекло и накрывают покровным. При 300-400* увеличении
-нод воздушной щчмерсией подсчитывают 25 количество лимфоцитов с 3 и более нрикрепившимися ЭБ (розетки) на 100200 лимфоцитов..
Для определения т-Р0К осадок ИНК и ЭБ (вторая пробирка инкубируют при
37 С 15 мин и при 4 С 16-18 ч, после чего готовят препарат для подсчета и считают розетки, как описано выше для. X к-PÎK.
Показатель функции тимуса опреде- .35 ляется по формуле тРОК
ПФТ =
КРОК 66 где 66 - среднее значение т-РОК у
40 здоровых доноров, равное
663.
Из формулы следует, что НФТ учитывает интенсивность продукции E-рецептора Т-лимфоцитами (т-РОК) и
45 количество предшественников Т-лимфоцитов (к-РОК), несущих только структуру для реабсорбции Е-рецептора.
При снижении функции тимуса увеличивается количество предшественников .Т-лимфоцитов., при повышении. функции тимуса увеличивается интенсивность
Продукции Е-рецептора Т-лимфоцитами, а количество предшественников уменьшается. При ПФТ от О, 75 до 1,25 диаг- 5> ностируют нормальную функцию тнмуса, при ПФТ + 0,75 — недостаточную, при
ПФТ > 1,25 - повышенную„
Пример 1, Больная К., тяжелая миастения. Определены Х тотальных и комплексных роэеткообраэующих клеток (т-РОК и к-POK), no формуле вычислей ПФТ.
ПФТ = 0Ä90. Функция тимуса оценивается как нормальная .(ПФТ у здоровых людей от 0,75 до 1,25).
П р и и е р 2. Та же больная, через 5 месяцев после удаления тимуса.
Определены 7. тотальных и комплексных
РОК, по формуле вычислен ПФТ.
ПФТ = 0,21, Функция тимуса оцени-. вается как сниженная.
В данном случае резко замедлен процесс дифференцировки Т-лимфоцитов вследствие удаления тимуса. В периферической крови резко снижено количество зрелых Т-лимфоцитов, несущих
Е-рецептор, тогда как общее количество Т-лимфоцитов (зрелых, несущих
Е-рецептор, и незрелых, не несущих
Е-рецептор, но имеющих структуру для его реабсорбции) остается высоким.
Пример 3. Больному П. проведен курс лечения Т-активином. До и после лечения определялись Ж тотальных и комплексных РОК, по форму.ле вычислен ПФТ.
ПФТ до лечения = 0 80.
ПФТ после последней инъекции
Т-активина = 2,52. В данном случае функция тимуса оценивается как повышенная, что связано с усилением дифференцировки Т-лимфоцитов под влиявием зндоганного тимического фактора и экзогенного — в виде Т-активина.
Предложенный способ позволяет
/ более точно оценивать активность тимуса. Более высокая точность предлагаемого способа достигается преимущественно за счет того, что можно оценить не только нормальную и пониженную (как по способу-прототипу), но н повышенную функцию тимуса.
Кроме того, предлагаемый способ не требует специальных стимуляторов розеткообразования, аутоплазмы или тимусных факторов, что значительно упрощает способ.
Ф о р м у л а и э о б р е т е н и я
Способ определения активности тимуса, включающий выделение лимфоциТоВ иэ крови, инкубацию их с эритроцитами барана с последующим опредеСоставитель В.Литовченко
Техред N.Õoäàêè а. Корректор С. Черни
Редактор Л.Павлова
Заказ 3330 : . . Тирах 527 Подписное ,ВКИИПИ Государственного комитета по.изобретениям и открытиям прн ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Рауиская наб., д. 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г.уагород, ул. Гагарина, 101
5 .1 4 70056 6 леиием количества розеткообразунабюх ду ними и при сникении отионения и клеток, несущих на своей поверхнос- количества лимфоцитов, несущих Е-рети Е-рецептор, о т л и ч а ю щ н 1- цептор, по сравнению с нормой с я тем, что, с целью повыиения точ- определяют пониженную функцию тиности способа, дополнительно в крови муса, а при увеличении отнонения и больных определяют общее количество сникении количества лнмфоцнтов, несуТ"лммфоцитов, несуирюс и не несущих щнх и не несущих Е"рецептор, - пьвмИ-рецептор,. внчнслявт отноиение меи аеннув функцию тимуса.