Способ получения производных стероидов

Способ получения производных стероидов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение касается стероидов, в частности способа получения производных стероидов общей формулы с(х) (.. .Y) -г.н,-сн, -cH4:(RO-CHi:-CH C-CH-CH.-CH,-r.H-...-C(CbCRA)-CH7- -CHi-C(0)-CH, где Ri С,-Сэ-а/ алкил (он может быть замещен гидроксигруппой); К, - X и Y означают ради- - кал - О - С (0) ..., обладающих фармакологическими свойствами, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых фармацевтических активных соединений указанного класса. Синтез целевых веществ ведут реакцией соединения общей формулы С(О)-СЕ7-СНг-GH-C(RО-СНг-СН... С ч:н-сн7-сн,-с(... .oH)-c(CECRi Ь . -cTtg-CH 7-CK-CHi, где R, и R указаны вьЕше, а имеющиеся оксигруппы защищены , К - кетальная защитная группа для кетонной функции, с реагентом общей формулы CH CH-CH -0-P(0)(Alk)5,, где Alk Ci-Сз-алкил, в присутствии сильного органического основания с последующей обработкой кислотой. Новые соединения обладают гипотензивной активностью, так как изменяют мембранную проницаемость сосудистых стенок к Na и К®, что способствует снижению их сократимости. Токсичность соединений ЛД jo 400 мг/кг. 1 табл. (У) 4:

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

А3. (51)4 С 07 3 1 00 5 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ где

К1 ! с в

ill

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР (21) 3952445/23-04 (22) 23. 08.85 (31) 8413189 (32) 24.08.84 (33) FR (46) 30.03.89. Бюл. || 12 (71) Руссель-10клаф (FR) (72) Весперто Торелли, Люсьен Неделек, Мартин Могиленский и Анн-,Мари

Мура (FR) (53) 547.689 .6.07 (088.8) (56) Sturtz and ?аопап8, Synthesis, 1980, с. 289, Заявка ЕР Р. 0023856, кл. С 06 F 11/12, 1981. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ

СТЕРОИДОВ (57) Изобретение касается стероидов, в частности способа получения производных стероидов общей формулы

C(X) (.. Л) -СН.-СН, — Н-С К. -СН.-СН=

=С-СН-CH 2-.СН -С и, ° *. -;;1

Изобретение относится к способу получения новых стероидных производных общей формулы, SU„„1470198

L, (он может быть замещен гндроксигруп- пой); R г — СН, Х и Y означают радикал — Π— C(0) -СН -CH2 ..., обладающих фармакологическими свойствами, что может быть использовано в медицине.

Цель — создание новых фармацевтических активных соединений указанного класса. Синтез целевых веществ ведут

6М"- М вЂ” — -

С с

=С-СН-СН,-СН,-С .... OH -С (С=-СК, ) . -Сн -снг-СК-СН, где R, и К | указаны abave а имеющиеся оксигруппы защищены, К вЂ” кетальная защитная группа для кетонной функции, с реагентом общей формулы СН =СН-СН -О-P(0)jN(Alk))fan„ где Alk = С1-С -алкил, в присутствии сильного органического основания с последующей обработкой кислотой. Новые соединения обладают гипотензивной активностью, так как изменяют мембранную проницаемость сосудистых стенок к Яа- и К, что способствует снижению их сократимости. Токсичность соединений ЛД, o 400 мг/кг. 1 табл.

2 — С „-С з-алкил, возможно замещенный гидроксигруппой;

R — метильная группа;

Х и Y — вместе образуют радикал

0 Ф ( обладающих ценными фармакологически|ми свойствами.

Цель изобретения - получение новых стероидных производных, обладаю1470198

5G щих преимуществами в фармакологическом отношении по сравнению с известными структурными аналогами подобного действия,.

Пример 1. к.-Лактон 17/. -гидрокси 3-оксо 10p-(1-пропинил) 19-нор17Ы-прегна 4,9 (11)-диен-21-карбоновой кислоты.

Стадия А: 3,3-этилен диокси 5 -!

-гндрокси 10@(1-пропинил) эстр-9 (11) ен-17-он.

В 25 см 1N эфирного раствора этилмагнийбромида, разбавленного

25 см безводного тетрагидрофурана, барботируют между 0 и 5 С метилацетилен в течение 1 ч. Прибавляют

2, 15 г 3,3-этилендиокси 5u,10 -эпокси 17d-триметилсилилокси эстр-9(11)ен 1?р-карбонитрила в 10 см тетрао гидрофурана, нагревают до 40 С в течение 2 ч и 30 мин и оставляют 16 ч при комнатной температуре. Между 0 и 5 С прибавляют 20 см раствора хлористого аммония, экстрагируют хлористым метиленом, промывают водой, сушат и концентрируют досуха ° Остаток растворяют в 30 см этанола, прибавляют 3 смз раствора едкого натра, перемешивают 1 ч, разбавляют при помощи 90 см воды и экстрагируют хлороформом, промывают водой, сушат и концентрируют досуха..Остаток перекристаллизуют в смеси хлористый метилен — изопропиловый эфир и собирают 1,21 r целевого продукта. Т.лл.

204 С.

Стадия Б: -лактон 1?р-гидрокси

3-оксо 10р-((-пропинил) 19-нор 1?o(-прегна 4,9 (11)-диен-21 карбоновой кислоты.

В 15 мин в атмосфере азота и при

-50 С раствор 3,6 см аллилового эфира теграметилфосфородикарбаминовой кислоты в 15 см тетрагидрофурана прибавляют к раствору 23 см 1,6 М бутиллития в гексане. и 20 см безводного тетрагидрофурана. Этот расто вор перемешивают 1 ч при -30 С и в

5 мин прибавляют 1„78 г продукта, полученного как указано,, По истечении 2 ч 20 мин.в смесь вводят 38 см, 2 н. соляной кислоты, перемешивают 30 мин, зкстрагируют хлороформом, промывают водой, сушат . и концентрируют досуха. Остаток раст- воряют в 30 см этанола, прибавляют

6 см 6 н. соляной кислоты, нагрева ют при около 50 С 1 ч 15 мин, отгоняют этанол, забирают хлористым метиленом, промывают водой, сушат и концентрируют досуха. Остаток хрома,тографируют на двуокиси кремния, элюйруя смесью петролейный эфир (т.кип.

60-80 С) — этиловый эфир уксусной кислоты (1-1), и получают 920 мг продукта, который забирают в 2 см хлористого метилена, фильтруют, прибавляют 10 см изопропилового эфира, концентрируют до появления кристаллизации, леденят, отсасывают и получают после сушки 790 мг целевого продукта. Т.пл. 200 С, Пример 2.,J-Ëàêòîí i?ð-гидрокси 3-оксо 10 -(фенилэтил)

19-нор 17 -прегна 4,9 (11)-диен-21-карбоновой кислоты.

20 Стадия А: 3,3-этилен диокси 5«-гндрокси 1Ор-(фенилэтинил) 1?o(-триметилсилилокси эстр-9(11)-ен 1.7/ -карбонитрнл .

К 50 см эфирного раствора этил25 магнийбромида (М) по капле лрибавля. ют 8 см фенилацетилена, разбавляют

35 см безводного тетрагндрофурана и оставляют 1 ч лри комнатной температуре. Затем прибавляют 6,45 r 5о, 10a -эпокси-3-оксо 1?0t -триметнлсилилокси эстр-9(11)-ен 1?р-карбонитрила, перемешивают 4 ч при комнатной температуре, нагревают ч лри 35 С, Охлаждают и выливают реакционную

35 смесь в растворхлористого аммония экстрагируют этиловым эфиром уксусной кислоты, промывают водой, сушат, концентрируют досуха и получают

8,9 г продукта. Хроматографируют на

40 двуокиси кремния, элюируя смесью циклогексан-этиловый эфир уксусной кислоты (9-1) и собирают 4,6 г продукта, который перекристаллнзуют в гексане и получают 3,47 r целевого продукта. Т.лл. 176 С.

Стадия Б: 3,3-этилендиокси 5a -гидрокси 101.-(фенилэтинил) эстр-9(11)-ен 17-он.

3,1 r полученного выше продукта перемешивают в 31 см этанола, прибавляют 3,1 см раствора едкого натра, а затем 10 см этанола и продолжают перемешивание 2 ч. Разбавляют в 100 см воды, отсасывают, промывают водой, сушат и получают 2,49 r целевого продукта. Т.пл. 199 С.

Стадия В: р-лактон 17 -гидрокси

3-оксо !0P"(фенилэтинил) 19-нор !7а 5

14 70198

-прегна 4,9 (11)-диен-21 карбоновой вым эфиром уксусной кислоты, промыкислоты. вают водой сушат и концентрируют доУ

Охлалдают до -70 С 10 см раство- суха. Остаток хроматографируют на ра 1,6 M н-бутиллития в гексане, раз- двуокиси кремния, элюируют смесью бавляют при помощи 10 см безводно- петролейный эфир — этиловыи эфир

ro тетрагидрофурана, а затем прибав- уксусной кислоты (4-1) и получают ляют по капле при -70 С 1,6 см алли- 1,335 r целевого продукта. лового эфира N,N,N .,N -тетраметилфос- Стадия Б: 3,3-этилен-диокси 5.(форкабаминовой кислоты в 10 см тет- lp -гидрокси 10р-(3-(2КЯ-тетрагидропирагидрофурана и оставляют реагиро- ранилокси) проп-1"инил1эстр-9(11)-ен вать 1 ч при -10 С. 17-он.

Прибавляют 865 мг полученного вы- 1,330 г полученного вьппе продукта ше продукта, перемешивают 15 ч при Р астворяют в 60 см метанола. Прибавляют 3 см раствора едкого натра комнатной температуре. Подкисляют, п ибавляют 10 см 2 н. соляной кис- и оставляют Реагировать 2 ч. Раэбавпри авляют см н. лоты и 1 см концентрированной соля- ляют прибавляя . см д ной кислоты и перемешивают мин. сасывают, промывают водой, сушат и ной кислоты, промывают водой органи- 20 получают 900 мг целевого продукта. ческий слой, сушат и концентрируют Т. пл. 143 С, досуха под уменьшенным давлением. у еньшенным давлением. К Стадия В: 1 -лактон 5А, 17р-дигидростатку прибавляют см метанола, б ют 25 см метанола окси 3,3-этилендиокси 10р-(3-(2RSа затем 5 см 6 н. соляной кислоты, -тетрагидропиранилокси)проп-1-инил)- при 50 С нагревают 1 ч . После охлаж- 2В 19-нор-173-прегна 9(11)-ен-2 1-карбодения раз бавляют водой и экстрагиру- новой кислоты.

6 Мбе илют этиловым эфиром уксусной кислоты, К раствору 12,5 см 1, ерилпромывают водой органический слой, лития в гексане, охлажденному до сушат и концентрируют досуха под -50 С, прибавляют 12,5 см безводноуменьшенным давлением, ста

Остаток хрома- -„- го тетрагидрофурана, а затем прибавж тографируют на двуокиси кремния, ляют при -65 С раствора 2,2 см алэлюируя смесью циклогексан-этиловыи лилового эфира, тетраметилфосфоротриэфир уксуснои кислоты сл ты (1: 1) и соби- . карбаминовой кислоты в 8 см сухого — 0 тетрагидрофурана. Доводят до -10 С, алли ации в изопропило- -15 С и оставляют реагировать 1 ч, вом эфире, а затем в водном этаноле, ном этаноле затем прибавляют 890 мг полученного продукт плавится при 196 С выше продукта и оставляют реагиро3. -Лактон 17р-гидр- вать 18 ч при комнатной температуре °

Il р и м е р . - актон.

Разбавляют водой, экстрагируют эти3-оксо-19-нор 17Ы-прегна 4,9(11)-ди- ловым эфиром уксусной кислоты, проди-21-карбоиовой кислоты. мывают водой, сушат и концентрируют

Стадия А:, -этилек диокси досуха. Остаток хроматографируют на

-гидрокси 108-(3-(2RS-тетрагидропи- двуокиси кремния, элюируя бенэол— ранилокси)проп- -ипил мет

) -1- ил1метилсилилокси этиловый эфир уксусной кислоты (— ), Собирают 560 мг целевого продукта.

К 30 см 0,9 M эфирного раствора Стадия Г: :у-лактон 17р-гидрокси пропилмагнийхлорида прибавляют по 10)-(3-гидрокси проп-1-инил) 3-оксокаплям 4,4 см 3-(2-тетрагидропира- -19-нор 17Ы-прегна 4,9 (11)-диеннилокси) 1-пропина в 15 см безводно- -21-карбоновой кислоты. го эфира. Разбавляют в 20 см тетра- 555 мг полученного вьппе продукта аство яют в 10 см метанола с 5 см при комнатной температуре. Вводят 6 н. соляной кислоты и оставляют ,32 3 3- ендиокси 5 103-эпок- реагировать 18 ч при комнатной темФ си 17о -триметилсилилокси эстр-9-(11)- пературе, а затем 1 ч при

-l7 - бонит ила и перемешивают лаждают, разбавляют водой, экстра5 ч при комнатной температуре, нагре- гируют хлористым метиле о, р

1 и 35 С а затем выпивают вают водой, сушат и концентрируют довают 1 ч при, а затем ием Осв разбавленный раствор перв ч о р первичного суха под уменьшенным давлен фосфата натрия. Экстрагируют этило- таток хроматографируют на двуокиси

1470198 кремния, элюируя смесью циклогексан — этиловый эфир уксусной кислоты (1: 1). Отделяют 350 мг целевого продукта.

После нерекристаллизации в этиловом эфире уксусной кислоты продукт плавится при 198 С. (сО р = -31 «+1 (К = 1%, СНС1 ) .

Пример 4. 1 -Пактон.10p-(1-бутинил) 17р-гидрокси 3-оксо

19-нор 170&-прегна 4,9-(11)-риен 21-!

-карбоновой кислоты.

Стадия А: 10Р-(1-бутинил) 3,3-(зтилендиокси) 5c(-гидрокси эстр-9(11)-ен 17-он.

В течение 2 ч 30 мин барботнруют этилацетилен в смесь 330 см этилмагнийбромида. в 0,5 н. эфирном растворе и 330 смэ тетрагидрофурана, а затем вводят. за один раз 10 г 3,3-этилендиокси 5о(, 104 -зпокси 17Ы-триметилсилилокси эстр-9(11)-ен 17р-карбонитрила. Нагревают 4 ч 30 мин при 40-50 С, доводят до комнатной температуры, выливают в смесь хлористого аммония и льда, промывают водой, экстрагируют хлороформом, су.,шат, а затем доводят досуха. 12 г полученного продукта растворяют в

100 см этанола нри 95 С, прибавляют 10 см раствора едкого натра, перемешивают 45 мин, перегоняют этанол,.забирают хлороформом, промывают водой, сушат и затем доводят досуха.

9,3 r таким образом полученного продукта хроматографируют на двуокиси ( кремния (элюент:петролейный эфир— этиловый эфир уксусной кислоты 1 1 содержащий 1 /оо триэтиламина). Собирают 4,6 г продукта. Rf = 0 35.

Этот продукт растворяют в 10 см хлористого метилена. Фильтруют, прибавляют 30 см иэопропилового эфира, леденят, а затем отсасывают и сушат при 50 С. Получают 240 мг продукта, т.пл. 139 С.

Вычислено,%: С 74,97, Н 8,39.

С1,,К О д = 384 У 52 °

Найдено,%: С 75,,00; Н 8,5.

Стадия Б: -лактон 10Р-(1-бутинил) 17-гидрокси 3-оксо-19-нор 17-прегна 4,9 (11)-диев 21-карбоновой кислоты.

При -50 С к раствору 24 си н-бутиллития s гексане (1,65 М} прибавляют 24 см тетрагидрофурана, затем при -50 С в 15 мин прибаваяют 4 смз аллилового эфира тетраметилфосфоро20

25 дикарбаминовой кислоты в растворе в

16 см тетрагидрофурана. Перемешивают 1 ч при -30 С и вводят 1,92 r полученного в стадии А продукта в растворе в 20 см тетрагидрофурана.

Дают температуре дойти до комнатной, перемешивают 2 ч, прибавляют при

0-"5 С 40 см 2 н. соляной кислоты, перемешивают 30 мин, экстрагируют хлороформом, промывают водой, сушат и доводят досуха. Получают 3 г продукта, которые растворяют в 30 см этанола, прибавляют в атмосфере азота 6 см 0,5 н. соляной кислоты и нагревают при 50 С в течение 2 ч.

Доводят досуха, забирают в хлорнстый метилен, промывают водой, а затем доводят досуха. Получают 2 r продукта, который хроматографируют на двуокиси кремния, элюируя смесью петролейный эфир " этиловый эфир уксусной кислоты 1-1. Получают 1,26 r продукта. Rf = 0,22. Продукт растворяется в 20 см изопропилового эфира с обратным холодильником. Концентрируют до половины, затравляют кристаллизацию, леденят, отсасывают, промывают ледяным изопропиловым эфиром, а затем сушат при 50 С в вакууме. Получают 880 мг продукта, который перекристаллизуют, растворяя его в 8 см изопропилового эфира с рефлюксом, фильтруют, концентрируют до появления

35 мути, затравливают в горячем состоянии, леденят, отсасывают, промывают петролейным эфиром, а затем сушат при 50 С в вакууме, Получают 770 мг продукта. Т.пл. = 94 С.

Вычислено,%: С 79,33, Н 7,99.

Се К ф з = 378,48 °

Найдено,%: С 79,5, Н 8,2. (4) р = -35 +1 (К = 1% хлоро форм) .

Пример 5. 1-Лактон il7p-гидрокси 3-оксо 10р-(1-пентинил) 19-нор

174-прегна-4,9 (11) 21-карбоновой кислоты.

Стадия А: 3,3-(этнлендиокси) 5d-.

-гидрокси 10Р-(1-пентил) эстр-9-(11)-ен-17-он.

Действуют, как в стадии А примера 4, но исходя иэ 6,45 r 3,3-этилендиокси 5I, 10 -эпокси 17 -триметилеилилокси эстр-9(11)-ен 17р-карбонитрипа и получают после хроматогра фии 2,61 г целевого продукта. Пере,кристаллизация 200 мг этого продукта в 2 см изопропилового эфира с ре1470198

20 флюксом дает 140 мг целевого продук- та (чистого) . Т.пл. 120 С.

Вычислено,X: С 75,34, Н 8,6.

С Н О4 = 398,55.

Найдено, 7.: С 75, 1, Н 8, 7.

Стадия В: у-лактон 17р-гидрокси

3-оксо 10р-(1-пентил) 19-нор 17(-прегна-4, 9 (11) -диен 21-карбоновой кислоты, 10

Действуют, как в стадии Б примера 4, но исходя из 2 r полученного в стадии А продукта. После хроматографии получают 1, 13 г целевого продукта. Этот продукт перекристаллизуется растворением в 2 см хлористого метилена и прибавкой 10 CM изопропилового эфира. Получают 970 мг чистого продукта, а затем 910 кг после второй перекристаллиэации. Т.пл.

123 С.

Вычислено,X: С 79,55; Н 8,22.

С,Н, Оэ = 392,52.

Найдено,X: С 79,6; Н 8,3.

II p и м е р 6. ) -Лактон 13Р- 25

-этил-10р-этинил 17р-гидрокси-3-оксо 18,19-динор (17а -прегна 4,9 (11)-диен-21-карбоновой кислоты.

Стадия А: 17Р-этил 10 -этинил

3,3-этилендиокси 5а-гидрокси гон-(11)-ен-17-он.

О

К раствору, охлажденному до вЂ, 4 С

0,75 г 13Р-этил-3,3-этилендиокси.-10 -этинил-гон-9(11)-ен-5о(, 17Р-диола в 12 см диметилформамица прибавляют 2,4 r дихромата пиридиния. Перемешивают 1 ч 30 мин, разбавляют водой и экстрагируют эфиром. Промывают водой органический слой, сушат его и концентрируют досуха. Получают 4О

0,74 г целевого продукта.

Стадия Б: ) -лактон 13р-этил 10Р-этинил-17р-гидрокси 3-оксо 18,19-динор (171)-прегна-4-9-(11)-диен-21-карбоновой кислоты.

Действуют, как и в стадии Б примера 1, но исходя из 0,95 г полученного в предыдущей стадии А продукта и оставляя реагировать 65 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь выпивают в раствор хлористого аммония

50 и экстрагируют этиловым эфиром уксусной кислоты. Промывают водой органический слой, сушат его и концентрируют досуха под уменьшенным давлением.

Остаток забирают в 18 см метанола, 55 прибавляют 9 см 0,5 н. соляной кислоты, нагревают 1 ч 30 мин при

50 /55 С, охлаждают, разбавляют водой, экстрагируют хлористым метиленом, очищают сырой продукт хроматографически на двуокиси кремния (злюент: эфир — этиловый эфир уксусной кислоты 8,5-1,5) и получают 0,26 г целевого продукта. Т.пл. = 198 С, после перекристаллизации в изопропиловом эфире. (ñ )g) = ;4О (К=.1%, хлороформ).

Вычислено,X: С 79,08; Н 7,74.

С Н Оз = 364,49.

Найдено, X: С 79, 1, Н 7,8.

Пример 7. g-Лактон 10р-этинил-1 7р-ок си-3-оксо-19-нор-1 7o(-пр е гна-ч, 9 (1 1) -диен-21-карбоновой кисло" .ты, Стадия А: г-лактон 3,3-этилендиокси-10р-этинил-54, 17/ -диокси-19-нор-174-прегна-9-(11)-ен-21-карбоновой кислоты °

Охлаждают примерно до -60 С 25 см

157.-ного раствора бутиллития в гексане, добавляют 10 см тетрагидрофурана, затем прикалывают раствор

3,7 смз тетраметилфосфордиамидат-кислоты в 1Ц см безводного тетрагидрофурана и оставляют температуру медленно повышаться до -10 С. После

О этого добавляют к полученному раствору 1,75 г 17-оксо-5o -окси-3,3-этилендиокси-iÎ -этинил-эстр-9(11)-ена, доводят температуру реакционной смеси до комнатной, затем спустя 45 мин выливают ее в раствор хлорида аммо.ния, экстрагируют этилацетатом, opraническую фазу промывают водой, сушат над сульфатом натрия и выпаривают досуха, хроматографируют на диоксиде кремния (элюирующее средство: циклогексан-этилацетат 6-4) и получают

900 мг искомого продукта, который используют таким для последующей стадии.

Стадия Б: у-лактон-10ф-этинил-17p-окси-3-оксо-19-нор-17 -прегна-4,9(11)-диен-21-карбоновой кислоты.

1,32 г полученного в предыдущей стадии продукта вносят в 18 -см метанола и 6,51 см соляной кислоты, нагревают в течение 1 ч 45 мин реакО ционную смесь при 65 С, затем оставляют охлаждаться, разбавляют водсй и экстрагируют метиленхлоридом, промывают последовательно органическую фазу водой, раствором бикарбоната натрия и водой, сушат над сульфатом натрия и выпаривают досуха под вакуумом. Остаток хроматографируют на

1470198

12 диоксиде кремния (элюирующее средство: циклогексан-этилацетат 1-1) и получают 1,07 r искомого продукта, который очищают путем перекристалли5

-зации из смеси хлористый метилдиизопропиловый эфир. Т.рл. 210 С.

Сравнительные испытания.

Некоторые известные лекарства против повышенного давления, такие как антагонисты альдостерона и другие диуретики кроме воздействия на почки, могут оказывать значительное ак-. тивизирующее действие на артериальную стенку. Изменяя мембранную прони- 15 цаемость к Na и К сосудистых клеток гладких мышц, эти соединения способствуют снижению сократимости этих клеток и, следовательно, уменьшению периферической сопротивляемости, уве- 20 личивающейся при повышении артериального давления. Эти данные позволяют предположить, что можно разработать средства против повышения давления, оказывающие более избирательное воэ- 25 действие на артериальную стенку.

Можно точно определить воздействие противоминералокортикоидов на межмембранную передачу Na артериальной стенки: пассивные передачи Na и 30 активные передачи этого иона посредством насоса Na-К. Он основывается на том, что альдостерон стимулирует пассивные и активные передачи Na артерии. Блокируя действие минерало35 кортикоида на уровне его рецептора, антиминералокортикоиды способны таким образом нормализовать даже на уровне артериальной стенки эти ионные передачи, контролирующие сосудистый тонус (1).

Тест осуществляют в условиях in

vitro. Используемой сосудистой моделью является каудольная артерия адреналэктомизированной крысы. Пе45 редача Na оценивают путеи изотопного анализа однонаправленных эффлюксов

22Na. Для этого в 2 стрипа одной и той же артерии вводят -?Na затем их объединяют при 37 С: один с обычным физиологическим раствором (PSS), при этом полученный таким образом эффлюкс Na обозначает общий Na выходящий из артерии (пассивный эффлюкс + акгивность насоса Na-К), другой с PSS содержащим 4 10 N уабаина. В эгих условиях, так как уабаин блокирует активность насоса

Na-К, эффлюкс Na обозначает пассив ?2 ный выход Na. Активность насоса Na-К оценивается в зависимости различия эффлюксов Na при отсутствии и в присутствии уабаина.

Стрипы соединяют в течение

12 мин, т.е. времени, соответствующего промывке изотопа согласно межяембранной составляющей эффлюкс Na гладких мышечных сосудистых клеток (3). Эффлюент отбирают каждую минуту и после отсчета радиоактивности рассчитывают кривую разбавления насыщенного раствора. Затем определяют путем математического анализа дозу

Na, на выходе выраженную в мин по формуле

А -Ag

r — — ?2 (t, — t ) где r = доза

А, и А - две точки на кривой разбавления во время н с

Воздействие альдостерона на эффлюксы Na является зависимой дозой, поэтому при 10 М (1) определение воздействия тестированных антиминералокортикоидов на эти передачи заключается в оценке процента торможения этими продуктами максимального ответа на альдостерон пассивных и активных передач Na.

Для этого выход эффлюксов? Na оценивается в артериях: либо в присутствии альдостерона (10 М в PSS), в течение 2 ч (доэа А), либо в присутствии продукта, подлежащего тестированию (10 Г1 в PSS), эа один час перед добавкой альдостерона (10 М) в инкубационную среду, при этом эффлюксы измеряют через

2 ч (доза В), либо помещенные в PSS прн отсутствии альдостерона или другого продукта (доза С).

Считая, что разница между дозами

А и С обозначает 100Х повьппення, рассчитывается торможения этого ответа под действием тестированного продукта (доза С).

Тест проводится на партиях нэ

10 артерий в каждом эксперименте (cM. таблицу), Острая токсичность (на мышах).

Определяют ЛД 0 (дозу, прн которой ни одна иышь не погибает) у мыши-самца весом 18-20 r породы SPF

SWISSDFI мышам, которым не давали

l4!

470198 а

С Ra o

0Н

ОФ

Эффлюкс in vitro

Ка при концентации 10 Х, % орможения. Антаонистический эфект

Продукты ассивный насос

100

28

0 пищу в течение 18 ч и которые составляют партии из 5 животных, вводят орально или интерперитонально исследуемый продукт, Животных наблюдают в течение 7 дней в среде обитания. В течение этого периода животным давали пищу и питье ad libitum.

Исследуемый продукт суспендируют в карбоксиметилцеллюлоэе и вводят до- 10 зу в 200 и 400 мг/кг объемом 25мл/кг.

Результаты. Продукт по примеру 1 ° введенный в указанных условиях, не приводит ни одного животного к гибели в течение 7 дней наблюдения при дозах 400 и 200 мг/кг, введенных орально или интерперитонально. Следовательно продукт нетоксичен. формула изобретения 20

Способ получения производных стероидов общей формулы где R, — С,-С -алкил, возможно замещенный гидроксигруппой, Продукт по примеру 1

Продукт по примеру

Продукт Х (10 -этинил-21-гидрокси-19-нор-прегна-4,9(11)-диена-3,20-дион) Rq - метильная группа

X u Y - вместе означают радикал р ф о т л и ч а ю щ и й с я тем, что соединение общей формулы где R H R имеют указанные значения, а имеющиеся оксигруппы защищены;

К - кетальная защитная группа для кетонной

1 функции, обрабатывают реагентом общей формулы где A1K — С,-Сз-алкил в присутствии сильного органического основания с последующей обработкой кислотой.