Штамм бактерий providencia sтuаrтii - продуцент рестриктазы р s @ i

Штамм бактерий providencia sтuаrтii - продуцент рестриктазы р s @ i

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой штамм, который используется для получения рестриктазы PST 1. Цель изобретения - получение нового штамма, обладающего более высоким уровнем синтеза рестриктазы. Предлагаемый штамм PROVIDENCIA STUARII 17 ВКПМ В-4076 дает выход рестриктазы PST 1 4000-45000 ед/г биомассы или 300000-400000 ед/л культуральной жидкости и имеет высокую стабильность, а именно сохраняет способность продуцировать фермент при хранении не менее 5 лет без селекцционной работы. В результате использования предлагаемого изобретения выход рестриктазы PST 1 возрастает с 400-600 ед/г биомассы до 40000-45000 ед/г биомассы или с 3000-4800 ед/л культуральной жидкости до 300000-400000 ед/л культуральной жидкости. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„„Я0„„1472493.(51) 4 C 12 N 9/14//(Ñ ",. ": 9/ 14

"С 12 R 1:01) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHGMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ!

Изобретение относится к микробиологической промышленности и представ-, ляет собой штамм, который может быть использован для получения рестриктазы Pst 1.

Цель изобретения — получение нового штамма, обладающего более высоким уровнем синтеза рестриктазы

Pst 1.

Штамм Providencia stuartii (17)

ВКПИ В-4076 получен в результате многократных пересевов с отбором ваГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4293057/28-13 (22) 03,08.87 (46) 15.04.89. Бюл. Р 14 (71) Научно-производственное объединение "Биолар" и Научно-производственное объединение "Вектор" (72) М.Н.Бойков, В.Е.Репин, С.Х.Дегтярев, В.А.Виестуре и О.А.Стенгревицс .(53) 577.15 (088.8) (56) Smith D.I., В1еМпег F R., Davies J. "The isolation and partial characterization of a new restriction endonuclease from Providencia stuartii". J. Nucleic Acids Res, 1976, vol 3, !! 2, р ° 343-353.

Ireen,Р.J., Heyneker H.L., Bolivar F., Rodriguez R.L., Betklach М.С., Covarrubias А.А., Back

an К., Russel D.T., Tait R., Воуer Н.W. "general method for th6 ,purification of restriction enzymes". J ° Nucleic Acids Res. 1978, ч,5, У 7, р ° ?373-2380. (54) П1ТАМИ БАКТЕРИЙ PROVIDENCIA

STUARTII — ПРОДУЦЕНТ РЕСТР!!КТАЗЫ

PST 1. (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой штамм, который исполь- зуется для получения рестриктазы

Pst !. Цель изобретения — получение нового штамма, обладающего более высоким уровнем синтеза рестриктазы.

Предлагаемый штамм Providencia stuartii 17. ВКПМ В-4076 дает выход рестриктазы Pst 1 40000-45000 ед/г био,— массы или 300000-400000 ед/л культуральной жидкости и имеет высокую стабильность, а именно сохраняет способность продуцировать фермент при хра- а ф некии не менее 5 лет без селекционной работы. В результате использования предлагаемого изобретения выход рестриктазы Pst 1 возрастает с 400 — Сю

600 ep/г биомассы до 40000-45000 ед/г биомассы или с 3000-4800 ед/л культуральной жидкости до 300000 leek

400000 ед/л культуральной жидкости. фЬ .1 табл. «3

2 риантов, имеющих высокую продуктивностьь рестриктазы P st 1 .

Штамм имеет следующие характеристики.

Морфологические признаки.

Клетки палочковидные, как правило 0,4-0,6 х 1,0-3,0 мкм, Жгутики есть, спор не образуют. Грамотрицательные.

Физиологические признаки, При выращивании на ксилозе, арабинозе, мальтозе и рамнозе кислота

3 147249 не образуется. Тесты на метиловый красный и фенилаланиндеаминазу положительные, а орнитиндекарбоксилазу и реакцию когес-Проскауэра — отрицательные. Индол образуется, а серо5 водород не образуется.

Строгие аэробы.

Культуральные признаки.

Штамм растет на твердой питательной среде, содержащей 3,5% агара су0 хого питательного и воду, при 35-37 С в течение 16-18 ч, Рост штамма Providencia stuartii (17) ВКПМ В-4076 умеренный, штрих четковидный. Характер края колоний гладкий, блеск поверхности колоний матовый, характер поверхности — гладкий.

Профиль штриха — выпуклый. 26

По оптическим признакам колонии являются опаковыми, т.е. не просве.чивающимися.

Штамм Providencia stuartii 17 имеет специфичный запах, колонии этого 25 штамма по консистенции являются маслянистыми.

Хорошо растет на жидкой питательной среде, содержащей рыбный гидрализат 50 г/л; воду до 1,0 л, рН 7,2 — 3р

7,4. На такой питательной среде штамм растет при 35-37 С в течение

5-6 ч, При.выращивании штамма на питательной среде данного состава происходит помутнение среды, что свидетельствует о сильном росте культуры.

Рост глубинный и пленки на поверхности не образуется. Осадок, состоящий из клеток Providencia stuartil 17 40 тягуиий, при воздействии на него лизоцимом быстро происходит лизис клеток. Количество осадка обильное, цвет осадка — светло-серый.

В ОТличие От известного предлагае 45 мый штамм дает выход рестриктазы Pst

1 40000-45000 ед/г биомассы или

300000-400000 ед/л культуральной: жидкости; имеет высокую стабильность, а именно: сохраняет способность продуцировать фермент при хранении не

50 менее 5 лет без селекционной работы.

При выращивании культуры на питательной среде известного. состава рН 7,4; температуре 37 С; аэрации

40 л/мин ферментацию ведут до достижения значения рН 8,0, Выход биомассы: 7,5-8,0 r/ë культуральной жидкости. Выход рестриктазы Pst 1.:

3 4

20000-22500 ед/г биомассы; 150000—

180000 ед/л культуральной жидкости.

Сравнение стабильности содержания рестриктазы Рз1 1 при хранении представлено в таблице.

Штамм-продуцент

Стабильность ° год

Providencia

stuartii

Providencia

stuartii

BKIIM В-4076 5

164 ВКПМ

В-1789

Известный

Пример 1. Для получения штамма с высоким содержанием рестрик тазы Р st 1 велась непрерыв ная селекционная работа с отбором вариантов, имеющих высокую продуктивность рестриктазы Pst 1.

Селекция велась в чашках Петри по твердой среде, содержащей 3,5% агара сухого питательного и воду, Проверка продуктивности штамма

Providencia stuartii 17 ВКПМ В-4076, полученного селекционным путем, велась в сравнении со штаммом ProvidencЫ stuartii (164) ВКПМ В-1789, который апробирован в производственных условиях.

Готовят среду следующего состава, г/л:

Рыбный гидролизат 50

Вода 1,0

Оживление штамма Providencia

stuartii ВКПМ В-4076 осуществляют на сухом питательном агаре (сухой питательный агар 35 г/л, вода 1,0 л) в чашках Петри. Инкубируют в термоо камере при 37 С в течение 18 ч.

С поверхности агара в чашках Петри культуру переносят бактериологической петлей в качалочные колбы с питательной средой данного состава, рН 7,4.

Выращивают посевной материал при

37 С в течение 18 ч на качалке.

Ферментацию культуры проводят на питательной среде данного состава при рН 7,4; температуре 37 С; перемешивании 200 об/мин; подаче воздуха — 2 объема воздуха на 1-объемl питательной среды выращивают до досСоставитель Н.Ходарев

Техред М.Дидык

Корректор Н.Гунько

Редактор И.Сегляник

Заказ 1673/27 Тираж .50 E Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 101

5 1472493 6 тижения оптической плотности бакте- В-4076 по сравнении с известным спо— риальной суспензии 1,5 опт. ед, (ФЭК, собом выход рестриктазы Pst 1 возфильтр N- 6, кювета 0,5 см), растает с 400-600 ед/г биомассы до

Выход биомассы: 7,5-8,0 г/л куль- 40000-45000 ед/г, туральной жидкости.

Выход рестриктазы Pst 1 40000— Формулаизобретения

45000 ед/г биомассы; 300000

400000 ед/л культуральной жидкости. Штамм бактерий Providenc i à s tuarТаким образом, при использовании 10 tii ВКПМ В-4076 — продуцент рестрикштамма Providencia stuartii ВКПМ тазы Pst 1 .