Способ дифференциального определения доброкачественных и злокачественных опухолей молочных желез

Способ дифференциального определения доброкачественных и злокачественных опухолей молочных желез

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для дифференциальной диагностики опухолей молочных желез. Цель изобретения повышение точности способа. Цель достигается с помощью моноклональных антител к белкам промежуточных филаментов - кератинам № 8, № 57 и к вименчину. При наличии в клетках кератинов N° 8, 17 и виментина опухоль диагностируют как доброкачественную, а при наличии кератина № 8 - как злокачеетпенную. Точность способа возрастает на 60%.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ а е

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ П.!НТ СССР (46) 23. 09. 90. Бюл, К 35 (2 1 ) 42 7 1842/28-14 (22) 30.06.87 (71) Всесоюзный онкологический научньп» центр АМ!! СССР (72) В.Д.Ермилова, В.И.Гельштейн, Т.А.Чипышева, Г.А.Банников, С,M.Òðîë»»oâñ»»»»é и Л.В.Литвинова (53) 615.373 (088. 8) (56) Amer. 3. Surg. Pathol, 1983, v.7, р,451-461, 1 (54) СПОСОБ ДИЫ>ЕРЕ!!ЦИАЛЬНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДОБРОКАЧЕСТВЕННЪ!Х И ЗЛОКАЧГСТ-.

ВЕННЪ!Х ОПУХ01!ЕЙ ИОЛОЧНЪ!Х ЖГЛЕЗ

Изобретение относится к медицине, в частности к гистологической диагностике злокачественных опухолей, и может быть использовано в целях уточнения дифференциального гистологического диагноза между доброкачественной и злокачественной природой поражения молочной железы. Изобретение . основано на применении иммуногисто- химического анализа опухолей молочных желез с помощью набора моноклональных антител (МКАт).

Цель предлагаемого изобретения состоит в повью»ении точности диффе ренциальной диагностики между доброкачественной и злокачественной природой наиболее часто встречающихся . опухолей молочной железы.

Способ осуг»ествляется следующим образом.

Каждый иэ серийных срезов исследуемых образцов опухолей, помещенных

„„SU„„ I 477087 А 1 (51) 5 С 01 N 33/53//G 01 N 33/577 (57) Изобретение относится к медицине и может быть йспольэовано для дифференциальной диагностики опухолей молочных желез, Цель иэобретенияповышение точности способа. Цель достигается с помощью моноклональных антител к белкам промежуточных филаментов — кератинам !! 8, !! 17 и к виментину. При наличии в клетках кератинов 9- 8, 17 и виментина опухоль диагностируют KGK доброкачественную, а при наличии кератина N 8 - как элокQ÷åcòвенную. Точность способа возрастает на 60%. па предметное стекло, окрашивают

С: одним иэ моноклональных антител (ИКАт) против следующих белков промежуточных филаментов: кератина Р 8, кератина 1! 17 или виментина. На окрашенных препаратах сопоставляют ло- ф кализацию данных белков в одних и а Д тех же гистологических структурах, что позволяет судить о природе опухоли, В способе применяют ПАП-реакцию р (пероксидаза. — антипероксидаэа) или реакцию непрямой иммунофпуоресценции.

Гистологический диагноз, ставится на.параллельных парафиновых срезах, окра»ленных гематоксилин-эоэином, до и независимо от иммуногистохимического исследования, на основании гистологической классификации опухолей молочных желез, предложенной

ВОЗ.

Пример 1. Доставленный в жидком азоте fcóño÷åê. ткани молочной

1477087 железы больной А,, удаленный при биопсии, заливают в 7/-ный раствор желатина на забуференном физиологи.ческом растворе (ЗФР). Изготовлены серийные срезы на криотоме Leitz

2100, которые помещают на предметные стекла. Для исследования берут два стекла (всего 6 срезов).

Составитель .Техред M.Äèä

Редактор Л. Павлова. Заказ 3331 Тираж 531 Подписное

ВИИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Иосква, )K-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", F,Ó>êãoðoä, ул. Гагарина, 101

Гистохимическое исследование методом ПАП. Срезы фиксируют 4 -ным формалином на ЗФР 4 мин, отмывают в трех . сменах ЗФР. Проводка по спиртам о восходящей крепости от 45 до абсолютного, обработка метанолом с 0,3 перекиси водорода 15-13 мин, проводка по спиртам нисходящей крепости, Инкубация с испытуемыми ИКАт: на каждый срез наносят по 20 мкг одного из

ИКАт: против кератина У 17 (клон E3), против кератина 11 - 8 (клон H1), или . против виментина (клон .БТ30) и инкубируют при комнатной температуре во влажной камере 30 мин, По окончании 25 инкубации ИКАт тщательно убирают, для чего срезы промывают в. трех сменах

ЗФР. Инкубация всех срезов с:кро-:.: личьей сывороткой против,мышиных гамма-глобулинов, специфически связы- 30 вающИх белки промежуточных филаментов. Отмывание в трех сменах ЗФР.

Проявление специфического связывания с помощью комплекса пераксидаэа-антипероксидаэа. Промывание в трех сменах

ЗФР. Выявление окраски специфичесУ

> кой для пероксидазы, обработка 3-3— диамино-бензидином-тетрахлоридом (ДАБ) и закрепление 0,5%-ным осмием до.S мин. Проводка по спиртам восход 40 дящей крепости и заключение в канадский бальзам. На одном из стекол срезы докрашивают гематоксилином, Контt рольные срезы обрабатывают. аналагичнь>м образом, за исключением 1-й ин- кубации с ис тытуемыми И1(Ат. Вместо

ИКАт срезы инкубируют с ЗФР. Готовые препараты можно хранить длительное время, Просматривают в просвечивающем микроскопе, Фотографируют.на пленку

"Иикрат".

Положительная реакция с МКАт оценивается по коричневому окрашиванию цитоплаэмы.

При микроскопии объекта видно, что пролиферирующие клетки в альвеолах дольки положительно окрашены на кератин У 8, Р 17 и виментин. Данное сочетание маркеров свидетельствует о доброкачественной природе пролиферации. Гистологический диагноз, поставленный до и независимо от иммуно гистохимического исследования: фиброзно-кистоэная болезнь, дольковая гиперплаэия, Ф

Пример 2. Больная Б. Методика иммуногистохимическога исследования аналогична примеру 1, Видно, что клетки, расположенные в просвете альвеол, окрашены только на кератин Ф 8 и не окрашены на кератин Р 17. Последний выявляется толька н клетках, окружающих пролиферат и являющихся остатками предсущество-. вавших миоэпитепиальных клеток.

Па маркернай характеристике картина соответствует раковой опухоли, В данном случае был поставлен гистологический диагноз дольковога рака.

Аналогичные результаты, как при

ПАП-реакции, дает реакция непрямой иммупофлуоресценции.

Диагностическая эффективнастb способа показала, чта точность способа возрастает приблизительно на бр, Формула и к о б р е т е н и я

Способ дифференциального определения доброкачественных и злокачественных опухолей молочных желез, включающий нанесение на гистологические срезы специфических антител, о т л ич а и шийся тем, что, с целью повышения точности способа, используют монаклональные антитела к белкам промежуточных филаментов — кератина > 8, кератина У 17 и виментина и при наличии трех филаментов определяют доброкачественную опухоль, а при наличии кератина 11 8 — злокачественную, И.Башкаев

ык . КарректарС.Шекма»