Способ прогнозирования течения воспалительного процесса в легких

Способ прогнозирования течения воспалительного процесса в легких

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине ,в частности, к пульмонологии, и может быть использовано для диагностики характера течения воспалительных процессов в легких. Цель - повышение точности прогнозирования заболевания легких за счет выявления характера течения процесса при неспецифических заболеваниях легких. Для этого определяют уровень циркулирующих иммунных комплексов и титр антител к бактериям, вызвавшим воспалительный процесс и выделенным из мокроты или содержимого бронхов больных количественным микробиологическим методом (при содержании в 1 мл мокроты микробных тел более 1<SP POS="POST">.</SP>10<SP POS="POST">6</SP>), и при значении уровня циркулирующих иммунных комплексов от 170,5 до 267,5 усл.ед. и титра антител от 1:40 до 1:150 определяют затяжной осложненный характер течения процесса и иммуноповреждающее действие иммунных комплексов в легочной ткани, при значении уровня циркулирующих иммунных комплексов от 90,4 до 169,6 усл.ед. и титра антител от 1:170 до 1:620 - благоприятное течение воспалительного процесса.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1

„„Я0„„1478123 (5g 4 G 01 N 33/53 // G 01 N 33/49

3,:Е6ИЖМ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н A BTOPCHOIVlY СВИДЕТЕЛЬСТВУ разом.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4218637/28-14 (22) 25.02.87 (46) 07.05.89. Бюл. У 17 (71) Белорусский научно-исследовательский институт туберкулеза (72) А.К.Абрамовская,. С.В.Савельева, Л.К.Суркова и И.В.Коваленко (53) 615.375 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Р 1093325, кл. А 61 В 10/00, 1984. (54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ

ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРОЦЕССА В ЛЕГКИХ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к пульмонологии, и может быть использовано для диагностики характера течения воспалительных процессов в легких. Цель — повышение точности прогнозирования заболевания легких за счет выявления характера течения процесса при неспеИзобретение относится к медицине, в частности к пневмологии, и может быть использовано для диагностики характера течения воспалительных процессов в легких и бронхах и перехода их в затяжное, первично-хроническое, прогрессирующее или осложненное течение на ранних стадиях развития болезни.

Целью изобретения является повышение точности способа за счет выявления характера течения процесса при неспецифических воспалительных заболеваниях легких и бронхов.

Способ осуществляют следующим об цифических заболеваниях легких. Для этого определяют уровень циркулирующих иммунных комплексов и титр антител к бактериям, вызвавшим воспали" тельный процесс и выделенным из мокроты или содержимого бронхов больных количественным микробиологическим методом (при содержании в 1 мл мокроты микробных тел более 1 10 ), и при значении уровня циркулирующих иммунных комплексов от 170,5 до

267,5 усл.ед. и титра антител от

1:40 до 1:150 определяют затяжной осложненный характер течения процесса и иммуноповреждающее действие иммунных комплексов в легочной ткани, при значении уровня циркулирующих иммунных комплексов от 90,4 до

169,6 усл.ед. и титра антител от

1:170 до i:620 — благоприятное течение воспалительного процесса.

Циркулирующие иммунные комплексы Я» (ЦИК) в сыворотке крови определяют по методу Haskova V. в модификации

Гриневич Ю.А., основанному на селективной преципитации комплексов антиген + антитело в 3,75Х-ном полиэтиленгликоле с последующим спектрофотометрическим определением плотности преципитата. Для проведения реакции готовят два раствора ° Раствор

1 — это 0,1 M боратный буфер рН 8,4 и (3,410 r борной кислоты, 4,275 г буры растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до 1 л). Раствор

2 готовят путем растворения 10 r реактива "Полиэтипенгликоль-6000" в

1478123

240 мл раствора 1. Кровь у больных берут из вены в количестве 5 мл, выделяют сыворотку для исследования.

В пробирку вносят О 3 мл сыворотS

5 ки, добавляют 0,6 мл раствора 1, перемешивают и переносят по 0,3 мл в две пробирки. В одну из них добавляют 2,7 мл раствора 1 (контроль), в другую 2,7 мл раствора 2 (опыт). Со- 10 держание пробирок тщательно перемешивают и оставляют на 60 мин при комнатной температуре, после чего определяют оптическую плотность образцов на спектрофотометре СФ-26 в кюветах размером 1 к 1 см при 450 нм.

Высчитывают разность показателей оптической плотности, результат умножают на 1000 и получают количество

ПИК в 100 мл сыворотки крови. Ответ 2р выражают в единицах оптической плотности, Реакцию непрямой иммунофлюоресценции (НИФ) выполняют с аутоштаммом бактериальной инфекции, выделенным 25 путем посева мокроты больного количественным методом с колибровочной петлей. Для этого полученную от больного мокроту разводят 1:2 изотоническим раствором натрия хлора, встряхи- 3р вают, гомогенизируют. Затем петлей размером 8 ° 8 см (0,01 мл) вносят мокроту (1 петлю) в 5 мл 2Е-ной пептонной воды. Получают разведение

1 . 10 .". После готовят второе разведение мокроты: 1 петля уже полученно35 го разведения (1 - 10 ) вносится в

5 мл 27-ной пептонной воды. Получают второе разведение мокроты 2 ° 10

Чашку Петри с 20 -ным кровяным агаром делят на два сектора и производят посев каждого разведения мок роты по О, 1 мл. Чашки Петри помещают в термостат. Предварительный учет ре— зультатов производят через 24 ч, 45 окончательный результат получают через 72 ч. Идентификацию выделенного материала проводят с учетом культуральных и морфологических свойств.

Для подсчета количества микробов в 1 мл мокроты количество микробных

5Р колоний в секторе с разведением мокроты ? 10- делят на 2 и умножаI ют на 10.

Если роста в секторе с разведением мокроты 2 10 нет, то учитывают первый сектор с разведением 1 ° 10 .

Для этого количество колоний умножают на 10.

Результат выражают в количестве микробных тел выделенного возбудителя в 1 мл мокроты (например, 8 ° 104 микробных тел в 1 мл мокроты или

3 " 10 микробных тел в 1 мл мокроты).

Бактериальную культуру, полученную при посеве мокроты больного, используют для постановки реакций непрямой иммунофлюоресценции в качестве аутоштамма. Постановку реакции проводят по общепринятой методике. На тщательно обезжиренных предметных стеклах петлей готовят мазки выделенных бактериальных культур (6 стекол). После подсушивания на воздухе мазки фиксируют над пламенем или в метаноле (на 10 мин погружают в стакан), Сыворотку обследуемого больного разводят физиологическим раствором от 1:20 до 1:640 (в разведении). Затем каждое разведение сыворотки наслаивают на приготовленные предметные стекла с мазками бактериальных культур и помещают стекла на 3040 мин в термостат. Диагностическую люминесцентную кроличью сыворотку против иммуноглобулинов человека разводят в указанном на этикетке ампулы объеме дистиллированной воды (1:32). Предметные стекла вынимают из термостата и промывают водопроводной водой (2-5 мин). Люминесцентную сыворотку наслаивают на промытый препарат и выдерживают при комнатной температуре 15-20 мин. Затем мазки тщательно промывают водопроводной водой (по 10 мин каждый), подсушивают на воздухе и просматривают под люминесцентным микроскопом.

Результаты оценивают по интенсивности свечения (люминесценции) по периферии микробной клетки в различных разведениях исследуемой сыворотки и выражают в титрах антител. За титр антител у данного больного принимают то наибольшее разведение сыворотки, при котором еще регистрируется свечение периферии клеток, Специфичность реакции контролируют путем нанесения люминесцентной сыворотки непосредственно на мазок микроорганизмов — антигенные препараты, подлежащие исследованию. В этом случае свечение всегда отсутствует.

Предлагаемый способ диагностики характера течения неспецифичных воспалительных заболеваний легких апробирован в клинике БелНИИ туберкулеза

1478123 на 40 больных, из них 28 мужчин и

12 женщин в возрасте от 25 до 55 лет.

Больные были распределены по клиническим формам заболевания органов дыхания: больные острой пневмонией—

10 человек, хроническим бронхитом—

13 человек, хронической пневмонией—

7 человек, абсцессами легких — 7 человек, бронхоэктомической болезнью—

3 человека.

Всем больным проводилось комплексное клинико-лабораторное обследование в начале и в процессе лечения с обязательным исследованием содержа- ния циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови и титра специфических антител к бактериям, вызвавшим развитие воспалительного процесса в легких и .бронхах и выделенным из мокроты или содержимого бронхов больных.

Для установления диагностического уровня ЦИК в крови были исследованы сыворотки 30 здоровых лиц. (контроль- 25 ная группа). В этой группе уровень

ЦИК составил 91,0+3,6 усл.ед. Это позволило установить диагностический титр ЦИК (M + 2 6, где б — стандартное отклонение), выше которого (128 усл.ед.) результаты расценивались как положительные.

3а диагностическое значение титра антител в реакции непрямой иммунофлюоресценции с аутоштаммом бактерий были приняты следующие показатели: для пневмококка 1:40 и выше, для остальных возбудителей 1:20 и выше.

Анализ содержания ЦИК и титров антител к выделенной у больных бактериальной аутоинфекции в сыворотке ,крови производили с учетом результатов ретроспективной оценки характера течения воспалительного процесса в бронхолегочной системе. Это позволило выделить две подгруппы больных по характеру течения заболевания.

Первую подгруппу (20 человек) составили больные, у которых в течение

2-3 недель проводимого комплексного 50 лечения наступало клиническое выздоровление или стойкая ремиссия болезни с дезинтоксикацией организма (отмечалась нормализация общего состояния больного, показателей анализов 55 крови, физикальных данных) и рассасыванием воспалительных изменений в легких и бронхах, подтверждаемое рентгенологическими методами исследования и динамическим наблюдением.

Вторую подгруппу (20 .человек) составили больные с затяжным, прогрессирующим или осложненным течением воспалительного процесса, с тенденцией к переходу острого заболевания в первично-хроническую фазу его развития. У больных второй подгруппы в течение первых трех недель комплексного лечения наступало только частичное улучшение общего состояния (исчезновение некоторых клинических проявлений болезни) с длительным сохранением патологических изменений в бронхолегочной системе, выявляемых физикальными, лабораторными и рентгенологическими методами исследования и результатами динамического наблюдения, Клинико-лабораторные исследования наблюдаемых больных производили в начале и в процессе лечения (через

2-3 недели).

Результаты иммунологических исследований показали, что содержание

ЦИК в сыворотке крови и титры антител к аутоштаммам выявленной бактериальной инфекции в начале и ь процессе лечения достоверно различны у больных указанных двух подгрупп и зависят от характера течения заболевания.

У больных первой подгруппы (с благоприятным течением-процесса клиническим выздоровлением или развитием стойкой ремиссии) в начале лечения определялось умеренно повышенное содержание ЦИК от 90,4 до

169,6 усл.ед. (у 85Х больных) и высокие титры антител в сыворотке крови от 1:170 до 1:620 в сравнении с контрольной группой, и средний уровень их составил соответственно

135, О+3, 1 усл.ед, и 5, 76+0, 15 (при перечислении титров антител в 1n).

В процессе лечения уровень ЦИК в сыворотке крови больных этой подгруппы снизился до нормы и составлял в среднем 99,0+4,7 усл.ед.

У больных второй подгруппы (с затяжным, прогрессирующим или осложненным течением) содержание ЦИК в сыворотке крови в начале лечения было в 1,7 раза выше, чем у больных первой подгруппы, зарегистрировано повышенным у 957 больных от 107,5 до

267,5 усл.ед. и средний уровень их

1 478123 составил 219,0+11,4 усл.ед. (P (0Ä001), тогда как уровень антител в крови был заметно снижен от 1:40 до 1:150 в сравнении с первой под5 группои больных и в среднем составил

4,38+0,13 Ln (Р 0,001).

В процессе лечения у больных этой подгруппы уровень ЦИК продолжал оставаться высоким и составил в среднем

180,5+10,5 усл.ед., являясь неблагоприятным прогностическим показателем.

В результате статистической обработки имевшихся данных были получены пограничные значения показателей ЦИК 15 и титров антител, характеризующих переход болезни в затяжное, прогрессирующие и осложеннное течение.

Для показателей ЦИК пограничные значения были получены: для больных 20 первой подгруппы И, = Г1 — с, М < =

= И +;-, т.е. М, = 135,0 + 34,6

90,4 усл.ед., M q = 135,0 + 34,6 =

169,6 усл.ед., для больных второй подгруппы М, = М вЂ”, И, = М + b, 25 т.е. M, = 219,0 — 48,5 = 170,5 усл.ед.

И = 219,0 + 48,5 = 267,5 усл.ед.

Для показателей титров антител в реакции НИФ пограничные значения были получены: для больных первой под- 30 группы М, = М вЂ” о, И = М +(., т.е.

М, = 5,76 — 0,62 = 5,14, М 2 = 5,76 +

+ 0,62 = 6,38 (в титрах антител М, — 1:170, N g = 1:620), для больных второй подгруппы М = М вЂ” Ь М

= И+а, т,е, М„= 4,38 — 0,60 = — 3,76, N = 4,38 + 0,60 = 4,98 (в титрах антител М, = 1:40, М = — 1: 150) .

При сравнении ЦИК и титра бактери- 40 альных специфических антител в сыворотках крови наблюдаемых больных была замечена их обратная корреляционная связь, рассчитан коэффициент корреляции (r = -0,91, P „- О, 001), что оценивается как сильная корреляцион45 ная связь.

Таким образом, неблагоприятным прогностическим признаком течения неспецифического воспалительного иро- 50 цесса в бронхолегочной системе является высокое содержание уровня ЦИК и низкие титры антител к аутоштаммам бактериальной инфекции, определяемым в сыворотке крови больных в начале заболевания. При таком соотношении указанных иммунологических показателей в сыворотке больного накапливается в избытке антиген, который не

/ может быть элиминирован из организма больного в силу дефектного иммунного ответа организма больного (об это свидетельстнуют низкие титры антител к аутоштамму бактериальной инфекции) .

Избыточное содержание антигена в сыворотке больного вызывает образование малых (менее 15S) и промежуточных (15S-19S) ЦИК, которые длительно циркулируют в кровотоке больных, плохо элиминируются и откладываются в органах-мишенях (в частности, в легких и бронхах), оказывая иммуноповреждающее действие в тканях органов, тем самым еще более усугубляя течение воспалительного процесса.

Патогенность высокого уровня ЦИК в сыворотке крови больных неспецифическими воспалительными заболеваниями легких при одновременно низких титрах специфических антител в сыворотке крови была подтверждена морфологическими исследованиями. У 11 больбольных с прогрессирующим течением воспалительного процесса во время оперативного вмешательства брали биоптаты легких и бронхов для исследования. На биопсийном материале проводили гистологические и иммуноМ морфологические исследования. На серийных криостатных срезах легких применяли прямой и непрямой варианты иммунофлюоресцентного метода Кунса с моноспецифическими антисыворотками против иммуноглобулинов человека класса А, I, С, M и С -фракции комплемента и метод гетерологического комплемента по Гольвассеру-Шепарду (с постановкой контрольных реакций) для выявления фиксирующих иммунных комплексов (ФИК) в тканях. Полученные данные сопоставлены с морфологическими исследованиями.

Был обнаружен высокий уровень

ФИК в легочной ткани у больных с неспецифическими заболеваниями легких и установлена связь между распространенным (зона патологического процесса и вне ее) иммунокомплексным повреждением и прогрессированием воспалительного процесса в легких.

Пример 1. Больной Д., 36 лет поступил в клинику института с диагнозом: очаговая пневмония в нижней доле правого легкого. При поступлении общее состояние средней тяжести. На рентгенограмме органов грудной клетки в нижней доле правого

1478123

10 легкого определялись очаговоподобные инфильтративные тени. Иэ мокроты больного выделен пневмококк (8 10 микробных тел в 1 мл мокроты). В сыворотке крови больного титр антител 5 к выделенному пневмококку составил

1:640 (1n 6,5), ЦИК 138 усл.ед. В процессе лечения (через 3 недели) содержание ЦИК снизилось до нормы (90 усл.ед.). .06mee состояние больно- 10 го нормализовалось. При аускультациы в легких определялось везикулярное дыхание, хрипы не прослушивались.

Анализ крови: C03 — 12 мм/ч, количество лейкоцитов — 7, 2 ° 10 9 /л, э — 4X., п — 27., с — 627., лимф.

287, мон. — 4Ж. Рентгенологически инфильтративные изменения B легких рассосались. Наступило клиническое выздоровление больного в относительно короткий период времени.

О благоприятном течении острой пневмонии свидетельствовали иммунологические исследования — умеренное

25 увеличение ЦИК и высокий уровень антител в сыворотке крови больного определялись в начале лечения.

Пример 2. Больной Л., 38 лет поступил в клинику института с диагнозом: острая очаговая пневмония в нижней доле слева. При поступлении общее состояние средней тяжести. На рентгенограмме органов грудной клетки слева в прикорневой зоне легочный рисунок усилен, определя- 35 ется инфильтрация легочной ткани. Из мокроты больного выделен гемолитический стрептококк (12 . 10 микробных тел в 1 мл мокроты). В сыворотке крови больного титр антител к вьделенно- 40 му стрептококку составил 1:80 (1п 4,4), ЦИК 180,0 усл.ед.

В процессе лечения (череэ 3 недели) содержание ЦИК увеличилось до

190 усл.ед. Признаки общей интокси- 45 кации организма больного уменьшились, нормализовалась температура, однако по-прежнему беспокоила общая слабость, кашель с ньделением мокроты, При аускультапии определялось жесткое дыхание. Рентгенологически в легких выявлялось некоторое рассасывание инфильтративных изменений, попрежнему сохранялись перибронхиальные и периваскулярные инфильтративные 55 изменения н прикорневой зоне левого легкого.

В данном случж. имело место затяжное течение воспалительного процесса в легких с выраженной тенденцией к его первично-хроническому течению. 0 затяжном течении воспалительного процесса в легких можно было су- дить по высокому содержанию в сыворотке крови больного ЦИК и низкому уровню специфических антител, определяемым в начале развития заболевания.

Пример 3. Больная Д., 28 лет (история болезни Р 912) поступила в клинику института с диагнозом: хронический бронхит в фазе обострения. На рентгенограмме органов грудной клетки легочные поля без видимых очаговых теней, усилен легочный рисунок в нижних отделах обоих легких. Из мокроты больной вьделен зеленящий стрептококк (15 " 10 микробных тел в 1 мл мокроты). В сыворотке крови титр антител к вьделенной культуре составил 1:320 (1n 5,3), ЦИК 150 0 усл.ед. B процессе лечения (через 20 дней) содержание ЦИК снизилось до 115 усл.ед, Общее состояние больной нормализовалось, исчезли все жалобы. Фиэикально в легких перестали прослушиваться хрипы. Показатели общего анализа крови нормализовались. Рентгенологические исследования патологию в легких не выявили. В данном случае обострение хронического бронхита было купировано в течение 20 дней. Бопьная выписана под наблюдение участкового терапевта в удовлетворительном состоянии. В течение года обострения хронического бронхита на наблюдалось, следовательно, после лечения наступила стойкая ремиссия заболевания. Благоприятный прогноз течения болезни был установлен в начале лечения (умеренное увеличение 11ИК в сыворотке крови больной и высокий титр антител к выделенному из мокроты больного стрептококку).

Пример 4. Больная Н., 34 года. Поступила в клинику института по поводу хронического гнойного бронхита в фазе обостроения. Больна хроническим бронхитом около 10 лет.

Последние 5 лет отмечала частые и затяжные обострения (2-4 раза в году).

При поступлении общее состояние средней тяжести. На рентгенограмме органов грудной клетки: в обоих легких избыточен легочный рисунок, в правом легком перпбронхиальпая инфильтрация, левый корень расширен, 12

1478123 течения неспецифических воспалительных болезней органов дыхания в начале лечения и перехода острого процесса в хроническую фазу заболевания, хронического процесса — в прогрессирующую и осложненную фазу болезни в 95Х случаев.

Способ прост, удобен, нетрудоемок и точен, для своего проведения не требует больших затрат рабочего времени и может быть внедрен в работу практического лечебно-профилактического учреждения любого уровня.

Формула изобретения

Составитель Г.Крюкова

Техред Л.Олийнык Корректор С.Черни

Редактор С.Пекарь

Заказ 2357/44 Тираж 790 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Ужгород, ул. Гагарина, 101

Из мокроты больной выделен пневмококк (10 " 10 микробных тел в 1 мл мокроты) и р-гемолитический стрептококк (14 ° 10 микробных тел в 1 мл мокроты). В сыворотке крови титр антител к пневмококку составил 1:80, к стрептококку 1:40, содержание ЦИК

220,0 усл.ед. В процессе лечения (череэ 4 недели) содержание ПИК возросло до 276,0 усл.ед. Общее состояние больной улучшилось, однако рентгенологически в нижней доле легкого сохранялись перибронхиальные и периваскулярные воспалительные изменения. 15

На бронхограмме в этой зоне легкого определялись бронхоэктаэы. Через

1,5 мес консервативного лечения произведено оперативное вмешательство (частичная резекция нижней доли левого легкого). Послеоперационный период протекал без осложнений. В ткани удаленного легкого обнаружены фиксированные иммунные комплексы, что подтвердило иммунопатологическое действие иммунных комплексов на . ткань легких. Через 3 недели после оперативного вмешательства больная выписана иэ клиники в удовлетворительном состоянии без признаков интоксикации.

В данном случае проводимое консервативное лечение в течение первых

2 мес было неэффективным. Течение заболевания оказалось прогрессирующее и осложненное (раэвились бронхоэктазы).

Таким образом, предлагаемьггг способ дает возможность повысить точность диагностики прогноза характера

Способ прогнозирования течения воспалительного процесса в легких путем исследования крови, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности прогнозирования за счет выявления характера течения процесса при неспецифических воспалительных заболеваниях легких и бронхов, в исследуемой крови определяют уровень циркулирующих иммунных комплексов и титры антител к бактериям, выделенным из мокроты больного, и при уровне циркулирующих иммунных комплексов от 170,5 до 264,5 ед. оптической плотности и титре антител от 1:40 до 1: 150 прогнозируют затяжной осложеннный характер течения заболевания, а при уровне иммунных компкомплексов от 90,4 до 169,6 ед. оптической плотности и титре антител

1:170 до 1:620 — благоприятное течение воспалительного. процесса.