Способ получения афинного сорбента

Способ получения афинного сорбента

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к препаративной биохимии и биотехнологии и касается получения аффинных сорбентов для очистки ферментов. Изобретение может быть также использовано в медицине для гемосорбции. Цль изобретения - повышение биоселективности аффинного сорбента. Для этого гепарин присоединяют к карбоксилсодержащим матрицам с помощью водорастворимого карбодиимида при массовом соотношении матрицы и гепарина от 300:1 до 30:1 и PH 4,5-6,0. 1 ТАБЛ.

,.y Ф, ф

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

„„Я0„„1479511

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЬПИЯМ

ПРИ ГННТ СССР (21) 4265872/28-13 (22) 22.06.87 (46) 15 .05 .89 . Бюл . Р 18 (71) Институт элементоорганических соединений им. А.Н.Несмеянова, Научно-прочзнодственное объединение "Биолар" и Институт химической и биологической физики АН ЭССР (72) В.П.Варламов, И.А.Андрюшина, С.В.Рогожин, Э.А.Аренс, Х.Э.Арукаэву-, М.Э.Хага и А.А.Аавиксаар (53) 577.15(088,8) (56) Application of immobilized Heparins for Тзо1ation of Нцтпап. Antithrombin III. — Biotechnology and

Bioengineering. 1986, v. 28, N 8, р. 217-222.

Патент С1ЧА Р 4576928, кл. В 01 J 20/22, 1986.

Изобретение относится к биотехнологии и касается получения аффинных сорбентов, содержащих в качестве лиганда гепарин, для хроматографической очистки ферментов.

Цель изобретения — повышение биоселектинности аффинного сорбента.

Способ основан на том, что осуществляют действие карбоксилсодержащего носителя с гепарином в водной среде в присутствии водорастворимого карбодиимида при рН 4,5-6,0. При взаимодействии гепарина с сорбентом участвуют аминогруппы частично десульфированного гепарина или аминогруппы следовых количеств белка, прочно связанного с гепарином. Нельзя исключить (д1) 4 С 12 N 9/00, В 01 J 20/22 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АФФИШ1ОГО СОРБЕНТА (57) Изобретение относится к препаративной биохимии и биотехнологии и касается получения аффинных сорбентов для очистки ферментов, Изобретение может быть также использовано н медицине для гемосорбции. Цель изобретения — повышение биоселективности аффинного сорбента. Для этого гепарин присоединяют к карбоксилсодержащим матрицам с помощью водорастноримого карбодиимида при массоном соотношении матрицы и гепарина от 300:i до 30: t и рН 4,5-6,0. 1 табл. и взаимодействие за счет первичных гидроксильных групп, Таким образом, данный способ не связан с модификацией карбоксильных групп гепарина, получаемые сорб енты обладают большим отрицательным зарядом, что оказывает влияние на силу электрического взаимодействия °

Пример l, 3 r СН-агарозы оставляют набухать в дистиллированной воде на 2 ч, трижды меняя воду. Суспензируют отмытую и набухшую агарозу в 20 мл водь., в которой растворено 100 мг гепарина и добавляют 100 мг

N-этил-N -(3-диметиламинопропил)-кар1 бодиимида. В течение 30 мин поддерживают на рН вЂ” метре рН 4,5, а затем

1479511

Удел ьн ая Удел ьн ая

Степень активность активность очистки сырья продукта ед.акт./мг ед.акт./мг

Опыт

Сорбент

Выход конц. гепарина мг/г сорбента

74

74

74

74

74

74

32 80

25 77

25 72

26 76

23 ° 74

2,8 64

1,8 75

211

118

1 CH-агар-геп

2 сил.COOH-геп

3 сил.COOH-геп

4 сил.СООН-геп 5 сил.акрил-геп

6 . AH-агар-геп

7 BrCN-агар-геп

20

15 реакционную массу перемешивают 16 ч, Полученный сорбент промывают на пористом фильтре 1Г1 NaC1 (200 мл), 0,1 I I Иа ICOg (200 мл) и водой (300 мл).

Концентрация гепарина в полученном сорбенте 8 мг/мп.

Пример 2. Способ осуществляют аналогично примеру 1, но в качестве карбоксилсодержашего сорбента используют карбоксилированный силохром С-80. Концентрация гепарина в полученном сорбенте 50 мг/г.

Пример 3. Способ осуществляют аналогично примеру 1, но гепарин берут в количестве 10 мг, а в качестве конденсирующего агента используют N-циклогексил-N -2-(4-метилморфолин)-этилкарбодиимид в количестве

10 мг. 20

Концентрация гепарина в полученном сорбенте 1 мг/мл.

Пример 4, Способ осуществляют аналогично примеру 1, но берут 50 мг гепарина, 50 мг N-этил-N --(3-диметиламинопропил) -карбодиимида и конденсацию ведут при рН 6,0. Концентрация гепарина в полученном сорбенте

5 мг/мл.

Пример 5. Способ осуществля- 30 ют аналогично примеру 1, но реакцию ведут в 0,1 Г13С буфере при рН 5,0.

Концентрация гепарина в полученном сорбенте 6 мг/мл.

Пример 6. Способ осуществляют аналогично примеру 1, но в качестве карбоксилсодержящего сорбента используют полиакриловую кислоту, радиационно привитую к силохрому. Концентрация гепарина в полученном сорбенте 25 мг/мл.

Полученные сорбенты обладают биоселективностью, отличной от биоселективности сорбентов, получаемых присо" единением гепарина к AH-агарозе и

BrCN-агароэе, что подтверждается данными хроматографической очистки фермента (плацентарной фосфатазы) на синтезированных сорбентах (см. табл.).

Изобретение позволяет получать гепаринсодержащие сорбенты на карбоксилсодержащих носителях различного типа (агароза, силохром, полиакрилсилохром).

Концентрацию стационарного лиганда можно варьировать от 1 до 50 мг на

1 г сорбента, что позволяет синтезировать сорбенты с требуемой концентрацией в зависимости от решаемой задачи. Методика синтеза исключает использование токсичных соединений и проводится в водной среде.

Формула изобретения

Способ получения аффинного сорбента путем взаимодействия гепарина с водонерастворимым носителем в присутствии водорастворимого карбодиимида при рН 4,5-6,0, о т л и ч а ю щ и й— с я тем, что, с целью повышения биоселективности сорбента, используют носитель, содержащий карбоксильные группы, и процесс ведут при массовом соотношении носитель — гепарин

300: 1-30: 1.