Способ определения эринита, нитросорбида и продуктов их биотрансформации в крови

Способ определения эринита, нитросорбида и продуктов их биотрансформации в крови

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение может быть использовано в медицине для исследования фармакокинетики эринита и нитросорбида в организме. Для этого используют способ высокоэффективной жидкостной хроматографии на колонке SPHERISORB 5 *98M с подвижной фазой метанолфосфатный буфер при соотношении 40:60, а детектирование проводят по оптической плотности при λ=200 нм. Способ позволяет определять эринит и два продукта его биотрансформации и нитросорбид и три его метаболита. 2 ил.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)4 А 61 К 31/21

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕ1ЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4156627/28-14 (22) 01 ° 12.86 (46) 23.05.89. Бюл. !! -19 (71) Научно-исследовательский институт экспериментальной и клинической терапии (72) Ш.А.Топчиева, Б.И.Чумбуридзе и Т.Б.Чумбуридзе (53) 612.0 15 (088.8) (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭРИНИТА, НИТРОСОРБИДА И ПРОДУКТОВ ИХ БИОТРАНСФОРИАЦИИ В КРОВИ!

Изобретение относится к медицине, в частности к способам определения эринита, нитросорбида и продуктов их биотрансформации в крови человека для фармакокинетических исследований больных ишемической. болезнью сердца.

Цель изобретения — разработка способа определения эринита, нитросорбида и продуктов их биотрансформации в крови.

На фиг.1 изображена высокоэффективная жидкостная хроматограмма эринита и продуктов его биотрансформации в крови больного; на фиг.2 — высокоэффективная жидкостная хроматограмма нитросорбида и продуктов его биотрансформации в сыворотке крови больного.

Способ осуществляется следующим образом.

Биологическую жидкость (кровь больного) обрабатывают буферным раствором тетрабората натрия с рН 9,18,, (57) Изобретение может быть использовано в медицине для исследования фармакокинетики зринита и нитросорбида в организме. Для этого испо,ь-. зуют способ высокоэффективной жидкостной хроматографии на колонке

Spherisorb 5р с подвижной фазой метанолфосфатный буфер при соотношении 40;60„ а детектирование проводят по оптической плотности при

200 нм, Способ позволяет определять эринит и два продукта его биотрансформации и нитросорбид и три его метаболита. 2 ил. i габл. экстрагируют хлороформом с последующей обработкой хлороформного слоя

0,01 н. раствором хлористоводородной кислоты, хлороформный слой обезвоживают сульфатом натрия и упаривают досуха, после чего сухой остаток растворяют в смеси метанол — 0,01 н. раствор хлористоводородной кислоты

25:75 с последующим определением исследуемого лекарственного вещества и продуктов их биотрансформации на . высокоэффективном жидкостном хроматографе.

Определение сложных эфиров азотной кислоты проводят на высокоэффективном жидкостчом хроматографе

Altex-320 (США), колонка Spherisorb

5 р длина колонки 25 см, диаметр

4,6 мм, заполненной обратнофазным нитрильным сорбентом с применением

УФ-детектора при =200 нм, скорость элюирования 1 мм/мин, чувствительность 0,02 °, 1480819

В качестве подвижной фазы используют смесь метанол: фосфатный буфер

40:60.

Для количественного анализа препаратов нитрогруппы готовят растворы

5 исследуемых препаратов в. смеси метанол-0,1 И фосфатный буфер 40:60, содержащие в объеме 50 мкл 5, 10, 15, 25, 100, 200 нг лекарственного вещества. Исследуемые растворы вводят микрошприцем в хроматограф. Площади пиков на хроматограмме вычисляют пу.тем умножения высоты пика на ширину на середине высоты. На основе полученных данных строят калибровочный график, выражающий прямо пропорциональную зависимость между величиной площади пика препарата на хроматограммах от количества введенного вещества. Иинимально детектируемое количество эринита, нитросорбида и изосорбид-5-мононитрата 5 нг.

Приготовление растворов стандартных образцов эринита, нитросорбида.

0,0100 г чистой субстанции помещают в мерную колбу емкостью 100 мл, добавляют 40 мл метанола, смешивают

3 мин (эринит на кипящей водяной бане) до растворения и доводят 0,1 М фосфатным буфером до метки (раствор А).

i0 0 мл раствора А(0„01Х) помещают в мерную колбу емкостью 100 мл и доводят объем до метки смесью растворителей метанолфосфатный буфер

40:60 (раствор Б-0,001 }.

Приготовление О, 1 М фосфатного буфера. 11,5 г чистой субстанции аммония фосфорнокислого однозамещенного помещают в мерную колбу емкостью 1 л, прибавляют 400 мл бидистиллята, смешивают 3 мин и доводят объем раствора бидистиллятом до метки, размешивают смесь на магнитной мешалке 10 мин.

Приготовление буферного раствора с рН 9,18 из стандарт-титра (натрий тетраборнокислый Na

Приготовление подвижной фазы (ме- 55 танол-фосфатный буфер 40:60}. В мерную колбу емкостью 200 мл помещают

80 мл метанола и доводят объем раствора до метки 0,1 М фосфатным буфером, смесь дегазируют в течение 510 мин. Относительная ошибка определения лекарственных веществ не превышает +3,07Х.

Полнота экстракции из сыворотки крови лекарственного вещества 98,38 +

0,62Х. Ошибка определения эринита, нитросорбида методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в биологических жидкостях, вносимая в результаты при хроматографическом анализе и вычислении площади, под пиком не превышает 1,62Х+0,62 .

Определение и расчет концентрации лекарственного вещества проводят по формуле а Ъ ° 1000

С / 1 где С вЂ” концентрация лекарственного вещества, нг/мл сыворотки; а — найденное количество вещества в объеме 50 мкл;

Ъ вЂ” разведение;

V — объем сыворотки, мкл.

Методом ВЭЖХ в крови больных оп ределены эринит и два продукта его биотрансформации с временем удерживания 5 мин, 7,2 мин (фиг. 1 б.r), нитросорбид и три метаболита с временем удерживания 5,6 мин, 6,4 мин, 7,4 мин (фиг.2. е.ж.и), Предлагаемый способ дает возможность определить нитросорбид и эринит в крови человека, обеспечивает одновременное определение эринита, нитросорбида и продуктов их биотрансформации. Для определения достаточен объем крови 0,1-1,0 мл, затрата времени на обработку крови и. определение данным способом не превышает

1,5 ч, относительная ошибка определения +3,72Х.

Способ поясняется хроматограммами эринита и нитросорбида после экстракции из крови человека (фиг.1 и 2) и таблицей с метрологическими характеристиками способа.

Формула и з обретения

Способ определения эринита, нитросорбида и продуктов их биотрансформации в крови, включающий добавление буфера рН 9,18 к сыворотке крови при их объемном соотношении 2:1, экс т акцию хлороформом при соотношении

5 1480819 хлороформ: сыворотка: осаждение бел-- кой, Spherisorb 5p, заполненной обков смеси 0,01N НС1, обезвоживания ратнофазным нитрильным сорбентом, и упаривания смеси, растворение полу- при этом в качестве подвижной фазы ченного осадка в смеси метанол— используют смесь метанол-фосфатный

0,01 NH Cl при их соотношении

5 буфер 40:60 с последуюдей регистра25:75, введение подготовленной про- цней оптической плотности при дч не бы В жидкостной хрОматограф с колон- ВОлны Л 200 нм.

Найдено, нг

Бх

Внесено, кг

Препарат

Эринит

5 0

50,0

200,0

Нитросор- 5 0 бид

50,0

200,0

4,9

4,8

4,8

4,95

4,85

49,3

49,7

49,65

49,0

49,7

199,0

198,0

198,5

199,5

198,0

4,9

4,8

4,9

4,9

4,85

49,3

49,0

49,3

48,0

48,5

199,0

199,0

198 0

199,5

f98,9

4,86 0,0652 1,3413 О, 1809 3, 72

49,47 03114 0,6295 0,8644 i 75

198,4 0„6892 0,3473 1,9132 0,96

4,87 0,0447 0,9183 0,1241 2,55

48,82 0,5630 1, 1532 1,5628 3,20

199,06 0,5809 0,2918 1,1625 0,81

1480819

Редактор С.Патрушева

Корректор С,Черни

Заказ 2604/3 Тираж 644 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, R-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул. Гагарина, 101

О 2 9 6 д 10

Д/Г $

Составитель В.Митюшин

Техред М,Дидык

О 2 Ф 6 g 10 фиг. 2