Способ определения мембранных нарушений эритроцитов при атеросклерозе

Способ определения мембранных нарушений эритроцитов при атеросклерозе

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к кардиологии. Целью изобретения является повышение точности способа. Для этого венозную кровь с антикоагулянтом разводят физиологическим раствором, полученную суспензию наносят на стекловолокнистый фильтр, расположенный в термостатируемой при 37° ячейке, отсасывают водоструйным насосом и однократно промывают физиологическим раствором. После этого на фильтр с промытыми эритроцитами поочередно наливают порцию физиологического раствора с дигитонином возрастающей концентрации от 0 до 5 мкмоль с шагом 0,5 мкмоль, отсасывая каждую порцию гемолизата в отдельную пробирку. Содержимое пробирок фотометрируют при 410 нм на спектрофотометре. По данным фотометрирования строят для каждой порции зависимость количества вышедшего из эритроцитов гемоглобина от концентрации дигитонина в этой порции. За критерий, характеризующий распределение эритроцитов по устойчивости к дигитонину, принимают отношение оптической плотности при концентрации дигитонина 3 мкмоль к оптической плотности в максимуме распределения. При значении критерия, превышающем величину 0,43, определяют мембранные нарушения эритроцитов при атеросклерозе. Изобретение позволяет добиться более высокой специфичности и точности (в 4,4 раза) определения мембранных нарушений при атеросклерозе. 1 ил., 2 табл.

СОЮЗ С08ЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) ОПИСАНИЕ ИЗ(:)БРЕТЕЯИЯ

К А ВТОРСКОМЪГ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕНКЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ 01НТ СССР (21 ) 3954440/28-14 (22) 26.04.85 (46) 23.05.89. Бюл. Р 19 (71) Институт фотобиологии АН БССР и Белорусский институт усовершенствования врачей (72) И;М. Окунь, P.Ä. Адзерихо, С.Л. Аксенцев, С.В. Конев, И.Б. Лившиц, Т.А. Алюшина, M.Н. Романчак и А.Г. Мрочек (53) 616.07(088.8) ,(56) Лопухин Ю.M. Арчаков А.И., Владимиров Ю.А. и др. Холестериноэ.

М.: Медицина, 1983, с. 211 ° (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МЕМБРАННЫХ

НАРУШЕНИИ ЭРИТРОЦИТОВ ПРИ АТЕРОСКЛЕРОЗЕ (57) Изобретение относится к кардиологии. Целью изобретения является по. вышение точности способа. Для этого венозную кровь с антикоагулянтом разводят физиологическим раствором, полученную суспензию наносят на стекловолокнистый фильтр, расположенный в о термостатируемой при 37 С ячейке, отсасывают водоструйным насосом и однократно промывают физиологическим

Изобретение относится к медицине, в частности к кардиологии, и может быть использовано для определения мембранных нарушений эритроцитов при атеросклерозе.

Цель изобретения — повышение точности способа за счет проведения последовательной фильтрации крови через мелкопористый фильтр с нарастающими (5ц 4 Г 01 N 33/48 // G Oi N 33/49 раствором. После этого на фильтр с промытыми эритроцитами поочередно наг ливают порцию физиологического раствора с дигитонином возрастающей концентрации от 0 до 5 мкмоль с шагом

0,5 мкмоль, отсасывая каждую порцию гемолизата в отдельную пробирку. Содержимое пробирок фотометрируют при

410 нм на спектрофотометре. По данным фотометрирования строят для каждой порции зависимость количества вышедшего из эритроцитов гемоглобина от концентрации дигитонина в этой порции.

3а критерий, характеризующий распределение эритроцитов по устойчивости к дигитонину, принимают отношение оптической плотности при концентрации дигитонина 3 мкмоль к оптической плотности в максимуме распределения. При значении критерия, превышающем величину 0,43, определяют мембранные нарушения эритроцитов при атеросклерозе, Изобретение позволяет добиться более высокой специфичности и точности (в 4,4 раза) определения мембранных нарушений при атеросклерозе. 1ил.

- 2 табл.

2 до 5 мкмоль концентрациями дигитонина, измерения оптической плотности фильтрата при длине волны 410 нм, определения распределения эритроцитов по устойчивости к дигитонину и расчета диагностического показателя,равного соотношению величин оптической плотности фильтрата, полученных при концентрации дигитонина 3 мкмоль и

1481687 при концентрации дигитонина, вызывающей максимальный гемолиз.

На чертеже показана зависимость оптической плотности фильтрата от концентрации дигитонина.

Способ осуществляют следующим образом.

Венозную кровь с антикоагулянтом разводят физиологическим раствором до клеточной концентрации 0,87, 1 мл полученной суспензии наносят на стекловолокнистый фильтр, расположенный в термостатируемой при 37 С ячейке, отсасывают водоструйным насосом и один раз промывают 4-10 мл физраствора и отсасыванием экстраклеточной жидкости. После этого на фильтр с промытыми эритроцитами поочередно наливают по 4 мл физраствора с дигитонином возрастающей концентрации от

0 до 5 мкмоль (с шагом 0 5 мкмоль/л), инкубируют 30-120 с, отсасывая каждую порцию гемолизата в отдельную пробирку. Содержимое пробирок фотометрируют 25 при 410 нм на спектрофотометре, По данным фотометрирования строят для каждой порции зависимость количества вышедшего из эритроцитов гемоглобина от концентрации дигитонина в этой порции. Эта зависимость отражает кривую распределения эритроцитов по устойчивости к дигитонину (ДУ). За критерий, характеризующий это распределение, принимают отношение оптической плотности при концентрации дигитонина 3 мкмоль/л к оптической плотности в максимуме Распределения (ДУ=Д !Д ма«)

При значении критерия превьш ающем величину 0,43, определяют. мембранные нарушения эритроцитов при атеросклерозе.

Пример 1. Больная К., 55 лет, поступила в кардиологическое отделение с диагнозом: ишемическая болезнь сердца (ИБС) в стадии обострения, атеросклероз коронарных артерий, церебральный атеросклероз.

Определяют критерий распределения эритроцитов по устойчивости к дигитонину.

Для этого 0 1 мл крови разводят физиологическим раствором до 5,25 мл и 1 мл полученной суспензии с концентрацией эритроцитов О,SX наносят на 55 стекловолокнистый фильтр GF/F (Whatman, Англия), пропускающий частицы диаметром меньше 0,4 мкм, Подают на фильтр с помощью водоструйного насоса отрицательное давление и отсасывает экстраклеточную жидкость, На осажденные эритроциты наливают 4 мл предварительно прогретого о при 37 С физраствора с нулевой концентрацией дигитонина, включают разрежение и фильтрат отбирают в пробирку, Эту процедуру повторяют с растворами дигитонина возрастающей концентрации, отбирая каждый фильтрат в отдельную пробирку. Затем содержимое пробирок фотометрируют на спектрофотометре при длине волны 410 нм.

Результаты фотометрирования наносят на график. Затем находят показатель распределения эритроцитов по ДУ.

ДУ = jI> Дмакс О, 0,35 = 0,8 (норма

0,237), доверительная граница 0,43 при уровне значимости 0,05.

Полученный показатель далеко выходит за доверительную границу и в

3 38 раза отличается от нормы. Следовательно, им с большой степенью вероятности выявляют мембранные нарушения эритроцитов у данной больной атеросклерозом.

Пример 2. Больной Д., 63 года, поступил в кардиологическое отделение с диагнозом: ИБС, атеросклероз коронарных сосудов и аорты.

Расчет показателя ДУ дает следующую величину: ЛУ = Д /Д„ „,= 0,22/

/0,42=0,52 (норма 0,237, доверительная граница 0,43).

Полученный показатель в 2,19 раза превышает норму и выходит за доверительную границу и, следовательно, с большей достоверностью позволяет определить мембранные нарушения эритроцитов данного больного атеросклерозом.

Пример 3. Больной M. 64 года, поступил в клинику с выраженными болями за грудиной. Поставлен предварительный диагноз: ИБС, стенокардия напряжения, ФКШ, атеросклероз коронарных артерий.

Расчет показателя дигитонинустойчивости„дает следующую величину ДУ =

Л /Дмакс = Оь344/0 80 = 0 43 (норма

0,237, доверительная граница 0,43), Полученный показатель в 1,79 раз превышает норму и не отличается от значения доверительной границы. Следовательно, вероятность правильного вывода о наличии мембранных нарушений эритроцитов составляет 95Х.

Дополнительные инструментальные методы обследования позволили установить у больного диагноз атеросклероза коронарных артерий.

Пример 4. Больной В., 34 года, поступил в кардиологическое отделение с диагнозом: нейроциркуляторная дистония.

Расчет показателя ДУ дает следующую величину: ДУ = Л /Дм „о= 0,30/

/0,85 = 0,255 (норма 0,237, доверительная граница 0,43).

Полученный показатель в 1,07 раза превышает норму, но не выходит за

15 пределы доверительной границы, что свидетельствует об отсутствии какихлибо мембранных нарушений эритроцитов у данного больного.

В табл. 1 приведены статистические данные критерия устойчивости эритроцитов к ДУ для двух групп лиц. В одну группу входят практически здоровые люди, в другую — пациенты с клиническим диагнозом: ИБС, атеросклероз аорты и коронарных сосудов.

148 1687

Из табл. 1 следует, что доверительные интервалы для обеих исследованных групп с вероятностью 997 не перекрываются между собой, т.е. пред- 30 ложенный способ позволяет надежно определять мембранные нарушения эритроцитов больных атеросклерозом.

Поскольку вывод о таких нарушениях делают на основании сравнения крите35 рия ДУ, полученного для инцивидуального пациента со средним значейием критерия ДУ, характерным для нормы, то доверительная граница для нормы определяется с учетом односторонней оценки по формуле

Формула изобретения

Способ определения мембранных нарушений эритроцитов при атеросклерозе пу- тем определения структурного состояния мембран эритроцитов, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повыше-, ния точности способа, проводят последовательную фильтрацию крови через мелкопористый фильтр с нарастающими до 5 мкмоль концентрациями дигитонина, измеряют оптическую плотность фильтрата при длине волны 4 10 нм, 45 определяют распределение эритроцитов по устойчивости к дигитонину, затем рассчитывают соотношение величин оптической плотности фильтрата, полученных при концентрации дигитонина

50 3 мкмоль и при концентрации дигитонина, вызывающей максимальный гемолиз, и при значении его 0,43 и более определяют мембранные нарушения эритроцитов при атеросклерозе, Дуио — х о н 6 рм

rpe ДУ нор м о я доверительная граница значений критерия ДУ, соответствующих норме; нормированное отклонение при односторонней оценке (tofu = t при удвоенном значении уровня значимости); среднеквадратическое отклонение; х — средцее значение критерия

ДУ.для выборки практически здоровых людей

Подставив значения x, оо„ (при уровне значимости 0,05) и (з, взятые из табл. 1 для группы практически здоровых лиц, получ;ют ДУ„ 60,237+

+ 1,64 + 0,115 = 0,43.

Таким образом, получив значение критерия ДУ устойчивости эритроцитов к дигитонину, превышающее величину

0,43 с вероятностью 957., определяют мембранные нарушения эритроцитов при атеросклерозе.

В табл. 2 представлены данные о специфичности предложенного способа в сравнении с известным при выявлении изменений мембран эритроцитов при различных заболеваниях, сопровождающихся нарушением липидного обмена.

Предложенный способ имеет высокую специфичность по отношению к изменениям мембран эритроцитов, вызванным именно атеросклерозом, практически не выявляет изменений при других нарушениях липидного обмена и обладает в 4,4 раза более высокой точностью по выявлению лиц с изменением мембран эритроцитов при атеросклерозе, чем известный.

1481687

Таблица 1

Исследованная группа

Статистические показатели*

Практически здоровые люди (норма) 30 0,237 0,021 0,115 0,184-0,290

Больные атеросклерозом 30 0,433 0,029 0,160 0,359-0,507

*n — количество обследованных лиц; х — среднее значение критерия ДУ; Б-„ — ошибка средней; G = S- n — среднеквадратичное отклонение; — среднее значение генеральной совокупности; t — нормированное отклонение.

**При уровне значимости 0,01 t = 2,54.

Таблица 2

Известный способ

Предложенный способ

Испытуемая группа

Специфичность

Специфичность

Количество лиц, Доля

Количество лиц,давших

Доля лиц,с полодавших лиц,с полоположительотрицательжитель- ной положи отрицательную реакцию жи тельной тельную реакцию ную реак- . цию реакцией, 7 ную реакреакцией, % цию

Практически здоровые (n=48 человек) 1

ИБС с нормальным уровнем липидов в крови (n--34 человека) 17

ИБС с повышенным

2,1

46 4,2

17 50 23,8 4

30 11,8 2,8

33 52,8 25,1 8

62 11 4 2 7

6, 1 1,4

7,7 1,8

1,4 2

2 63 3,1 1,5 5 60

П р и м е ч а н и е. Специфичность определяется как отношение доли лиц с положительной реакцией в опытной (патология) к доле лиц с положительной реакцией в контрольной (здоровые) группах. уровнем липидов в крови (n=70 человек)

Гиперлипидемия без клинических признаков ИБС (n=33 человека)

Сахарный диабет (n=65 человек) Доверительный интервал средней генеральной совокупности при уровне значимости.0,01** (x-t ° S- ляе х+ - S-)

Y (Х

1481687

Составитель В. Гудошников

Техред М.Дидык Корректор Э.Лончакова

Редактор А. Козориз

Заказ 2682/46

Тираж 790

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5.Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæroðoä, ул. Гагарина,101 1 У!0

4 МКPf