Штамм бактерий lастовасillus асidорнilus, используемый для приготовления бакпрепаратов для нормализации микрофлоры при нарушении микробиоценоза влагалища

Штамм бактерий lастовасillus асidорнilus, используемый для приготовления бакпрепаратов для нормализации микрофлоры при нарушении микробиоценоза влагалища

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения препаратов - зубиотиков, используемых для нормализации микробиоценоза влагалища. Цель изобретения - создание штамма бактерий LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS, обладающего антибиотикоустойчивостью и выраженными адгезивными свойствами. Штамм получен путем селекции, депонирован в Центральном Музее промышленных микроорганизмов под номером ЦМПМ В-3324. Штамм L.ACIDOPHILUS в виде свечей используют для лечения нарушений микробиоценоза влагалища. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СООИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) А1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCKOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ женшины.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPbfTHRM

ПРИ ГКНТ СССР (21) 3922963/28-13 (22) 28.06.85 (46) 07,07,89. Бюл, Р 25 (71) 2-й Московский государственный медицинский институт им,Н.И,Пирогова (72) В,М,Коршунов, Н,Н,Володин, Л,И.Кафарская, Н,П,Иванова и Б.В.Пинегин (53) 615.371 (088.8) (56) Ленцнер А.А,, Миксельсаар М,3., Кирх Р.А. Лактофлора близнецов и экспериментальньж животных одного ромета, — Актуальные вопросы иммунодиагностики и иммунорегуляции, Материалы Ч научной конференции по проблеме клинической иммунологии, Таллин, 1982, с ° 210.

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения препаратов — эубиотиков, используемых для нормализации микробиоценоза влагалища.

Целью изобретения является новый штамм, обладающий антибиотикоустойчивостью и выраженными адгезивными свОйствами, Штамм Lactobacillus acidophilus получен иэ исходного штамма L,acidophilus ВР-27 путем селекции, Исходный штамм L.acidoðhilus ВР-27 выделен из влагалища здоровой взрослой (5И 4 С 12 N 1/20, А 61 К 35/74//

//(С 12 N 1/20, С 12 R 1:23) 2 (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ LACTOBACILLUS

ACIDOPHILUS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ БАКПРЕПАРАТОВ ДЛЯ НОРМАЛИЗАЦИИ МИКРОФЛОРЫ ПРИ НАРУШЕНИИ

МИКРОБИОЦЕНОЗА ВЛАГАЛИЩА (57) Изобретение относится к микробиологической промьппленности и может быть использовано для получения препаратов — эубиотиков, используемых для нормализации микробиоценоэа влагалища. Цель изобретения — создание штамма бактерий Lactobacillus acidophilus обладающего антибиотикоустойчивостью и выраженными адгезивными свойствами, Штамм получен путем селекции, депонирован в Центральном

Музее промьппленных микроорганизмов под номером ЦМПМ В-3324, Штамм L,acidophilus в виде свечей используют для лечения нарушений микробиоценоза влагалища. 2 табл, Штамм Lactobacillus acidophilus депонирован в Центральном Музее промьштпенных микроорганизмов института ВНИИгенетика" под номером ЦМПМ

В-3324 и характеризуется следующими признаками °

Культурально-морфологические свойства. Длинные и тонкие неспорообраэующие клетки окрашиваются грамположительно. В чистой культуре клетки располагаются бессистемно. В жидкой селективной среде MPC растет диффуэно, Характерен придонный рост, вся среда при этом остается прозрачной, иногда бактерии распределяются по стенкам пробирки.

1491884

На плотной среде MPC образует колонии S-типа, круглые с ровными краями, гомогенные, -непрозрачные, пигмента не образуют; профиль колоний выпуклый, без блеска, легко снимаются петлей с поверхности плотной среды.

Штамм может расти на следующих средах: обезжиренное молоко - на вто- 10 рые сутки после посева молоко свертывается, с образованием плотного сгустка и отделением сыворотки; на жидкой синтетической среде Н.Наепеl количество жизнеспособных клеток 15 при этом достигает 10 -10 в 1 мл;

5 6 первые пассажи штамма дают обильный придонный рост на жидкой среде Блаурокка для бифидобактерий; в последующих пересевах рост штамма может 20 истощаться; в полужидком (0,77.) агаре Блаурокка (при посеве в пробирки с 9 мл среды) образует слегка выпуклые дисковидные колонии.

Физиолого-биохимические признаки, Оптимум роста при 37,5-38,0 С, оптио мум рН 6,2-6,4, анаэроб.

Каталазы не образует. . Сбраживает сахарозу, мальтозу, галактозу, фруктозу, лактозу, раффинозу; че сбраживает ликсозу, ксилозу, маннит, рамнозу, дульцит, цитруллин, рибозу, сорбит.

Кислотообразование при выращивании в обезжиренном молоке 92 (по 35

Тернеру), Устойчивость к антибиотикам и антагонистические свойства приведены в табл. 1.

Пример 1, Изучение влияния лактобактерий L.acidophilus на восстановление вагинальной нормофлоры у женщин, Под наблюдением находилось t8 жен- 45 щин в возрасте 23-35 лет с вагинальным дисбактеризом, У всех женщин отмечался резко выраженный дефицит мо" лочнокислой лактофлоры, Количество лактобактерий во влагалище всех обследованных женщин составляло 10

10 кл,/г. В то же время число ста5 филококков и дрожжей достигало 1О

10 кл./r исследуемого материала. ь

У 8 женщин определялись энтеробактерии в количестве 1Π— 10 кл./г иссле5 дуемогo материала °

Все обследованные женщины были разделены на две равные и эквивалентные группы, Женщины первой группы получали ежедневно в течение 10 дней местно штамм Е.асЫорЬ11ыз В-2

Р В-3324 в количестве 1 10 жизнеs способных клеток. Женщинам второй группы не назначали местно лактобак-, терии. У женщин первой группы на 1-й и 2-й дни после завершения курса бактериотерапии отмечалась выраженная нормализация вагинальной микрофлоры, которая сохранялась и в последующие сроки наблюдения. На 7-й день после отмены лактобактерий количество стафилококков составляло 1ОЗ кл./г, энтеробактерий менее 10 кл,/r, дрожжей

10 кл,/г. Лактобактерии, занимая доминирующее положение среди других представителей вагинальной микрофлоры, составляли 10 кл./r и превышали т уровни условно патогенных микроорганизмов в 10 раз.

У женщин второй группы в те же сроки наблюдения сохранялся выраженный вагинальный дисбактериоз: количество энтеробактерий, стафилококков и дрожжей составляло 10 — 10, 10

10 и 10 — 10 кл./г соответственно при значительном дефиците лактофлоры

10 - 10 кл./г, Пример 2. Изучение жизнеспособности лактобактерий L,acidophilus

В-2, В-3324, находящихся в вагинальных свечах.

Получают биомассу суточной культуры лактобактерий, выросших на жидкой среде МРС, содержащую 3 10 жизнеспо

0 собных клеток. Биомассу лактобактерий смешивают с 30 г масла какао и затем в смесь добавляют 2,0 г ланолина, который связывает свободную воду и обеспечивает гомогенность смеси, После этого гомогенную массу раскатывают и выкладывают,-.в специальный металлический дозатор, при помощи которого готовят 30 свечей. Свечи хранят в целлофановых обертках в хоо лодильнике при 4 С на протяжении

10 сут. На 1, 5 и 10-е сут хранения определяют в свечах количество жизнеспособных лактобактерий. Установлено, что на протяжении 10 сут после изготовления свечей число жизнеспособных лактобактерий в каждой свече составляет 1 ° 10 клеток.

Сравнительные данные по адгезивностной способности штамма представлены в табл, 2, 1491884

Продолжение табл.1

Антагонистическая активность

Ми нимал ьные ингибирующие концентрации, мгк/мп

Препарат

Зона звТестштамм держки роста тест10 штамма вокруг колоний лактобактерий, мм

Гентамицин °

S,dublin

С-96

К,Pnevmoniae К 412

vir

P.mirabilis 771

12,0

Динкоми25

t5 0

0,5

Ампиокс

9,0

Ампицил9,0

S. albus

0,5 лин

Таблица 2

30 штамм пакт бактерий оказатели адгеэнвности к клеткам хозяина

4итроциты I rp. Вагикрови нальные э пнте35 оциты

% Ф епень Индекс

re- адгеВнос» знвиос» ндекс адгеТаблица 1 виости

МинимальАнтагонистичес- 40 кая активность

Препарат ные ингибирующие концентрации, мгк/мл

4,9

2,3

t1,8

Зона заТестштамм держки роста тест45 штамма вокруг колоний

9,t 21,8

36,0 лактобактерий, мм

1,7 3,5

19,0

Певиграмон

Полимик55 син

Канамицин

Индекс адгезивности по отношению

1 к эпителиоцитам влагалища определяют следующим образом.

Культуру лактобактерий (В-2) выра5 щивают на жидкой среде МРС в течение

36 ч, центрифугируют t5 мин при

3000 об/мин и трехкратно отмывают в растворе Хэнкса, Эпителиоциты из влагалишного отделяемого отмывают троекратно в среде 199, после чего подсчитывают их концентрацию в единице объема (с помощью камеры Горячева), Смесь лактобактерий и эпителиоцитов в соотношении 100; 1 (в среде 199) инкубируют 30 мин при 37 С.

Для фиксации лактобактерий, взаимодействующих с эпителиоцитами, в смесь добавляют глютаровый альдегид, после чего на предметных .стеклах готовят 20 мазки и окрашивают их по Романовскому-Гимза.

Индекс адгезии определяют как среднее число лактобактерий, прикрепленных к одному эпителиоциту (при подсчете на 100 эпителиоцитов, участвующих в адгезии) в препарате. формула изобретения

Штамм бактерий Ьасtobac.illus ас1.dophilus, ЦМПМ В-3324 (Центральный

Музей промьппленных микроорганизмов института "ВНИИгенетика"), используемый для приготовления бакпрепаратов для нормализации микрофлоры при нарушении микробиоценоза влагалища, 50000

1000 Е.Cali 01 16,5 Исходный (L,асС4оphilus

BP-27

Лолуч енньв1 путем селекции нтамма

L.acidophilus

8-2, Ютамч Ь,fer, aentum (известный) ь

Процент клеток, на которых находились две и более клетки лактобактерий, ьз

Среднее число лактобактерий,взаимодействующих с одной клеткой хозяина