Способ определения инсулинпродуцирующей активности панкреатических клеток

Способ определения инсулинпродуцирующей активности панкреатических клеток

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, а именно к трасплантации панкреатических клеток при лечении сахарного диабета. Цель изобретения - повышение точности способа за счет определения внутриклеточного распределения инсулина. Островковые β - клетки поджелудочной железы окрашивают псевдоизоцианхлоридом, который дает специфическую метахроматическую реакцию с инсулином, и измеряют интенсивность люминесценции в УФ-лучах. При величинах 2,2-3,5 условных единиц у 90% и более клеток культуру считают пригодной для трансплантации.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 4

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21 ) 3878518/28-14 (22) 22.()2.85 (46) 15.07.89. Ьюл. N. 26 (71) Карагандинский государственный медицинский инститлт (72) В. И. Корчин, Г. И..=)лысин и В. И Медв«дев (53) 615.475 (088.8 j (56) Федотов В. П. и др. Чонослойная ку.ibтура ианкреатических бета-клеток новорожденных крыс: секреция инсулина in Eitro u поныл ка Tp(lilcилантации животным с экспериментальным диабстол(, !1роблемы э <докрино ioi ии. 1!)78, т. 23, ¹ 4, с. 57 — 60.

И >Обр(T(НИ(Or Ii<)E. ИТС)1 К Л>с IИцИНС И КаcB«1ся трансплантаци)< нанкреатических клеioK при лечении сахарного диабета.

Цельк) изобретения является повышение

Io Hocòil способа за счет определсния внутриклеточного распределения инсулина.

При.((E>> I. Кульгуру o«TpoBI(oBhlx бетакз(т(>к иоджелудочнои железы новорожденных поросят, закрспив;и!к>ся на слюдинках на 5-й день роста, фиксируют в кидкости

Ьуэна, проводят в спиртах убывающей крепости, окис.>яют перманганатом калия и окрашивают во;lным 0,04%-ным раствором пс«вдоизоцианхлорида в течение 20 мин.

11ри цитофлуориметрии выявляк>т 94% островковых клеток с интенсивностью свечения

2 2 и болсе условных единиц (фон принимается за 1 единицу). Культура признана пригодной для трансплантации. ° 10 крысам линии Вистар массой тела 140 — 170 г с аллоксановым;1иабетом вводят внутрипеченочно

IIo 800- †10 панкреатичсских островков этой партии. У 7 olibIT>laix животных на 3

„„80„„149392О А 1

2 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕ, 1ЕНИЯ И11СУЛ И НП РОДУЦИ РУ)ОШЕЙ АКТИВ НОСТИ

1lAHKPEATHI-!EÑÊÈÕ K. 1ЕТОК (57) Изобретение относится к медицине. а именно к трансплантации панкр«атич«ских клс <7к ври лечении c(lхарного диабета. Цель изобретения -- повыше .ие точи<>сти способll за счет опред«ления внутрикл«точного p;« — предсления инсулина OETpoB>oBI Р-клетки поджелудочной желе. ы окрап>ивают исевдоизоцианхлоридол(, который даст cil(.цифи

rI«CÊóÞ МЕтаХРОЛ(атИЧССКЛЮ рсаКцИЮ С ИНСуЛИНОМ, И ИЗМЕряЮт ИитСНСИВНОстЬ ЛК МИНСE ll«illlHH в УФ-.1учах При BE,Inчин((. 2,2 -3,5 условных единиц у 90% и более кл«т()л культуру считак)т пригодн<)й для тра н. план тации.

4-й день ilослс hñåногеniloй 1p:Iil(илаil I illèè общее состояние улучшит<и. ь и«<«.. Иi

BHëocTb, учсньшиласh ж(lж 1а и Ilo.inл рия, сilHdèëñÿ уровень гликсчии и иормализов;>лся на 7 — 10-«сутки, увеличилocь колич<.сгв<) иммунореактивно(î инсл,зин,) B сы(горотк( крови. 5 контр >льны: крыс ногиб,ln и;I .!

14-й день после ин-,скции аллокс;)на () I IIHрасTBIoillHx явлений кстоацидоза.

Пример 2. Окрашены островковыс клетки

lid 3-й день культивирования. IlpH люми>«сцентной микроскопии 70% бета-клст<)к ичсют интенсивность свечения 1,5 и мснее условных единиц. Культура признана отн >сит«льно пригодной для тран II, Bíòdönè. <) крысач линии Вистар массой тела 150 - 16() г с,ал ioксановым диабетом вводят внл > риис ч«иочно во 800 — 1000 островков. Положительный эффект отмечен только у одного животного, остальные иогиг>ли через 6 !О ди«и после имплантации от прогр«ссируннц«й нед< Tdточности инсулина и нарл щения обменных процессов.

14Ж920

ФПГ),1(Ц.<и и.«)r>P(т, )(IV! (:<>ст;>вите.>н l. Ярнил

Релактчр М (1игкина Телре» ll Bep(c h<>pp< h><>p 11,М) ел;

Заказ 41!12 <41 ??????<???? 78!) 1!> tt<>( (31111111111 l <><<.t >pñò<><íí<>t<» <>i>ttr< г > r» и ><><Ч>ре>(ниич » <> > hp< > r»s», н;» I k;!; I (< ! 1,11).3д), »<>< лиа. Ж В;>, Р t (исл,»t н;>t>,;< 4 Г>

Г(рчиз<и>астаенн<> и > < >гезьски>< к<>чг>иt<,>t .:11;>< t» г У л> <>р< >и > Г:>!!р(!.1(е() ). < .)Кр(1(цивыют к) . !ь!уру О(тровK()f3I>Ix беты-клеток на 10-й день p()(òà. ((Итофг!у Ори метрическое исследован и«поыволяет

Обнару жить (12,(< клеток, интенсивн<>сть свечения K()T()phlx соответствует 1,2 ус. ювньtx единиц. (л льтура ианкреытическик бетаклегок цриынаны H(. ltðHãî Tí()H для трансплантации, так кык не обладает достаточной инсулинпродуцируюшей ыктивностьк). 11яти крь!сым линии Бистар массой тела !45160 г введено внутрипеченочно fto 800- 1000 островков второ срока куг!ьтивировыния. (,()(:гояние жи!)отныз; не улучи!иг!Ось, и они

H()l ибли спустя 7- 12 дней п<)еле ио !садки. ((сцоль(овыние иыооретения позволит имll.1;>нтировыть фу нкционыльно ыктивньи остP()E3K()I3t>I(. К.Ч(ThH. ()K(l Ц>К>нги(!1О, I<»KIIT<,11H()(влияни(ны течен!(е ыксцер))м(нтыльного

g H <3 () (I 1. г.H<)c()f) определения инсулиннроду ци()у ющей активности fl;t IIKp(ыти ц < кик клс г()h иутем окраски инсулина н кулE>т) р(о гр<)вH0,TH((. . l I>,l(»t H()iI >K(,1(. .3 t>l С сл(tl к)щей лк)ми)цчщ(и гной микроскопией, !

) T. I If <(ï þ f ((I!! l ñ IT(), с ц е.1 ь кэ H () E3 E>l I I l (. и и Я ч О« tl()(ти с и особ!1 за и(1 < >!!1(3(д(. .ч(и ия ВH>, 1

Риh, 1\ Tоч H()ГО Pы(1! P(.,ц .1(I(itß и Hс(.÷ и на, в 111)ОЦЕ(((. РОСЧ <1 ?? ??,1 t>T» () I>1 <) К (3!3(КУ И РОИ 3 ВО ЧЯТ

И(< (3.!ОИ,)ОЦИ()НХ, I()PII (ОМ.