Штамм энтерококков sтrертососсus fаесiuм, используемый для приготовления бактерийных препаратов

Штамм энтерококков sтrертососсus fаесiuм, используемый для приготовления бактерийных препаратов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для изготовления бактерийных лечебных препаратов, применяющихся с целью профилактики и лечения дисбактериозов кишечника. Целью изобретения является штамм STREPTOCOCCUS FAECIUM ВКПМ NB-4054 , обладающий высокой антагонистической активностью, эффективный для коррекции кишечной микрофлоры. Штамм обладает естественной не плазмидной устойчивостью к антибиотикам. Для получения препарата штамм засевают на жидкую среду Калины. Выросшую 1-суточную культуру энтерококков центрифугируют при 3,5 тыс. об/мин при 4°С в течение 20 мин. Осадок ресуспендируют в кипяченой воде или физиологическом растворе до концентрации 1<SP POS="POST">.</SP>10<SP POS="POST">9</SP> клеток в<SP POS="POST">1</SP>/мл. 0,5 мл такой суспензии составляет 1 дозу препарата для взрослого человека. Штамм безвреден, эффективен при использовании для коррекции микрофлоры кишечника при дисбактериозах. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

COLlHAËИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

„.Яц „„и872д

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4360302/28-13 (22) 08.01.88 (46) 30.07.89. Бюл. № 28 (71) 2-й Московский государственный медицинский институт (72) В.М.Коршунов, Н.П.Иванова, Т.А.Логадырь и Б.А.Ефимов (53) 615.37 (088.8) (56) Патент CUA № 3713836, кл. А 23 К 1/00, 1973.

Руководство по вакцинному и сывороточному делу./Под ред. П.Н.Бургасова. N.: 1978, с. 88-101,,(54) ШТАММ ЗНТЕРОКОККОВ БТЕЕРТОСОССНБ

FAECIUI1 ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ БАКТЕРИЙНЫХ ПРЕПАРАТОВ (57) Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для изготовления бактерийных лечеб ных препаратов, применяющихся с

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при

:изготовлении бактерийных лечебных . препаратов, применяющихся для профи-"

:лактики и лечения дисбактериозов ки ,шечника.

Целью изобретения является штамм

Streptococcus faecium УДС-86, обла дающий высокой антагонистической, .кислотообразующей активностью, естественной не плаэмидной устойчивостью к антибиотикам, эффективный для коррекции кишечной микрофлоры.

Штамм Streptococcus faecium УДС-86 выделен иэ кишечника здорового человека и депонирован в коллекции (51)4 С 12 N 1/20, А 61 К 39/09 // (С 12 N 1/20, С 12 R 1:46) целью профилактики и лечения дисбактериозов кишечника. Целью изобретения является штамм Streptococcus

faecium BKIIM ¹ В-4054, обладающий высокой антагонистической активностью, эффективный для коррекции кишечной микрофлоры. Штамм обладает естественной не плазмидной устойчивостью к акнтибиотикам. Для получения препарата штамм засевают на жидкую среду Калины. Выросшую 1-суточную культуру энтерококков центрифугируют при 3,5 тыс. об/мин при

4 С в течение 20 мин. Осадок ресуспендируют в кипяченой воде или физио.логическом растворе до концентрации

1 х 10 клеток в 1 мл. 0,5 мл такой суспензии составляет 1 дозу препарата для взрослого человека. Штамм безвреден, эффективен при использовании для коррекции микрофлоры кишечника при дисбактериозах. 3 табл.

@hi культур промышленных микроорганизмов цр

ВНИИгенетика под номером В-4054.

Штамм Streptococcus faecium ВКПМ . В-4054 характеризуется следующими

3вииЬ свойствами, Культурально-морфологические свойства. Клетки кокковидной формы, располагаются в мазке попарно или короткими цепочками, грамположительны,спор и капсул не образуют.

При росте в мясо-пептонном бульо- 1 не с глюкозой и дрожжевым экстрактом, (МПБ) дают равномерное помутнение и осадок. На плотной среде (кровяной агар, мясо-пептонный агар) растут в виденепрозрачных сероватых колонний

1 л

10 r

20 г

20 r

3 1497211 с ровными краями диаметром 1-2 мм.

Колонии легко снимаются с агара, равномерно эмульгируются в физиологическом растворе хлористого натрия.

На среде Калины растут в виде голубых непрозрачных колоний с равными краями.

Физиологические свойства. Аэробы, при культивировании в МПБ при 37 С через 18-20 ч после посева в 1 мл среды вырастает 5 х 10З вЂ” 1 х 10 живых клеток. По мере роста культуры снижается рН среды, кислотность по

Тернеру за 24 ч культивирования дос- 15 тигает 250-270 T.

Биохимические свойства. Сбраживает мальтозу, целлобиозу, сахарозу, лактозу, маннит, салицин, маннозу, 1-арабинозу, не сбраживает Д-араби- 20 нозу, сорбит, рафинозу, рамнозу, глицерин, ксилозу, инозит, дульцит.

Штамм хорошо растет на средах с добавлением желчи.

Не дает гемолиза при росте на кро- 25 вяном агаре.

Устойчивость штамма Streptococcus

faecium ВКПМ NB-4054 к антибиотикам.

Минимальная ингибирующая концентра,ция, мкг/мл: линкомицин 1,0, левоми- 30 цетин 10,0, нитроксолин 100,0; гентамицин 4,0, нистатин 100,0; олеандомицин 1000,0, полимиксин 5000„0, канамицин 10000,0, клафоран 1000,0, ампициллин 1.,0.

Штамм обладает антагонистической

:активностью по отношению к стафилококку, К. lebsiella, К. coli 0«, > .S. dublini Sh. Zonnae, Pr. mirab.

Состав сред для выращивания : 40

Str. faecium ВКПМ NB-4054:

Мясо-пептонный бульон

Глюкоза

Дрожжевой экстракт 45 рН 7,0-7,4

Стерилизация 30 мин при 0,5 атм. I

Среда Brain Heart Jnfusion (Difcd)

Среда Brain Heart Jnfusion (Difco) с добавлением 2 агара.

Мясо-пептонный бульон 1 л

Глюкоза 10 г

Дрожжевой экстракт

55 с добавлением 2 агата.

Среда Калины, Кровяной агар.

Лабораторная проверка показала непатогенность Str. faecium BKIIH

NB-4054 для экспериментальных животных (мышей, крыс, морских свинок)., а также для людей.

Пример 1. Получение бактерийного препарата на основе Streptococcus faecium BKIIN NB-4054.

Штамм засевают на жидкую среду

Калины. Выросшую 1-суточную культуру энтерококков центрифугируют при

3,5 тыс. об/мин при 4 С в течение

20 мин. Осадок ресуспендируют в кипяченой и остуженной до комнатной температуры воде или физиологическом растворе хлористого натрия до концентрации 1 х 10 кл/мл. 0 5 мл такой суспензии составляет 1 дозу препарата для взрослого человека при использовании его для коррекции микрофлоры.

Препарат из энтерококков может быть получен в лиофилизированном виде .(ампулы, флаконы, таблетки) °

Пример 2. Изучение влияния

Str. faecium BKIIM NB-4054 на микрофлору кишечника мышей при химиотерапевтическом дисбактеризе.

Мьппи линии СВА быди разделены на две группы: опытную и контрольную.

Животным обеих групп вводят интрагастрально ампиокс в дозе 4 мг/мышь в течение 5 дней. Опытной группе с

1»го по 10-й день от начала эксперимента вводят интрагастрально энтерококк (штамм ВКПМ NB-4054) в количестве 5 х 108:клеток на мьппь. Животные контрольной группы вместо штамма энтерококков получают физиологический раствор в соответствующем объеме.

В результате изучения микрофлоры толстого кишечника на 1-й и 6-й день после отмены антибиотика было отмечено,.что пероральное введение животным штамма энтерококков обеспечивает эффективную нормализацию микрофлоры: уровень энтеробактерий на

6-й день составил lg 8,573+0,452 кл/г материала, в контрольной rpynne1g10,028+0, 111 кл/г, в то же время у животных опытной группы увеличивается содержание лактобактерий в толстом кишечнике — lg 8, 176 +

+ 0,048 кл/г, в то время как у животных контрольной 1 DvlIIIbI их число в основном не превьппает lg 6,948 +

+0,054 кл/г °, 5

14

Результаты представлены в табл. 1.

Пример 3„ Влияние препарата энтерококков Streptococcus faecium на восстановление микрофлоры кишечника при химиотерапевтическом дисбактериозе, обусловленном применением высоких терапевтических доз ампиокса.

Две группы мышей линии СВА (опытная и контрольная в течение 5 дней интрагастрально получают антибиотик в дозе 20 мг/мышь в сутки. Животным опытной группы с 1-го по 10-й день от начала эксперимента интрагастрально вводят штамм энтерококков BIGIM

NB-4054 в количестве 5 х 10 клеток

8 на мышь. Животные контрольной группы вместо энтерококка получают физиологический раствор.

На 1-й и 6-й день после отмены ампиокса изучают микрофлору толстого кишечника. Полученные результаты свидетельствуют, что пероральное вве:дение животным штамма энтерококков

BKIIM NB-4054 также обеспечивает нормализацию микрофлоры: уровень энтеробактерий в толстом кишечнике на

6-й день после отмены антибиотика у опытных животных составил 1g 8,874+

+0,111 кл/г, в контрольной группе—

1g 9,702+0,167 кл/г, увеличивается . содержание лактобактерий в толстом кишечнике у животных опытной группы—

1g 8,018+0,121 кл/г, у животных контрольной группы их число снижается и не превышает 1g 6,932+0,286 кл/г.

Количество энтерококков у животных опытной группы на 6-ой день после отмены антибиотика составляет

1g 8,013+0,092 кл/г, что в 10 раз превышает количество энтеробактерий у животных контрольной группы

1g 7,430+0,191 кл/г.

Результаты представлены в табл.2.

Пример 4. Влияние энтерококков на микрофлору кишечника при постлучевом дисбактериозе.

Беспородных мышей облучают. в дозе

700 P. После облучения животных разделяют на две группы. Животные опытной группы получают взвесь антерококков интрагастрально через день в количестве 5 х 10 клеток на мышь на

97211

Таким образом, штамм энтерококков Streptococcus faecium ВКПИ NB4054 обладает полезными свойствами, эффективен при использовании для коррекции микрофлоры кишечника при дисбактериозах, безвреден и может быть использован в практическом здравоохранении в качестве бактерийного препарата.

Формула изобретения

Штамм энтерококков Streptococcus

faecium BKIIM NB-4054, используемый для изготовления бактерийных препаратов. протяжении 15 дней. Животные контрольной группы вместо бактерийной взвеси получают физраствор.

На. 10-й день после облучения излучают микрофлору тонкого и толстого кишечника, опытной и контрольной группы животных.

Результаты приведены в табл.3.

1р Применение штамма энтерококка у облученных животных приводит к коррекции дисбиотических изменений, развившихся у животных после облучения: снижению количества энтеробактерий

15 и стафилококков по сравнению с животными контрольной группы и увеличению у них количества лактобактерий. На 10-й день после облучения у животных контрольной группы в

2р толстом кишечнике количество энтеро-:: бактерий, энтерококков, стафилокок9i ков, лактобактерий составляет 10

107 — 108" 10 — 108 ° 10 — 100 кл/г соответственно, у животных опытной

25 группы количество энтеробактерий снижается до 10 -10 кл/г, стафилококков

7 9 до 10 -10 кл/г (что соответствует

4 5 показателям нормофлоры), количество энтерококков увеличивается до 10

8 д0 109 кл/г: лактобактерий до 10 кл/г.

В тонком кишечнике у животных, получавших энтерококки, на 10-й день не определяются стафилококки (<10 ????>

35 энтеробактерий (до 10 -10 кл/г проS тив 10 кл/г в контрольной группе), . увеличивается (до 10 -10 кг/л) коли4 чество лактобактерий.

1497211

I со

С"!

С » л

Ю о !

» о

Е

Ql :(Э

Ю !

Г!

Ю л

OQ

» Г

Ю л

О л

4 л

-Ф

ОГ

С» л

Ю а

Э I !

» ((!

О

Е I

И I

03

И х х

Р

Н х

Х о !

» о

Е и

Ц о

+j

+! I

I и I

OQ 1

С»! I л л

+l л,О л

СО х о

Я

Э I

Э

И х х

У

Э

П х

И

Х о ьо

I д а о и ф о

C(j ф !" ф х о а

Е Э х сб х Е

Э х х

Э

1„ ф о х х

О

OO

СЧ л

С 1

Р»

Ю л

Cj.О л

Ю л

Ch

Cj л

Ch

Ю л

Ю.Е! 1

1 л I

l,О л!

+) +l О

Ю л

С »

Cj ! л !

Р» л

00 ч л л о о

1 о

Р х ! о

Ь4 х

8 х

° л и а3

Ч4

1

1Г

СЧ

С» л

Ю

С 1

Ю л

СЧ

СГ л

СС

OQ.

С» л

Ю а 1

Qj

М 1

Qj 1

lo 1 о а 1

Э 1

Е I х 1 л

+i

+I

+! 1

С ) и

СЧ л

СО

СЧ

Ю л

1

U и о

U о и а

Э н и

СО Г

С \ л

О\ л л

CO ф о с.

v ъ » о

I х

Е» х

< )

gj д И х х

I х

Е» х

С!)

6) д Х м

Э

Х о х

О !О

I х х х э

И а

V lO

Ц и о

И д х

Э

С ф о

И

И о

Ц о а

Э

E х

Qj

Е (ч о л д о ц х

1 х

Е» оа 1

Е Cj х х

Е»

С!) 3Г) х о

Е;g

Э о :( ф

М о х

И

Е х о

С х х

Qj

Е х х

Е о

A х ц

Э л о х и х

tf

Е о х

Й

6 о

1 х

1

1 Х

1 Х ! о х о

I pi

I Э 1

1 Е I

Х 1

) л 1

1 о а э:х ц

И Ql

5w е

О Р О

Э л ф

Э ф

Я и хо и е.х о оах

Ю Э ффоа

o j: Qj и х

ы- и о и и ф

:х

I Э

Ql х В, Э СГ1

П Э

Э Р

Ql о е

И л э о

2 х х ф

E ф О, Д а

Э I х и о х

И х

A д A ххх

Э Э цЕ о х

О О!О

I о х

Ql

°вЂ” и и ы а

О Р) Р1 и -

v x j". еао

О,х а

>х е х хо о

Х М и д э х

Э х !:1 с» х

OCj Qj с—

1 1 а х о х х Х 1

1 л

Ро 1 э Х 1

3 Е 1 ф х I

åj

ОЭЕ сс! И а !

1497211

СО м м л

C) о

CO л

C) О

CO

С4 л

Ю

С 4 л

Ю ха! Э

E I

Е I чэ I о

Х I сб I

) I

1 1

l л

C) +) 1

I сЧ 1

CO 1 сч 1

+!

+) +! (4 м

Ch л О

Ю л

CO л л х

Х

И о

Х 1 о

Е о

) о

Е»

) 1 ! & I

1 Е о

Е х х а .о о м

Ю л

Ю

+1

С 4 О л

»

О1

Ю л

Ю м

С4 л

C) (:У

Ю х

И A о

Х I о а

1 Э 1

Ю л

Ю

+) м

Ю л

+! 1

1 л л

1 л I

CO 1

Ю л

+! I

+) Ю м . » л л Г

Ю л

C) л.О л

C) О

Ю л

+1

+!

+)

С»4

C) л л (У»

»Л О

С 4 л

C) л

CO

C) л

Ю о1 л л

1 х

Ц и о х

l и о

И л х

Э

I о

И

4 х

ы е

И . х х е е о

Е

)»»О о х

aJ x

Ц б

I и о «д х

Э

А Е е

И

»:» х

Х 1э о е х

1» 1О о х

Е» э х

1 х о х

2 х

Q)

Е

E о а ц

v e

1 о х

I E аФ

1- Ю

»Б х

А а о

Ш

Е» и

Щ а

cd а х х

1- О о х

ы х

a) o Z х о э

А

Э cd

Е» х

Э о

Х и

Э х х !

» о

Ц о а ! a) х

° и

М и 0l

Ф о

И

A о

И х

A х а

Г 4 И И

td Х

»а

ых д хе 2

Ц х

Х Е ою о !

» ц о о ы

Х

2 х

Э Р» х s х

Х

Ф х о х х о е и д хе

Я a)..

=! Е

° 4 и а

Э е

w Е о

M x х и о о

44 V а

Э lO н о

CO л» о о х х х а о е

М о х ах

Э Ю

1 О

a) а и

Э

И е Й х <б

) ех!л

Р а I и E I есб) Е Х х х ц о а он a) х о

z5 I"

I Э )è> о

О е 1 а л

»Ц»4 е! х х ые

Р Э

Э Я

O E O х ы л Д е о ж х и х,О м о 3х

Р Р»

Л а, е л

>х 4

Э х ые

Р хэ

a) m о).о

ы л Д е о д х и хам

Д!1

I

g 1О о

И х

Э х о

$ О

1 1оаэ м х и

1497211

Э Э. ф Э оооо

С44 Ч. Е а Ч.

О о О о о

4» ° ° 4 кких

«. .О оооо

° л В 4 В

». С41 W Л.Ос к

c4 ««« ооооо

° ° ЛЛ 4 з ф ч Ч ххххх ооф оо

В 4 ° В а

Ch Ос Ос

Ы

lC о л юъ 4 с л л

ООООО

° ° ° ° ° хххкх

ФГ

«м«««

ООООО

«««4444

О ОООО

-4»4 .Л .3 Д

Ь и ф и о л a ойдо

В а В а В

СЧ ф 4О

СЛ Ь Л ° +

ООООО

+ ч. + оо о хихих х

«Эс«М

ООООО

ХФХ И

СФ н о с сч 0

° ° ° a ,) сЧ р л о сч е

В В 1 В Л

Ch 4 сО С 1 СЧ

+ ЧЭ сс

ООО О ьь ььь ооооо

ФС Ч оо о ххххх хх,x. ° Н о сч о о— а a4» с л - сим

ХХХ Х о о сч о о э 1 а л сч сч со Э е о -о о

° ° 4 В В с» СЧ СЧ 4»

l»

И о

Е

Х

Oj й»4

О ЬООО

O O Э O

ООООО

Вс Э4 Ol 40 1»

О ОООО о о о сч о

* В В В Э а С 4С

СЧ ОСООО

1 1 ° * В

- сч с4 и оо- Ч

В ° ° В Л а ос л м ф

И

И

И о

И о

4 44

ООООО

Ю Ю \» 4CI IO

ООООО

6 444 оо

Э ° м ь оо

Х Х И Х

Э осчо о

° В ° В ° сЧ сч С сЧ сч о о м ао

Л Э В Л * посл о о о о сч

В * ° ° В

4 СЧ СЧ

М х

И о

М

D а

Ol

СФ ос

ООООО

- o î ос л л л э э л сч сч ос счоос

Э а 1 В 1

СЧ 3 с ЧС 441 осч осчсо

В a ° ° a

Л M Ф ссс с

O 44 аэа В оОооо а 44 а Л

О ОООО х хи леечка

В Э В Э В

4» С4С Ф Ссс 4»

N N о а4 сч

В В * ° a

Л 9 СЧ 4 OC

С С ОС сО Cl Л

Ф °, a л э счсч с

Ol I CC сл A

l и

О Э

H ы

CCl

1 3

>с К и е э о ь

5 и о4а э

cow

6 сйоф с4ам!

11 и 3

IO

1 Ф

Ь о х о а

2

Р ф и о а

C4l

Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х Х И Х Х Х

Х Х Х И Х Х Х И Х И

И Х ХФХ К И Х Х И Х Х И Х И И

ИИХХИХХХКИХХ

AD»4)$ ййов

lC I 5 )