Способ получения ацетилхолинэстеразы из мембраны эритроцитов крови человека

Патент 1497216

Авторы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к препаративной биохимии, касается способов выделения ацетилхолинэстеразы и может быть использовано в медицинской и микробиологической промышленности. Целью изобретения является повышение удельной активности ацетилхолинэстеразы. Способ заключается в том, что к взвеси мембран эритроцитов в фосфатном буфере добавляют хлористый натрий до концентрации 1,0-1,2 М, а затем проводят обработку раствором дезоксихолата натрия. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

ВСЕСОЮЗНАЯ

1lATEHTHO Тй,ri 1×ÅÑÊÀß

Б БИБЛИО i Еr.A

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н Д BT0PCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ. И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4301317/28-13 (22) ?7.08.87 (46) 30.07.89. Бюл. К - 28 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов (72) Н.A.Ùåãëoâà и И.А.Костарева (53) 663.15 (088.8) (56) Shihotaqp К. Acetylcholinesterase and it s association with lipid.

Eur. J.Biochem, 1976, v. 63, рр. 519-524.

Изобретение относится к препаративной биохимии, касается способов вьщеления ацетилхолинэстеразы и может быть использовано в медицинской и микробиологической промышленности.

Цель изобретения вЂ” повышение удельной активности ацетилхолинэстеразы.

Способ заключается в том, что к взвеси мембран эритроцитов добавляют хлористый натрий до концентрации 1,0-1,2 М, а затем проводят об работку раствором дезоксихолата натрия (ДХН) .

Пример 1. К 20 мг стромы добавляют 1 0 мл 0,2 M фосфатного буфера (рН 7,5) и 1,0 мл Н О. После, выдерживания в течение 2 ч определяют активность АХЭЧ и концентрацию белка в растворе, проводят центрифугирование при 80000 об/мин в течение

15 мин. В супернатанте определяют

„„SU„„1l 497216 А 1 (5!) 4 С 12 N 9/00 // В 01 J 20/24

2 (54) СПОСОБ НОЛУЧЕШИ А)(ЕТИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЪ| ИЗ МЕМБРАНЪ1 ЭРИТРОЦ11ТОВ КРОВИ

ЧЕЛОВЕКА (57) Изобретение относится к препаративной биохимии, касается способов ,,вьщеления ацетилхолинэстеразы и может быть использовано в медицинской и микробиологической промьппленности.

Целью изобретения является повышение удельной активности ацетилхолинэстеразы.. Способ заключается в том, что к взвеси мембран эритроцитов в фосфатном буфере добавляют хлористый натрий до концентрации 1,0

1,2 М, а затем проводят обработку раствором дезоксихолата натрия.1 табл активность фермента. Активность С::

АХЭЧ в супернатанте составляет 17 от исходной.

Пример 2. К 20 мг стромы добавляют 1 мл 0,2 М фосфатного буфера (рН ?,5), 0,177 г NaC1 и

1,0 мл Н О. После выдерживания в течение 2 ч определяют активность фер- «© мента и концентрацию белка. Затем проводят центрифугирование раствора Ь при 80000 об/мин в течение 15 мин. и

В супернатанте определяют активность

АХЭЧ и концентрацию белка. Активность фермента в супернатанте составляет

30% от исходной.

Пример 3. К 20 мг стромы до- 3» бавляют 1 мл 0,2 М фосфатного буфера (рН 7,5) и 1 мп 2%-ного раствора ДХН.

Происходит полное растворение вэвеФ си стромы. В растворе измеряют активность фермента и концентрацию белка.

После вьщерживания в течение 2 ч

Формула и з обретения

Пример Концентрация NaC1 охране- Удельная ие ак- активность, ивности, ME/ìã белка

Концентрация

ДХН, 1

5 6

0,9

1,2

1,3

2,5

2,1

1,9

0,117

0,058

0,117

О, 173

0,231

1,0

0 5

1,0

1,5

2,0

Концентрацию белка определяли до центрифугирования °

Составитель В.Варламов

Редактор Н.Киштулинец Техред М,Ходанич Корректор М.Максимишинец

Заказ 4406/29 Тираж 501 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

11303.5, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101

3 149721 сохраняется 60 . активности АХЭЧ от исходной.

II р и м е р 4. К 20 мг стромы добавляют 1 мл 0,2 H фосфатного буфера (pII /,5), 0,058 г NaC1 и 1 мл 2Х-ного . раствора ДХН. Наблюдается выпадение осадка. После выдерживания в течение 2 ч и центрифугирования со скоростью 80000 об/мин в течение 15 мин 10 определяют в супернатанте активность фермента и концентрацию белка. В супернатанте сохраняется 100 активности ЛХЭЧ.

Пример 5. К 20 мг стромы 15 добавляют 1 мл 0,2 М фосфатного буфера (pEI 7,5), О, 117 г NaCl и 1 мл

2 -ного раствора ДХН. Наблюдается выпадение осадка. После выдерживания в течение 2 ч проводят центрифугиро- 20 вание со скоростью 80000 об/мин в течение 15 мин. Б супернатанте определяют активность фермента и концент рацио белка. Сохраняется 100 активности ЛХЭЧ. 25

Пример 6. К 20 мг стромы добавляют 1 мл 0,2 М фосфатного буфера ,(pII 7,5), 0,173 r NaC1 и 1 мл 2 -ного раствора ДНХ. Наблюдается выпадение. осадка. После выдерживания в течение )

2 ч центрифугируют со скоростью

8000 об/мин в течение 15 минут. Из6

4 меряют активность АХЭЧ и концентрацию белка. Сохраняется 93 активнос ти фермента.

Пример 7. К 20 мг стромы добавляют 1 мл 0,2 М фосфатного буфера (рн 7,5), 0,234 г NaC1 и 1 мл

2Х-ного раствора ДХН. Наблюдается выпадение осадка. После выдерживания в течение 2 ч и центрифугирования в течение 15 мин со скоростью

8000 об/мин определяют в супернатанте активность АХЭЧ и концентрацию белка. Сохраняется 90Х активности от исходной.

Полученные данные приведены в таблице.

Способ получения ацетилхолинэстеразы из мембраны эритроцитов крови человека, предусматривающий солюбилизацию фермента с помощью дезоксихолата натрия в фосфатном буфере, о твЂ” л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения удельной активности ацетилхолинэстеразы, солюбилизацию проводят в присутствии хлористого натрия в концентрации 1,0...1,2 M введение которого осуществляют перед внесением дезоксихолата натрия.