Способ определения сортовой чистоты семян тыквенных культур

Способ определения сортовой чистоты семян тыквенных культур

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использовано в овощеводстве, селекции и семеноводстве овощных культур. Цель изобретения - повышение разрешающей способности метода электрофореза белка тыквенных. Для этого берут концентрирующий гель с содержанием акриламида 11,9...12,1 мас.%, а соотношение акриламида к метиленбисакриламиду в геле устанавливают в интервалах 29,0...29,2:0,8...1,0 соответственно, причем разделение ведут при градиенте потенциала 13...14 В/см. В этом случае достигается более высокое разрешение, чем в известном способе. Выделяются три полиморфных зоны:А 48-51 кД, В 30-36 кД, С 21-26 кД. Деление кукурбитана осуществляется на 14-18 субъединиц, четко выражена сортовая и биостинная специфичность спектров, легко отличимы гибридные спектры редких гибридов. Повышение разрешающей способности позволяет с большей достоверностью анализировать сорта, различать сходные генатины, выбраковывать резкие рибриды.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„, SU,„1498410

; (51) 4 А 01 С 1/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOIVlV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И 07НРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4282269/30-15 (22) 27.05.87 (46) 07.08.89, Бюл. Р 29 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт селекции и семеноводства овощных культур (72) П.Ф.Кононков, Л.В.Дегтяренко и Т.И.Одинцова (53) 631 ° 521.5(088.8) .,(56) Ко11ег M., Frevert Е., Kindl Н. Albumins, glyoxysomal enzymes and g1obu1ins in dry seeds of

Cucumis sativus:qualitative and quan-!

titative апа1уз1з. — Норре-Seylec s Z. Physiol. Chem. Bol. 360, 167-176, 1979. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОРТОВОЙ ЧИСТОТЫ СЕМЯН ТЫКВЕННЫХ КУЛЬТУР (57) Изобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использовано в овощеводстве, селекции и семеноводстве овощных культур. Цель изобретения — повышение разрешающей

Изобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использовано в овощеводстве, селекции и семеноводстве овощных культур.

Цель изобретения — повышение разрешающей способности метода электрофореза белка тыквенных.

Пример 1. Пробу зрелых сухих семян тыквы массой 25 мг (1/3-1/10 часть семени) измельчают в муку и обезжиривают 0,5 мл диэтилового эфира.

Экстрагируют белковую фракцию 1 мл

5Е-ного раствора.хлорида натрия в течение 3 ч при 20 С. Экстракт центриспособности метода электрофореза белка тыквенных. Для этого берут концентрирующий гель с содержанием акриламида 11,9...12,1 мас,7 по массе, а соотношение акриламида к метиленбисакриламиду в геле устанавливают в интервалах 29,0-29,2:0,8-1,0 соответственно, причем разделение ведут при градиенте потенциала 13 — 14 B/см.

В этом случае достигается более высокое разрешение, чем в известном способе. Выделяются три полиморфных зоны: А 48-51 кД, В 30-36 кД, С 2126 кД. Деление кукурбитана осуществляется на 14-18 субъединиц, четко выражена. сортовая и биостинная специ- а фичность спектров, легко отличимы гибридные спектры редких гибридов °

Повышение разрешающей способности позволяет с большей достоверхностью ( анализировать сорта, различать сходные генатины, выбраковывать резкие Д, гибриды. 4 табл.

4:ь

Фугируют при 100000 я в течение 5 мин.

Осаждают белок из супернатанта добавлением 2 мл Н О в течение ночи при

4 С и центрифугируют при 7000-19000 g в течение 5 мин. Растворяют осадок в 120 мкл буфера (0,125 М трис-HCl; рН 6,8), 4Х додецилсульфата натрия, 20Х сахарозы, 5Х р-меркаптоэтанола.

Кипятят в течение 3 мин. 3

Электрофорез кукурбитина в полу-. ченном растворе проводят в двуслойном геле: верхний (концентрирующий) содержит 5Е акриламида, а нижний (разделяющий) 12,57.. В обоих гелях массо3 1498410 вое отношение акриламида к N>N -метиленбисакриламиду составляет 29,2: 0,8.

Для приготовлен>>я гелей используют следующие растворы:

30 -ный акриламид . акриламид

29,2 г, N>N ìåòèëåíáècàêðèëàìèä

0„8 г, объем доводят водой до 100 мл; трис-НС1-буфер (pH 8,8): трис

18,2 г, додецилсульфат натрия 0,4 г, объем доводят водой до 100 мл; трис-НС1-буфер (рН 6,8): трис

6,0 r додецилсульфат натрия 0,4 г, объем, поводят водой до 100 мл; трис-глициновый буфер, рН 8,3: глицин 28,8 г, трис 6,06 г, додецилсульфат натрия 2,0 r, объем доводят водой до 2 л.

Концентрирующий гель состоит из

1,5 мл раствора акриламида, 2,5 мл 20 трис-НСl-буфера, 6 мл бидистиллированной воды, 0,06 мл 10%-ного персульфата аммония, О,Q1 мл N N, N,,N тетраметилендиамина.

Разделяющий гель состоит из 11,8 мл 225 раствора. акриламица, 8,75 мл трисНСl-буфера, 14,2 мл бидистиллированной воцы, 0,18 мл 10 -ного персульфата аммония, 0,015 мл N)N1N, N тетраметилендиамина. Размеры разделяющего геля составляют 180х140х х1,5 (мм ). Одновременно анализируют

32 образца. В качестве электродного раствора используют трис-глициновый буфер (раствор r). Образцы наносят в объеме 0,005-0,015 мл в каждую лунку. Электрофорез проводят при гра=диенте потенциала 13 В/см в течение

4,5 ч. После окончания электрофореза гель помещают в 15%-ный раствор три- 10 хлоруксусной кислоты на 1ч. В табл.) представлены результаты электрофоретического разделения кукурбитина предлагаемым способом, а в табл.2 результаты, полученные при различных граничных и промежуточных условиях.

"ак следует из табл. 2, при выходе за пределы граничных значений интервалов параметров, включенных в формулу изобретения, эффект необхо- 5О димой разрешающей способности не достигается.

Пример 2. Определение сортовой чистоты тыквы сорта "Рекорд" проводилось методом электрофореза кукур- >> битина, выделенного из покоящихся семян, по методике., изложенной в примере 1. Для анализа было взято

100 семян„

Предварительная работа с чистосортным матерна»ом сорта Рекорд позволила выделить два характерных для сорта электрофоретических спектра кукурбитина, различающихся по алле па компонента с молекулярной массой

25,4 кД, B табл, 3 представлены компоненты электрофоретического спектра кукурбитина биотипов сорта "Рекорд .

Анализ проведен для установления сортовой чистоты конкретной партии семян сорта "Рекорд электрофоретическим спектром кукурбитина с молекулярной массой субъединиц 21,9, 23,3, 23,9, 24,7 кД. Сортовая чистота, установленная таким способом, составляет 97 . (по данным грунт-контроля 98%).

Анализ этой же партии семян по известной методике не позволяет выделить примеси, равно как и биотипы в сорте "Рекорд" (табл. 4) . Все исследованные образцы обладают единым > спектром, что подтверждает более низкую разрешающую способность известной методики и невозможность ее использования в контроле сортовой чистоты тыквенных.

В табл . 4 представлены компоненты электрофоретического спектра кукурбитина сорта "Рекорд по методике

И.Koller.

Предлагаемый способ позволяет проводить анализ по отдельно взятому семени, что необходимо для определения сортовой чистоты, сократить процесс экстракции кукурбитина практически на сутки, что значительно ускоряет анализ сортов.

Формула и з о б р е т е н и я

Способ определения сортовой чистоты семян тыквенных культур по электрофоретическому спектру белка, включающий выделение кукурбитина из образца покоящихся семян, его восстановление до субъединиц,. электрофоретическое разделение субъединиц в двухслойном полиакриламидном геле на основе акриламида и N,N -метиленбисакриламида, > один из слоев которого является концентрирующим, а цругой — разделяющим, в присутствии додецилсульфата натрия и проявление разделенных субъециниц, отличающийся тем, что, с целью повышения разрешающей способ5 14984 ности, в качестве концентрирующего берут гель с содержанием акриламида

4,9-5,1 мас.Ж, а в качестве разделяющего — гель с содержанием акриламида

11,9 — 12,1 мас.Х, а соотношение ак5

I j 1 I

Мол.м, П р и м е ч а н и е. 1-5 Cucurbita реро Грибовская

Украинская

Грибовская

Сотэ, Белая 13

6-7 Cucurbita Грибовская

maxima Мраморная

8-9 Cucurbita Мускатная

mosckata Перехватка кустовая, многоплодная, 37, зимняя

Таблица2 даннь е компонентов при мол.м. (кД)

1" (1"

Режим

25,7 4 21,5

Концентрация геля (разделяющего), Х:

11,0

12,0

13,0

Концентрация геля (концентрирующего), /:

4,0

5,0 .

6,0 рН геля (разделяющего) Диф. комп.

+ +

27,0

26,6

26,0

25,7

25,4

25,0

24,8

24,5

24,3

23,9

23,4

23,0

22,8

21,5

10 6 риламида к N N -метипенбисакриламиду н геле устанавливают в интервалах

29,0-29,2:0,8-1,0 соответственно, причем разделение ведут при градиенте потенциала 13-14 В/см.

Таблица

1498410

Продолжение табл.2

Режим

23,0 22,8 21,5

25,7

Диффузные компоненты

+, + +

Диффузные компоненты »

Та блиц а 3

Биотип

Данные при мол.м.

Та блиц а 4

Иол.м., Данные при содержании комкД понентов

21,9 23,3 23,9,25,1

Редактор В. Бугренкова

Заказ 4476/1

Тираж 621

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35; Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

8,6

8,8

9,0

Соотношение акриламида к метиленбисакриламиду

29:0,8 +

29:1 +

29,2:0,8 +

29,2:1

Градиент,по тенциала, В/см

13 +

Данные компонентов при,мол.м. (кД)

25,4 23,4

2 1,9 23,3 . 23,9 25,1 25,4

С ост авит ель А. Прок азин

Техред М,Дидик Корректор М.Самборская