Способ получения -2-глобулина, специфического для мекония плодов человека

Способ получения -2-глобулина, специфического для мекония плодов человека

Реферат

 

Изобретение относится к медицинской иммунологии, а именно к иммунохимии эмбриональных и злокачественных тканей и может быть использовано для получения специфического для кишечного эпителия b - 2 - глобулина, сохраняющегося в новообразованиях кишечного генеза. Целью изобретения является получение антигена с электрофоретической подвижностью b - 2 - глобулина, специфического для мекония плодов человека. Цель достигается путем экстрагирования мекония фосфатным буфером с рН 7,6 с последующим выделением белковой фракции обработкой сульфатом аммония в интервале 50 - 70% насыщения, гельхроматографии с отбором фракции с относительной мол. м. 91000 8000 и ионообменной хроматографии на ДЕАЕ - целлюлозе при рН 8,0 + 0,1 с отбором фракции, элюирующейся 0,03 М NaCl. В результате использования способа достигается получение препарата антигена - 2 - глобулина. Антисыворотки и выделенные из них антитела, полученные при иммунизации препаратом этого антигена, могут быть использованы в экспериментальных и практических патоморфологических исследованиях при уточнении и верификации гистологического диагноза первичных и метастических новообразований человека.

Изобретение относится к медицинской иммунологии, а именно к иммунохимии эмбриональных и злокачественных тканей и может быть использовано для получения специфического для кишечного эпителия -2-глобулина, сохраняющегося в новообразованиях кишечного генеза. Это свойства антигена позволяет употреблять его в качестве тканеспецифического маркера при иммуногистохимическом исследовании первичных и метастатических новообразований в процессе дифференциального патоморфологического диагноза. Целью изобретения является получение антигена с электрофоретической подвижностью -2-глобулинов, специфических для мекония плодов человека. П р и м е р. Меконий отделяют от кишечника плодов человека и смешивают с равным объемом фосфатного буфера (рН 7,6) на магнитной мешалке. Нерастворившиеся компоненты отделяют центрифугированием при 10000g в течение 30 мин. Надосадок используют для получения антигена. К 100 мл экстракта мекония медленно на магнитной мешалке добавляют 31 г сульфата аммония (50% насыщения) и мешают после растворения соли 30 мин. Осадок отделяют центрифугированием (1000g, 30 мин). К надосадку на магнитной мешалке при постоянном помешивании добавляют 14 г сульфата аммония (70% насыщения), мешают 30 мин. Осадок ресуспендируют в 10 мл дистиллированной воды и сутки диализуют против 5 л фосфатного буфера при 4^оС. Экстракт осветляют центрифугированием (15000g, 30 мин). Надосадок подвергают гель-хроматографии на сефакриле S-300 (Pharmacia, Швеция) в колонке (1,8х60 см), уравновешенной фосфатным буфером, с отбором белковых фракций с относительной мол.м. 91000 8000. Слитые вместе фракции диализуют 4 суток с 8-кратной заменой 0,01 М трис-НСl буфера (рН 8,0 0,1) при 4^оС, а затем осветляют центрифугированием (15000g, 30 мин). Проводят ионообменную хроматографию на колонке с ДЕАЕ-целлюлозой (3х10) см в том же буфере. -2-Глобулин сорбируется на ионообменнике. Перед основной элюцией проводят дополнительную 0,01 М NaCl в рабочем буфере, после чего колонку промывают 0,03 М NaCl в рабочем буфере фракция содержит -2-глобулин. Полученный антиген используют для иммунизации кроликов. На иммунизацию 1 кролика Шиншилла (4-5 кг) используют около 100 мкг антигена. Антисыворотка от этих кроликов моноспецифична и реагирует с -2-глобулином, содержащимся в меконии. Таким образом выделен антиген с подвижностью -2-глобулина из мекония плодов человека.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ -2-ГЛОБУЛИНА, СПЕЦИФИЧЕСКОГО ДЛЯ МЕКОНИЯ ПЛОДОВ ЧЕЛОВЕКА, путем экстракции фосфатным буферным раствором при рН 7,6, центрифугированием с последующей обработкой надосадка сульфатом аммония, отбором осадка в интервале 50 70% насыщения, диализа, гель-хроматографии с отбором фракции 91 8 кД, которую затем подвергают ионообменной хроматографии на ДЕАЕ-целлюлозе при рН 8,0 и получают целевой продукт элюцией 0,03 М NaCl.