Способ получения реагента r @ для тестирования компонента с @ комплемента человека

Способ получения реагента r @ для тестирования компонента с @ комплемента человека

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к получению реагентов для определения компонентов системы комплемента человека, а именно для компонента С<SB POS="POST">2</SB> комплемента человека, и может быть использовано для диагностики аутоиммунных заболеваний, в лабораторной практике для определения активности С<SB POS="POST">2</SB> при его выделении, очистке и изучении свойств. Для повышения чувствительности реагента Р<SB POS="POST">2</SB> сыворотку крови человека после нагревания до температуры 50°С в течение 30-40 мин охлаждают и доводят до рН 6,0-7,0

после чего реагент замораживают при -70°С или лиофильно высушивают и хранят при -4°С.

союз соВетских соцИАлистических

РЕСПУБЛИК @4 А61К3516

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4364069/28-14 (22) 15.01.88 (46) 30.08.89. Бюл. № 32 (71) Институт прикладной молекулярной биологии и Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания к-рови (72) Л. В. Козлов, Т. В. Никифорова и H. Н, Кузнецова (53) 612.015 (088.8) (56) Козлов Л. В. и др. Модифицированные методы определения функциональной активности факторов комплемента С, Сз, С4 и С5. Биоорганическая химия, 1982, т 8, № 5, с. 652 — 659.

Изобретение относится к медицинской иммунологии, конкретно к получению реагентов для определения компонентов системы комплемента человека, а именно реагента К2 и может быть использовано при диагностике аутоиммунных заболеваний, таких как системная красная волчанка, ревматоидный артрит и др. для определения комплементарного состояния организма человека. Реагент может быть использован также в лабораторной практике для определения активности компонен га С2 комплемента человека при его выделении, очистке и изучении свойств.

Цель изобретения — повышение чувствительности реагента.

3а чувствительность реагента принимают то минимальное число эффективных молекул

С2 в 1 мкл сыворотки крови, которое определяется с использованием данного реагента R2.

„„SU„„1503821 A 1

2 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕАГЕНТА К

ДЛЯ ТЕСТИРОВАНИЯ КОМПОНЕНТА С

КОМПЛЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА (57) Изобретение относится к получению реагентов для определения компонентов системы комплемента человека, а именно для компонента С2 комплемента человека и может быть использовано для диагностики аутоиммунных заболеваний, в лабораторной практике для определения активности С при его выделении, очистке и изучении свойств.

Для повышения чувствительности реагента

Р сыворотку крови человека после нагревания до температуры 50 С в течение 30—

40 мин, охлаждают и доводят до рН 6,0—

7,0, после чего реагент замораживают при — 70 С или лиофольно высушивают и хранят при — 4 С.

Эта велич и на соответствует та нген су мав угла наклона прямолинейного графика зависимости Z (число так называемых «эффективных» молекул С на один сенсибилизированный эритроцит барана) от коли- М чества сыворотки в крови (как источ- (,ф ника С2) . Ю

Величина Z определяется по формуле

Z=ln1К вЂ” К„) (K» — А) ), где К., К„и А величины оптической плотности супернаталта после центрифугирования эритроцитов при 412 нм соответственно в контроле на полный лизис эритроцитов, в контроле на пеагент и в опыте.

Изобретение поясняется следующими примерами.

Пример 1. Сыворотку крови человека (пул от 10 доноров) разливают в тонкостенные пробирки по 2 мл и выдерживают в водяном термостате, контролируя температуру (50 С) внутри пробирок. Инакти1503821

Формула изобретения

Составитель Н. Литвиненко

Редактор М, Недолуженко Техред И. Верес Корректор Н. Борисова

Заказ 5170/7 Тираж 643 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат «Патент», г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 вацию проводят 35 мин. Затем пробирки ставят на 5 мин в стакан со льдом для остановки инактивации.

Содержимое пробирок сливают вместе и доводят рН до 6,5, добавляя 0,15 М НС1 и контролируя рН по рН-метру.

Полученный таким образом реагент замораживают при -70 С, либо лиофильно высушивают и хранят при -4 С.

Полученный реагент имел чувствительность 0,856, тогда как известный реагент обладает чувствительностью 0,545+ -0,081, таким образом чувствительность реагента увеличилась в 1,473+-0,137 раза.

Пример 2. Способ осуществляется так же, как и в примере 1, однако рН .сыворотки крови составляет 6,0. Чувствительность реагента при этом составляет 0,856 и превышает чувствительность известного реагента в 1,568 раза.

Пример 3. Способ осуществляют так же, как в примере 1, однако рН сыворотки крови составляет 7,0. Чувствительность реагента составляет 0,782, а увеличение чувствительности реагента по сравнению с известным способом его получения составляет

1,432 раза.

Таким образом, чувствительность реагента,полученного по предлагаемому способу, в 1,5 р а за вы ш е чу в ст в ител ь ности реа ген та по известному способу, причем значительное увеличение чувствительности реагента достигается за счет простого приема доведения рН до заданного значения.

Способ получения реагента Кг для тес15 тирования компонента С комплемента человека путем инактивации в сыворотке крови компонента С2 нагреванием при 50 С в течение 30 — 40 мин, лиофильным высушиванием, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности целевого продукта, после нагревания сыворотку крови охлаждают и доводят до рН 6,0 — 7,0.