Способ диагностики гипертонической болезни

Способ диагностики гипертонической болезни

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине - кардиологии, в частности к способам диагностики и профилактики гипертонической болезни. Целью изобретения является повышение точности способа и сокращение сроков диагноза . Поставленная задача достигается тем, что фрагментированные мембраны эритроцитов адсорбируют на поливинилхлоридных пластинках и оценивают степень связывания с ними моноклональных антител, полученных к внутриклеточным кальций-аккумулирутощим мембранам сердечной ткани. После сравнения количества связ анных монокловальных антител с мембранами обследуемых и практически здоровых лиц делают вывод о предрасположенности к гипертонической болезни. Для больных гипертонической болезнью характерно увеличение на ; 35% и более количества связанных моноклональных антител. § СО

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСГ)УБЛИХ

119) (1È (5) )5 С 01 N 33/53

ЬЬМЮаНАЯ

Л ДЕ)) ТНС вЂ” «) Е ИМЩЛКАЛ ),,БЛИОТЕР.А

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (46) ) 5. 05. 90. Бюл. В ) 8 (21) 4216427/28-14 (22) 30. 03. 87 (71) Всесоюзный кардиологический научный центр АМН СССР .(72) В.А. Логинов, С.А. Сухоплечев, Д.О ° Левицкий, С.И. Сырбу, Б.И. Минченко, О.В. Рохлин, Г.Г. Арабидэе и В.В. Петров (53) 615.375 (088.8) (56) Canessa М. and oth — Increased

sodium lithium countertransport in

red cells of patients with essential

hypetension. New England J. Medicine, 1980, 302, р. 772=776, (54 ) СПОСОБ .ДИАГНОСТИКИ ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЭНИ (57) Изобретение относится к медицине — кардиологии, в частности к способам диагностики и профилактики

Изобретение относится к медицине — кардиологии, в частности к способам диагностики гипертонической болезни.

Целью изобретения является повы- . шение точности и сокращение сроков диагноза.

Способ осуществляют следующим образом.

Этап 1 ° Подготовка проб. Лизированные эритроциты получают центрифугированием и обрабатывают ультразвуком 10 с при амплитуде колебания источника 20 (генератор "Kerry"

"Branson" или аналогичный). Просвет- ленную суспензию фрагментированных гипертонической болезни. Целью изобретения является повышение точности способа и сокращение сроков диагноза. Поставленная задача достигается тем, что фрагментированные мембраны эритроцитов адсорбируют на поливинилхлоридных пластинках и оценивают . степень связывания с ними моноклональных антител, полученных к внутриклеточным кальций-аккумулирующим мембранам сердечной ткани. После . сравнения количества связанных моноклональных .антител с мембранами обследуемых и практически здоровых лиц делают вывод о предрасположенности к гипертонической болезни.

Для больных гипертонической бо лезнью характерно увеличение на, 357. и более количества связанных моноклональных антител . мембран эритроцитов отмывают 2 pasa раствором, содержащим !40 мМ КаС1 °

10 Ж КС1, 10 мМ НЕРЕЯ-трис рН 7,4 (буфер,А).Полученные пробы можно хранить до 1 месяца при температуре не выше -20 С.

Этап 2. Радиоиммунологический тест ,(РИТ). 1 мкг фрагментированных эритроцитарных мембран (этап 1) в 100 мкл буфера А наносят на поливинилхлоридную ячейку (" Flow" Великобритания) и инкубируют 1,5 ч при комнатной температуре, после чего проводят трехкратную отмывку ячейки фосфатным буфером, содержащим 0,057 твин-80 или 0,57 бычий сывороточнь|й .альбу193

3 1505 мин. Ячейку заполняют фосфатным буфером и инкубируют 1 ч. Затем в ячейку вносят 100 мкл (1 мкг) моноклональных антител, полученных после иммунизации мышей суспензией внутриклеточных кальций-аккумулирующих мембран сердца собаки и клонирования клеток (клон ВСКК(П) 96Д) после гибридизации спленоцитов мыши с миеломными клетками РЗ Ag 8.653.

После 1,5-часовой инкубации ячейку отмывают фосфатным буфером с 0,05Х твин-80 и заполняют 100мкл буфера

А, содержащего меченые по 1 антитела кролика к легким цепям иммуноглобулинов мыши (250000 имп./мин на одну ячейку). После 1,5-часовой инкубации и отмывки фосфатным буфером ячейку просчитывают в -спек-. трометре ° Результат представляют в виде цифр, соответствующих числу импульсов за одну минуту, приходящихся на одну пробу. Превышение связываиия антител более чем íà 35Х по сравнению со стандартными пробами (фрагментированные эритроциты практически здоровых людей) свидетельствует в пользу гипертонической болезни. Подготовка проб для РИТ занимает 2 ч, радиоиммунологический тест продолжается в среднем 6 ч, таким образом весь анализ заканчивается через 8 ч после забора крови у больного.

С помощью РИТ были обследованы следующие группы людей.

Больные гипертонической. болезнью.

У 18 мужчин и 4 женщин на основании клинического обследования по двухэтаккой схеме исследования больных с артериальной гипертензией диагностирована гипертоническая болезнь

Ц ст. по классификации В03 (1980 ã.)

Среднее артериальное давление (АД): систолическое 160 мм рт.ст., диастолическое 101 мм рт .ет.

Больные артериальной гипертензией почечного генеэа составили

rpynay иэ 16 мужчин и 4 женщин.

Причиной артериальной гипертензии у 10 больных был хронический пиелонефрит, у 10 - хронический гломерулокефркт. Среднее АД у больных хроническим пиелонефритом: систолическое 167 мм рт.ст., диастолическое

98 им рт.ст. Среднее АД у больных . хроническим гломерулонефритои: сис

Э

55 толическое 194 мм рт. ст., диастолическое 117 мм рт.ст.

Практически здоровые лица составили группу из 10 мужчин и 4 женщин беэ указаний на артериальную гипертензию в прошлом. Среднее АД: систолическое 120 мм рт.ст., диастолическое 85 мм рт.ст.

После подготовки проб и проведения РИТ с фрагментированными мембранами эритроцитов практически здоровых лиц быпи выбраны пробы, показатель РИТ для которых соответствовал среднестатистическому значению связывания моноклональных антител для всей группы здоровых лиц. Эти пробы были выбраны в качестве стандартов при обследовании больных (примеры).

Обследование группы больных гипертонической болезнью 11 ст. покаэалсГ, что количество йоноклональных антител, связанных с фрагментами мембран эритроцитов больных гипертонической болезнью, превышает в среднем на 35Х количество антител,свяэанных с препаратами мембран из крови здоровых. людей.

Сравнительный корреляционный анализ показателей натрий-литиевого обмена и РИТ у больных гипертонической болезнью показал, что наибольшие коэффициенты корреляции определяются при сопоставлении натрий-литиевого обмена со средним АД после функциональной пробы ВЭМ (велоэргометрическая нагрузка) и РИТ со средним

АД при поступлении в клинику. Обнаруженная линейная эависимость между количеством связанных моноклональных антител .и средним АД позволяет использовать данный метод для диагностики гипертонической болезни и в отсутствие функциональных нагрузок.

В результате РИТ показано, что достовернык различий в связывании моноклональных антител фрагментами эритроцитов здоровых людей и больных вторичньмс гипертензиями не наблюдается ° Таким образом, радиоиммунологический способ позволяет не только идентифицировать гипертоническую болезнь, но может применяться для дифференциальной диагностики артериальных гипертенэий.

П р и и е р 1. Больной А., 41 год.

Среднее АД 123 мм рт.ст. (систолическое давление 150 мм рт.ст., диасто1505193 лическое — 110 мм рт.ст.).На ЭКГ— признаки гипертрофии миокарда левого желудочка сердца. Радиоиммунологическое тестирование — связывание мо:;оклональных антител увеличено на

35 . относительно нормы. Параметры натрий-литиевого обмена до

295 мкмоль/л клеток/ч ° Предварительнын диагноз — гипертоническая болезнь II ст. подтвердился при дальнейшем клиническом обследовании.

П р и и е р 2. Больной Б., 49 лет.

Среднее АД при поступлении в клинику

138 мм рт.ст. (систолическое давление 175 мм рт.ст., диастолическое—

120 мм рт.ст.). Ha ЭКГ признаки гипертрофии миокарда левого желудочка.

Натрий-литиевый обмен - 267 мкмоль/л клеток/ч. Радиоиммунологический тест 53 . После клинического обсле" дования поставлен диагноз — гипертоническая болезнь II ст.

В ряде случаев результаты, полученные после измерения скорости натрий-литиевого обмена, не дают указаний на гипертоническую болезнь., но после радиоиммунологического обследования клинический диагноз — гипертоническая болезнь подтверждается (пример 3).

Пример 3. Больной В., 58лет.

Среднее АД при поступлении в клинику 137 мм рт.ст. (систолическое давление 170 мм рт.ст., диастолическое120 мм рт.ст.). Скорость натрий-литиевого обмена — 148 мкмоль/л клеток/ч (норм. — 220 мкмоль/л клеток/ч).

Радиоиммунологический тест: превышение на 53 связывания моноклональных антител, характерного для стандартных проб. После проведения клинического обследования поставлен диагноз — гипертоническая болезнь.

II ст.

Пример 4. Больной .Г., 40 лет.

Среднее АД при поступлении 153 мм рт.ст. (систолическое давление 200 мм рт.ст., диастолическое 130 мм рт.ст.). Натрий-литиевый обмен — 145 мкмоль/л клеток/ч, радноиммунологическое тестирование 1ЗХ. В данном случае ни по показателям натрий-литиевого обмена,ни по радионммунологическому тесту аргументов в пользу гипертонической болезни нет. Окончательный диагноз в стационаре — хронический пиелонефрит, артериальная гнпертензия.

Пример 5. Больной Е.,47 лет.

Среднее артериальное давление

110 мм рт.ст. (систолическое давление 150 мм рт.ст., диастолическое

90 мм рт.ст.). Натрий-литиевый обмен - 114 мкмоль/л клеток/ч, радиоиммунологическое тестирование ЗХ.

Окончательный диагноз в стационаре гипертоническая форма хронического диффузного гломерулонефрита. Данные радноиммунологического теста и результаты натрий-литиевого обмена йодтверждают отсутствие у больного

15 мембранньм нарушений, свойственньм гипертонической болезни.

Увеличение связывания моноклональньм антител у больных гипертонической болезнью, отсутствие дос20 топерной разности по радиоиммуиологическому тесту у практически здоровых лиц и лиц, страдающих вторичными артериальньяи гипертензиями, корреляция между цифрами артериаль25 ного давления и радиоиммунологическим тестом, совпадение результатов радиоиммунологического теста и показателей натрий-литиевого обмена позволяют применять радиоиммуноло30 гнческий способ диагностики в качестве теста по выявлению гипертонической болезни.

Предлагаемый способ оценки мембранных нарушений в эритроцитах упрощает процедуру анализа, так как

35 не требует работы с атомно-эмиссионным спектрометром и контроля функ- ционального состояния эритроцитов в процессе подготовки проб,. по4р вышает точностb анализа, так как в ряде случаев диагноз гипертоническая болезнь подтверждается только радиоиммунологическим тестированием. (пример 3), ускоряет проведение ис45 следования, поскольку от момента забора крови до получения конечного ре зультата проходит не более 8 ч, сокращает число измерений с 20 до 1, позволяет провести дифференциальную

50 диагностику симптоматических (вторичных) гипертоний. Предлагаемый способ может быть применен в эпидемиологических исследованиях, так как делает возможным накопление материала

55 в течение месяца, а затем проведе.ние одномоментного анализа. ,Формула изобретения

Способ диагностики гипертонической болезни, включающий исследование

1505193

Составитель И. Башкаев

Техред M.Дидик Корректор М. Макси п шинец

Редактор Л. Павлова

Заказ 535

Подписное

Тирах 512

ЬНЮЯИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Иосква, 3-35, Рауиская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 мембран зритроцитов пациента, о т-. л и ч а в 5 и и с я тен, что, с целью повышения точности и совращения сроков диагноза, к исследуеньн фрагментированным ненбранан зритро-: цитов добавляют ноноклоиальные антитела гибридонм BCKK(n)-96Д к внутриклеточным кальций-аккумулирувщим мембранам сердечной мышцы кролика И ( антитела к легким цепям нимуноглобулинов варши, меченые 1, н при увеличении связывания антител с эритроцитами более чем на 353 по сравнению с пробой, содераащей эритроциты здоровых людей, диагностируют гипертоническую болезнь.