Способ получения иммуностимулирующих факторов из тимуса серого кита

Способ получения иммуностимулирующих факторов из тимуса серого кита

Реферат

 

Изобретение относится к химикофармацевтической промышленности. Для повышения активности целевого продукта солевой гомогенат тимуса серого кита центрифугируют на холоде. Супернатант обрабатывают охлажденным ацетоном. Ацетоновый порошок растворяют в фосфатном буфере с щелочным значением рН и подвергают гель-хроматографии на сефадексе G-25. Целевой продукт извлекают из фракции, имеющей максимальный уровень поглощения 280 нм на спектрофотометре.

Изобретение относится к медицине, а именно к технологии получения биологически активных препаратов из животного сырья, и может быть использовано в химико-фармацевтической промышленности, для получения лекарственных средств для лечения иммунодефицитных состояний. Цель изобретения повышение активности целевого продукта. Цель достигается за счет того, что ацетоновый преципитат экстракта тимуса дополнительно растворяют в буферном растворе низкой ионной силы с щелочным значением рН и подвергают гель-хроматографии на сефадексе G-25. Целевой продукт извлекают из фракций, имеющих максимальный уровень поглощения при 280 нм. Способ осуществляют следующим образом. П р и м е р. 1 кг свежего тимуса серого кита очищают от крови, жира, капсулы и гомогенизируют в 3 л холодного 0,15 М раствора NaCl в размельчителе тканей. Полученный гомогенат медленно перемешивают в течение 3-4 ч при +4^оС. Супернатант отделяют центрифугированием при 3000 об/мин в течение 60 мин при +4^оС. К 1 л супернатанта приливают 5 объемов ацетона, охлажденного до -10^оС, и через каждый 3 ч еще по 1 л охлажденного ацетона 3 раза. Образовавшийся в течение 15-18 ч при +4^оС осадок промывают 2-3 раза охлажденным ацетоном и высушивают в воронке Бюхнера. Высушенный осадок растворяют в 10 объемах 0,001 М фосфатного буфера с рН 12,0 и выдерживают 1 ч при +20^оС, постоянно перемешивая. Нерастворившийся осадок удаляют центрифугированием 20 мин при 3000 об/мин. Концентрацию белка в супернатанте доводят до 10 мг/мл, и 5 мл раствора наносят на колонку с сефадексом G-25, уравновешенную тем же буфером. Элюирование проводят со скоростью 10 мл/ч. Фракции собирают по 5 мл. Оптическое поглощение элюата измеряют на спектрофотометре при длине волны 280 нм. Размер колонки 2,6 х 50 см. Целевой продукт извлекают из фракций, имеющих максимальный уровень поглощения при 280 нм. Весь материал элюируется двумя пиками, причем первый выходит с внешним объемом. Выход целевого продукта из 1 кг ткани составляет 0,28 г для первого пика и 0,25 г для второго. Обе фракции обладают высокой иммуностимулирующей активностью. Фракция 1 активна в тесте розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК) в концентрации 0,001-0,01 мкг/2х 10⁶ клеток. При введении гидрокортизондепрессированным мышам восстанавливает антителообразование в дозах 10^-4 10^-3 мкг/мышь. 100%-ное восстановление отмечается при использовании 5 х 10^-4 мкг/мышь, что в 100 раз превышает активность препарата в прототипе. Фракция 2 обладает активностью в тесте Е-РОК в дозе 0,1 мкг/2 х 10⁶. В дозе 0,05 мкг защищает от литического действия гидрокортизона 50% кортикальных тимоцитов мышей. Таким образом, предложенный способ позволяет получить иммуностимулирующие факторы тимуса серого кита с высокой специфической активностью.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩИХ ФАКТОРОВ ИЗ ТИМУСА СЕРОГО КИТА путем гомогенизации тимуса в солевом растворе, выдерживания при +4^oС, центрифугирования, обработки супернатанта ацетоном, отличающийся тем, что, с целью повышения активности целевого продукта, ацетоновый порошок дополнительно растворяют в буферном растворе низкой ионной силы с щелочным значением pH и подвергают гель-хроматографии на сефадексе G-25, а целевой продукт извлекают из фракций, имеющих максимальный уровень поглощения при 280 нм.

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 10.09.1995

Номер и год публикации бюллетеня: 11-1998

Извещение опубликовано: 20.04.1998