Способ получения пептидов
Иллюстрации
Реферат
Изобретение касается пептидов , в частности, получения соединений общей формулы 1: R<SB POS="POST">1</SB>-C(O)-N H-CHK-C(O)OH, где K--(CH<SB POS="POST">2</SB>)<SB POS="POST">2</SB>-C(O)NHchr<SB POS="POST">2</SB>-C(O)R<SB POS="POST">3</SB> R<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">6</SB> - алкил R<SB POS="POST">2</SB>-H R<SB POS="POST">3</SB> - остаток аминокислоты: -NH-CHX-(CH<SB POS="POST">2</SB>)<SB POS="POST">N</SB>-C(O)OH X - H, C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">2</SB> - алкил, оксиметил N=0-4, обладающих иммуностимулирующей и антиинфекционной активностью, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых более активных и менее токсичных веществ указанного класса. Синтез ведут дегидратацией соединения формулы 2: R<SB POS="POST">1</SB>C(O)NH-CHY-C(O)OR<SB POS="POST">4</SB>, ГДЕ Y--(CH<SB POS="POST">2</SB>)<SB POS="POST">2</SB>-C(O)NH-CR<SB POS="POST">2</SB>H-C(O)OH R<SB POS="POST">1</SB> И R<SB POS="POST">2</SB> СМ.ВЫШЕ R<SB POS="POST">4</SB>- БЕНЗИЛ, В ВИДЕ СУКЦИНИМИДНОГО ЭФИРА С ПОМОЩЬЮ СОЕДИНЕНИЯ ФОРМУЛЫ 3: NH<SB POS="POST">2</SB>-CHX-(CH<SB POS="POST">2</SB>)<SB POS="POST">N</SB>-C(O)OH, где N и X см.выше, с последующим при необходимости избирательным удалением защитных групп путем гидрогенолиза над окисью алюминия. Новые вещества малотоксичны и обеспечивают выживаемость от пневмонии (у мышей) до 100%. 1 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (51) 4 С 07 К 5/06 // А 61 К 37/02
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н AATEHTY (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ (57) Изобретение касается пептидов, в частности получения соединений (п1 общей ф-лы I: R,-C(0)-NH — СНК-С(О)ОН, (.1 где К вЂ” -(СН г) -C(0) NHCHR -С(О) R»
R < — С,-са алкил; Н г - Н; Кь ос таток аминокислоты: -NH-СНХ-(СН ) „ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ fKHT СССР
1 (21) 4028527/23-04 (22) 24. 11. 86 (31) РСТ/US 85/02351 (32) 25. 11. 85 (33) US (46) 07.09.89. Бюл. В Ф 33 (71) Пфайэер Инк (US) (72) Джеймс Патрик Риззи (US) (53) 547.964.4.07 (088.8) (56) Шредер Э., Любке К. Пептиды. ч. I. — М., Мир, 1967, с. 116.
Изобретение относится к способу получения пептидов — новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине.
Цель изобретения — получение новых пептидов — малотоксичных соединений, обладающих более высокой иммуностимулирующей и антиинфекционной активностью.
Пример 1» N-Гептаноил-D -гамма-глутамил-глицил-D-алании (Rt СН (Снг) 5 Rt — Н
D и R ) — -МНСН(СН 3) СОгн) „„SU„„1507212 А 3
-С(О) ОН; Х вЂ” Н, С,-С -алкил, оксиметил, n = 0-4, обладающих иммуностимулирующей и антиинфекционной активностью, что может быть использовано в медицине. Цель — создание новых более активных и менее токсичных веществ указанного класса. Синтез ведут дегидратацией соединения ф-лы II: R,C(0)NH-CHY-С(0)ОН, где
Y — - (СН,),-С(О) НН-СК,Н-С(О) ОН; К,— и Кг см. выше; R q — бензил, в виде сукцинимидного эфира с помощью соединения ф-лы III: NH г-CHX (Снг) и
-С(0)ОН, где п и Х см. выше, с последующим при необходимости избирательНым удалением защитных групп путем гидрогенолиза над окисью алюминия.
Новые вещества малотоксичны и обеспечивают выживаемость от пневмонии (у мышей) до 1ООХ 1 табл.
А. N-Гептаноил-D-гамма-глутамил (альфа-бензиловый эфир)-глицин.
К раствору 897 мг (13,0 ммоль) глицина и 1,3 r (13,0 ммоль) триэтиламина в 10 мл воды добавляют 5,0 r (11,2 ммоль) N-гептаноил-D-гамма-глутамил(альфа-бензиловый эфир)-оксисукцинимидного эфира в 100 мл диоксана. Полученную реакционную смесь оставляют для перемешнвания при комнатной температуре в течение 80 ч.
Этот раствор затем выливают в 300 мл этилацетата, отделенную органическую фазу промывают 103-ной хлористоводо-. родной кислотой, водой и раствором
15 (R q CH (CHq) 3 1507212 рассола. Органическую фазу отделяют, высушивают над сульфатом магния и концентрируют в условиях вакуума до сухого состояния. Остаток превращают
5 в порошок с помощью простого диэтилового эфира и фильтруют под слоем азота 3,43 r (выход 747).
В. N-гептаноил-D-гамма-глутамил-глицил-D-алании. 10
К раствору 2,0 г (4,78 ммоль)
N-гептаноил-D-гамма-глутамил(альфа-бензиловый эфир)-глицина. 1,75 г (5 ммоль) соли паратолуолсульфокис1 лоты сложного бензилового эфира
D-аланина, 506 r (5 ммоль) триэтиламина и 675 мг (5 ммоль) 1-оксибензотриазола в 100 мл тетрагидрофурана добавляют 3,03 г (7,17 ммоль) 1-циклогексил-3-(2-морфолиноэтил)карбоди- 20 имидного мета-п — толуолсульфоната.
Эту реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение
18 ч и выливают в 300 мл этилацетата, после чего органическую фазу отде- 25 ляют и промывают 107-ной хлористоводородной кислотой, водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и раствором рассола. Органическую фазу отделяют, высушивают над сульфатом маг- 30 ния и концентрируют в условиях вакуума. Остаток превращают в порошок с помощью простого диэтилового эфира и фильтруют под слоем азота 2,7 r. 2 г твердого вещества в 75 мл метанола . г с 400 мг 10%-ной гидроокиси палладия на древесном угле взбалтывают в атмосфере водорода при начальном давлении, равном 50 фунтам на 1 кв.дюйм, в течение 4 ч. Катализатор фильтруют, 40 фильтрат выпаривают при пониженном давлении, после чего остаток растворяют в воде и лиофилизируют с образованием 1,23 r (выход 907) целевого продукта в виде белого твердого ве- 45 щества. Полученное соединение охарактеризовано с помощью ЯМР-спектроскопии.
Пример 2. N-Гептаноил-D-гамма-глутамил-глицил-глицин
К холодному раствору (О С) 13,0 г (31 ммоль) N-гептаноил-D-гамма-глутамил(альфа-бензиловый эфир)-глицина и 3,91 r (34 ммоль) N-оксисукцинамида в 400 мл тетрагидрофурана добавляют 7,0 r (34 ммоль) дициклогексилкарбодиимида. Эту смесь оставляют для перемешивания при О С в течение
1 ч и при комнатной температуре в течение 18 ч. Твердые вещества фильтруют и фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Остаток превращают в порошок с помощью простого диэтилового эфира и фильтруют под слоем азота с образованием 15,4 r (987) целевого промежуточного продукта.
В. N-Гептаноил-D-гамма-глутамил-глицил-глицин
К 2,0 r (3,07 ммоль) сложного оксисукцинимидног0 эфира N ãåïòàíîèë-D-гамма-глутамил(альфа-бензиловый эфир)-глицина в 100 мл диоксана добавляют 446 мг (5,95 ммоль) глицина и 0,55 мл (3,9 ммоль) триэтиламина в 1О мл воды. Полученную реакционную смесь оставляют для перемешивания при комнатной температуре в течение
18 ч. Этот раствор выливают в 100 мл этилацетата, после чего органический слой промывают 2,57-ной хлористоводородной кислотой, водой и раствором
Ъ рассола. Органический слой отделяют, высушивают над сульфатом магния и концентрируют до сухого состояния °
Остаток превращают в порошок с помощью простого диэтилового эфира и фильтруют под слоем азота с образованием 1,7 г белого твердого вещества. 1,5 г твердого вещества в 75 мл метанола, содержащего 200 мг 10Х-ной гидроокиси палладия на древесном угле, встряхивают в атмосфере водорода при давлении 50 фунтов на 1 кв.дюйм в течение 3 ч. Катализатор фильтруют, фильтрат концентрируют в условиях вакуума. Остаток растворяют в воде и лиофилизируют с образованием 1,12 r (выход 90X) целевого продукта. Соединение охарактеризовано с помощью
ЯМР-спектроскопии.
Пример 3. К-Гептанол-D-гамма-глутамил-глицил-D-cepuu
CH (CH ) и Rq — -NHCH CO H) °
А. Сложный оксисукцинамидный эфир N-гептаноил-D-гамма-глутамил (альфа-бензиловый эфир)-глицина. и К, — -ИНСН(СН,ОН)СО,Н).
Ю
12 6
Пример 7. N-Гептаноил-D-гамма глутамил-глицил-5-амин< f.åH Tàновая кислота (R, — СН (СН ), Rq — H u R з — -NH(CH ) СО Н).
В результате замены 3-аминомасляHoLt кислоты 470 мг (4,0 ммоль) 5-аминопентановой кислоты и выполнения процедуры, описанной в примере Ь,получено 520 мг (выход 42X) целевого продукта, т.пл . 122-124 С. Соединение охарактеризовано с помощью
SIMP-спектроскопии.
Пример 8, N-Гептаноил-D-гамма-глутамил-глицил-6-аминогексановая кислота (R — СН з(СН ) r, R — Н и Кз ИН(СН ) СО Н).
Снова повторяют процедуру, описанную в примере 6, с заменой 3-аминомасляной кислоты 530 мг (4,0 ммоль)
6-аминогексановой кислоты, в результате чего получено 520 мг (выход
407) целевого продукта в виде белой пены. Соединение охарактеризовано с помощью ЯМР-спектроскопии.
Проведены биологические исследования соединений, полученных предлагаемым способом, и соединений сравнения на мышах Ва1Ь С, зараженных Kleb"
siella, вызывающих пневмонию, Результаты приведены в таблице, где указан метод введения испытуемых соединений, процент выживания, т.е. процент животных, выживших при введении испытуемых соединений, и плацебо, т.е. процент животных, выживших в случае, когда проперат не вводился.
Испытуемые соединения вводились за 24 ч в указанных дозах перед зара" жением и в укаэанных дозах во время заражения. Испытания проводились в сравнении с известным соединением
FK-156. Что касается токсичности,то в испытуемЫх дозах предлагаемые соединения не проявляли таковой, их можно отнести к категории малотоксичных соединений.
Проведенные испытания показали, что предлагаемые соединения малотоксичны и обладают более высокой иммуностимулирующей и антиинфекционной активностью, повышая выживаемость мыпей Ва1Ь С Klebsiella, вызывающей пневмонию.
Формула изобретения
Способ получения пептидов общей формулы
5 15072
Используя в качестве исходных продуктов 2,0 r (3,98 ммоль) сложного
/ оксисукцинамидного эфира N-гептаноил-D-гамма-глутамил(альфа-бензиловый эфир)-глицина, 780 мг (4,02 ммоль)
О-бензил-D-серина и 0,556 мл (4,02 ммоль) триэтиламина при выполнении процедуры, описанной в примере ЗВ, получают 902 мг (выход 767) целевого продукта, т.пл. 130-132 С.
Соединение охарактеризовано с помощью ЯМР-спектроскопии.
Пример 4. N-Гептаноил-D-гамма-глутамил-глицил-D-альфаамино15 масляная кислота (R, — СН (СН )s;
К Н и К ИНСН(СН СН )СО Н).
Повторяют процедуру, описанную в примере ЗВ, с использованием в качестве исходных продуктов 2,0 r (3,98 ммоль) сложного N-гептаноил-D-гамма-глутамил(альфа-бензиловый эфир)-глицилоксисукцинамидного эфира, 400 мг (4,02 ммоль). D-альфа-аминомасляной кислоты и 0,556 мл (4, 02 ммоль) триэтиламина, в результате чего получено 632 мг (выход
577) целевого продукта, т.пл. 140141 С. Соединение охарактеризовано с помощью ЯМР-спектроскопии.
Пример 5. N-Гептаноил-D-гамма-глутамил-глицил-3-аминопропионовая кислота (R, — СН з(СН ) ;
К вЂ” Н и R g — -ИН(СН ) СОЛОН) .
При выполнении процедуры, опн- 35 санной в примере ЗВ, с использованием в качестве исходных продуктов
1,5 r (3,0 ммоль) сложного оксисукцинамидного эфира N-гептаноил-D-гамма-глутамил(альфабензиловый эфир) — 40
-глицина, 350 мг (3,9 ммоль) 3-аминопропионовой кислоты и 0,55 мл (3,9 ммоль) триэтиламина, получено
500 мг (выход 437) целевого продук.та, т.пл. 135-138 С. Соединение оха- 45 рактеризовано с помощью ЯМР-спектроскопии, Пример 6. N-Гептаноил-D-гамма-глутамил-глицил-4-аминомас" ляная кислота (R, — СН (СН ), 50
К, — Н и R — -NH(CÎ,),ÑÎ,Í).
Повторяют процедуру, описанную в примере 6, при замене .3-аминопропионовой кислоты на 410 мг (4,0ммоль)
4-аминомасляной кислоты, в результате чего получено 600 мг (выход
50X) целевого продукта, т.пл. 140142 С. Соединение охарактеризовано с помощью SIMP-спектроскопии.
1507212
Ксан сООЯ(, СН О
I 1I (CHggC0NHCHC-0Н
1 где R u R имеют укаэанные значения, 1 7
R — бензил, 10 в виде сукцинимидного эфира подвергают дегидратирующему взаимодействию с. соединением формулы
15 ( где Х и п имеют указанные значения, 2О с последующим в случае необходимости избирательным удалением защитных групп путем гидрогенолиза над окисью палладия.
Н1СОКН р СОгВ(1
CH (СН г)гСОННСНСОН 3
) мг/кг) Спосое ВФ неанне, г Плацебо, ) введения
Пример
СН (СН
Подконно
CH (СН,),— Н
15 г5
СН,(СН,),- Н
Р
NHCHСОгН
СНгСНЗ нн(сн,),со„н
1ОО ьо го
100 (О
СН (СН,) эо
90 эо
100
1О
СН (СН )3
70 го
6 СН (СН ) — Н
Подконко
100
1О
МН(СНе)еСО„Н Н
1ОО
1О
1 н
1ОО
90 го
1ОО
1О
FK-156 (нееестI ное соединение) зо ьо
60 э
О,1
Подкокно
Я5-CNH P COOH
CH Е О
I H (си,,сожнснс-R >
"г
ГдЕ R1 — C, -Сб-алкил, R — водород;
R — остаток аминокислоты фор3 мулы
-NH — ÑÈ-(СЯ, „СООТГ, Х где Х вЂ” водород, С,-Сг-алкил или оксиметил; n = 0...4, целое число, отличающийся тем, что соединение общей формулы
КНСНСОгН
СНЗ ннсн,со,н
NHCHC01H
СН гОН
7 СН(СН) Н МН(СН) СОН Н
Ь СН (СН е) g- Н НН(СН() асОен Н
1ОО (О
1ОО
1О
1 (ОО
0
Н NCH-(СИ)„СООН, !
1ОО (ОО го (ОО
1ОО зо