Способ определения органоспецифических аутоиммунных процессов

Способ определения органоспецифических аутоиммунных процессов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине и может найти применение в терапии и педиатрии при диагностике хронических заболеваний, сопровождающихся аутоиммунными процессами органоспецифического типа. Цель изобретения - повышение точности способа. Исследуемый тканевой антиген наслаивают на частицы латекса и производят постановку реакции фагоцитоза и НСТ-теста с частицами латекса без антигена и с латексом, нагруженным определенным органоспецифическим антигеном, определяют процент фагоцитоза, фагоцитарное число и НСТ-тест в опытной и контрольной пробах и результаты сопоставляют. При снижении показателей поглощения в опытной пробе в 2 и более раз по сравнению с контрольной наряду с повышением НСТ-теста в опытной пробе в 1,5 раза по сравнению с контрольной диагностируют наличие аутоиммунного процесса к данному органоспецифическому антигену. Точность способа возрастает с 62% до 96%.

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧНИИХ

РЕСПУБЛИК (191 (И) (11 4 G О! И 33/53 госуд Рственный комитет

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР (2 .1) 4294597/28-14 (22) 07,08.87 (46) 15.09,89, Бюл, и 34 (71) Киевский медицинский институт им, акад, А,А,Богомольца (72) В,Г.Бордонос, Н.И.Якуба и

Л.И.Скрипка (53) 615.375 (088.87 (56) Злотницкая Р,П. и Фрадкин В.А, Реакция нейтрофилов периферической крови на печеночный антиген у больных с хроническими заболеваниями печени.

Советская медицина, 1982, !! 3, с.3437, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ OP ГАНОСПЕЦИФИЧЕСКИХ АУТОИК HHbIX ПРОЦЕССОВ (57) Изобретение относится к медицине и может найти применение в терапии и педиатрии при диагностике хроническил заболеваний, сопровождающихся

Изобретение относится к медицине и может найти применение в терапии и педиатрии при диагностике хронических заболеваний, сопровождающихся аутоимунными процессами органоспецифического типа, Цель изобретения — повышение точности способа определения аутоиммунных процессов.

Способ осуществляется следующим образом, этап, Наслоение тканевого антигена на латекс, Инертные частицы латекса размером 1,2 мк в концентрации

10 в соотношении 1:1 смешивают с з аутоиммунными процессами арганоспецифического типа, Цель изобретения повышение точности способа. Исследуемый тканевой антиген наслаивают на частицы латекса и производят постановку реакции фагоцитоэа и НСТ-теста с частицами латекса беэ антигена и с латексом, нагруженным определенным органоспецифическим антигеном, определяют прсцент фагоцитоза, фагоцитарное число и НСТ-тест в опытной и контрольной проблемах и результаты сопоставляют, При снижении показателей поглощения в опытной пробе в 2 и более раэ по. сравнению с контрольной наряду с повышением НСТ-теста в опытной пробе в 1,5 раза по сравнению с контрольной диагностируют наличие аутоимунного прсцесса к данному органо специфическому анти гену. Точность способа возрастает с 62 до 96Х тканевым антигеном, приготовленным по обычной методике. Полученную смесь помещают в испарительное отделение холодильника на 18 ч, после чего центрифугируют при 2000 об/мин в течение

20 мин, надосадочную жидкость снимают.

К осадку, содержащему латекс, нагруженный тканевым антигеном, добавляют физиологический раствор в количестве, равном первоначальному количеству антигена (концентрация латекса с антигеном сохраняется в пределах 10 ), 9

11 этап, Постановка реакции поглощения и НСТ-теста с латексом, нагруженным тканевым антигеном (опытная про3 1508162 беэ антигена, конба) и с латексом тральная про ба), Кровь иэ пальца больного в количестве 0,4 мп собирают в пробирку, содержащую 1 каплю ге пари на, центрифугируют при 1500 аб /мин в течение

1О мин„снимают лейкавэвесь и растворяют ее в 0,2 мл среды Игла. Полученную взвесь по О, 1 мл наносят на пакравные стекла, помещенные в маленькие пластмассовые чашки, добавляют

0,1 мп 17-наго ра).":вора нитросинего тетриэалия, после чего в контрольную пробу вносят 0,05 мп латекса беэ антигена, а в опытную пробу — 0,05 мл латекса, нагруженного тканевым акти-генам, Пробы в закрытых чашечках инкубируют в -ермостате 30 мин, после чего нацосадочную жидкость на покров- 20 ных стеклах сливают, стекла высушивают и фиксируют в парах формалина в течение 15 мин, Докрашивают препараты ядерным красителем (например, l -ным раствором метилового зеленого в 25 течение 7 мин), Пробы оценивают под им-. мерссионным микроскопом, определяя процент нейтрофилов, поглотивших частицы латекса (процент фагоцитоза), и .процент нейтрофило в ) восстановивших нитроси- ЗО ний тгтраэалий в нераствори)ый формаэан (НСТ-тест), Оба показателя определяются на одном и том же препарате как в контрольной., так и в опытной гробе. Латекс при этом служит как фагацитируемым объектом -в реакции поглощения нейтрофилов, так и стимуляторам НСТ-теста, Сопоставляют результаты полученных исследований (працент фагоцитаза и

НСТ-тест) в контрсльной и огытной пробах, достоверным диагностическим критерием считая снижение фагоцитоза в 2 и более раз ниже па сравнению с контрольной наряпу с повышением НСТ) теста в опытной пробе в 1,5 раза выше по сравнению с контролем диагностируют наличие аутоиммунного.)роцесса к данному органоспецифическому антигену, 50

При ме р 1, Больной К., 12лет, Впервые заболел вирусным гепатитом в возрасте !О лет, Поступил в стационар на 7-ой день болезни в состоянии средней тяжести с умеренно выраженной иктеричностью склер, болями в животе, печень выступала из-под реберной дуги на 3 5 см, Билирубин крови 28 5 мг/о, АЛТ-715 ед, АСТ-545 ед, Протромбин с)п)жен до 63% остаточный азот

О, 27 г/л, общий белок 71 г/л „альбумины 33 г/л, глобулины g 3 г/л; К< -8 г/л, 3 -9 г/л, у — 18 г/л, Общий анапиз крови: эрятр, 4 „7 К10 /1 мкл; гемоглобин

Ь

132,5 г/л; лейкоциты 5 „2 10; э -97 *, п-7, с-26% „лимф,, .. 87, м-57, СОЭ

8 мм/ч. Пря многократном исследовании

HH„- антяген обнаружен не был, Эхаграмма, сигналы от границ печени хорошо выражены, на имеют измененную форму, Дапалнител ьные импульсы средней амплитуды правильной формы регистрируются в области ворот печеBH e

Hpè обследовании по известному способу ППН беэ печеночнаго антигена

0,05; IIIIH с печеначным антигеном 0,14.

Обследование по предлагаемому cna= сабу„ В контрольной пробе (при фагоцитоэе латекса беэ антягена) процент фагоцитоэа 477, НСТ-тест 287, а в опытной пробе (при фагоцитозе латекса, нагруженного печеночным антигеном) процент фагоцитаэа 23%, НСТ-тест

421 . Следов ат еп ьно, фагоцит арная активность нейтрафилав при применении латекса„нагруже печеначным антигенам снижапась в 2 раза, тогда как

НСТ-тест стимулирав анный л ате ксом, нагруженным печеночным антигеном, повышался в 1,5 раза, Следовательно, полученные данные входят в диагностические критерии формулы изобретения и свидетельствуют о наличии аутоимунного процесса в отношении печеначного антигена, Поставлен диагноз; хрониче— кий гепатит, Дальнейшее течение заболевания Ioзволило подтвердить установленный диагноз, Лод давлением проведенного лечения, включающего деэинтоксикационную терапию„ предниэалон, витаминные препараты, стимуляторы иммунитета и др,, на 1-й день болезни состояние больного нормализовалось, однако полная нормализации лабораторных показателей наступила только на 68-й день.

С диагностической целью при удовлетворительном самочувствии и удовлетворительных биохимических показателях. г-роизведена пункциональная биопсия, в заключение которой выставлен окончательнь)й диагноз: хронический гепатит умеренно выраженной активности без признаков цирротических изменений. В данном примере диагноз под.=. тверждается совокупностью клинических

5 1508162 б и лабораторных данных, показано также ем, наличия аутоиммуного процесса и совпадение исследования, проведенного позволяет поставить диагноз неспеципо предлагаемому способу с наиболее фическо"o язве1л11ОГО колит а. достоверным методом исследования — гис=

После стиханий острых проявлений тологическим, тогда как при Обследова- язвенного колита с диагностической нии по известному способу положитель- целью ребенку проведено ректоромано1Г1й результат не получ *;, Это подтвер- скопию, при которой выявлено отсек и ждает большую точность заявляемого ме- гиперемию .. слизистой оболочки толтода по сравнению с прототипом, стой кишки, утолщение ее складок, наПример 2, Боль11ой Д„„8 лет., пичие геморрагий, отдельных эрозий, поступил в стационар с жалоб а1ли на боли в ниж отделах 1элвота, преимущественно,. по сле еды и перед актом дефе к ации, Пери оди че с ки От ме чает ся неу;стой-.плвость стула, примесь слизи и крови, При объективном ис,".ледоваТаким образом, в данном примере показаны клинико-лабораторные данные и данные диагностики по предлагаемому способу, Объективносгь диагноза подтверждена методом ректороманоскопии, тогда как при обследовании по известному способу положительного диагностического результата не получено, что подтверждает большую точность предлагаемого способа, 25 для проверки диагностической ценности способа проведено исследование у 20 здоровых лиц и 68 больных различными хроническими э аболеваниями, с о пр 0 E Ожд яющими ся аут Оимму иными про

ЦЕССЯМИ1, нин — выргжены симптомы интоксикации, значительная болезненно ть при пальпации в левой подвоздошной области, сигмонидная кишка спасти:ески уплотнена, болезненна при папьпации, Б общем анализе крови; гемоглобин 80Г/л, лейкоцитов 8,9 10, Э-2, п-8, с — 62, 6 м-9, СОЭ 25. Белковые фракции: общий

Оелок 61 Г/л, альбуминь1 28 Г/л, ГлОбулиновые фракции: с1..— 2Е", 1 -, p — 11, - 1 4., При копро скопин кал Я вЂ” слизь и кровь в умеренном количестве, бактериологическое исследсва1пле — диссбактерио."-. за усиленного роста пятоГенных шт яммов KH1L eч11ОЙ 11ялочки, При обследовании по 11звестном. спообу ППН без анти-eíà 0 CÂ-, IIiIH с янтигеном кишечника 0...18.

Обследование по изобретению проведенО в двя этап= ; . Й " наслоение ян тигена кишечника на лятекс; I: — é постановка фягоцитар11ых р=.àêöèé с лятексом без антиггна и с латексом, на- @ груженнь1м антигеном кишечни <а, Полученъ1 следую1шле результаты: поглотительная способность нейтрофилов при неспецифическом (без антигена кишечника) фагоцитозе 527, НСТ-тест, стимулированный лятексом, не нагруженным антигеном к:-ш:ечника, 32/, При специфическом латексфагоците (с uc oîëüçованием латекса, нагруженного

\ нише ч1 1м airwH r e»@1 . j проце -1т фа 1.оцитоз а 26/ НСТ-т е с1 ч57, Следов Ятельпо, Оглотительная способность при псстановке реакции специфического латексфагоцитоэа уменьшилась в 2 раза, в то время как НГТ.-тeñò, стимулирован1ъ1й латексом, нагруженным кишечным

Янтигеном, повэ1сился в 1,5 раза, что является с аглае;..О формуле изобретения достоверным ди: гностическчм критериДля повышения точности способа в фориулу изобретения включены пограничные значения велич1лн, характеризукицих снижен11е поглотительной H повышение НСТ-восстанавливающей способности при специфическом фагоцитозе частиц латекс, нагруженных соответствующим ткяневым антигеном по сравнению с неспецифическим фагоцитозом (при применении и в качестве фагоцитируемого объекта частиц латекса беэ антигена), На высокую достоверность дан1ых указывает отсутствие разницы показателей поглотительной и HCT-восстанавливающей способности при постановке неспецифического и специфического (с различными тканевыми антигена151) фагоцитоза у здоровых лиц (р (0,05), В то же время высокая достоверность различия результатов (рС

0,001) при постановке чеспецифического и специфического (с латексом, нагруженным соответствующим тканевым антигеном) фагоцитоза у больных хроническими заболеваниями, сопровождающимися аутоиммунными процессами, под- тверждает высокую диагностическую ценность предлагаемого способа.

1508162

Високая специфичность и связанная с ней большая точность диагностики заявляемого способа по сравнению с прототипом обусловлена тем, что регистрацию специфических аутоиммунных процессов проводят не на морфологическом, а на функциональном уровне, Составитель И,Башкаев

Техред М.Моргентал

Корректор Т ., Малец

Редактор М,Келемеш

Заказ 5536/48 Тираж 789 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 101

Точность диагностики у обследуемых больных по изобретению составила 96%, тогда как положительные результаты при использовании известного способа; получены только у 62% случаев, Обладал широкой информативностью, высокой специфичностью и точностью диагностики при технической доступности, быстроте выполнения и незначительном объеме крови, требуемой для ис- 20 следования, способ может найти широкое применение в приктическом здравоохранении, Формула изобретеним

Способ определения органоспецифических аутоиммунных процессов путем выявления сенсибилизации нейтрофильных гранулоцитов к тканевым антигенам п чего, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа выявление сенсибилиэации нейтрофильных гранулоцитов осуществляют с помощью НСТ-теста и реакции фагоцитоза, при этом тканевый антиген адсор=. бируют на частицах латекса, далее вычисляют фагоцитарное число, процент фагоцитирирующих клеток, процент нейтрафилов, содержащих формазан, и при снижении показателей процента фагитирующих клеток и фагоцитарного числа в два и более раэ и повышении формазан — содержащих нейтрофилов в 1,1 раза по сравнению с контрольной пробой, не.содержащей антигена, опреде" ляют наличие аутоиммунного процесса,