Способ выделения тиреоглобулина

Способ выделения тиреоглобулина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биохимии и медицине, конкретно к производству радиоиммунологических диагностических наборов . Цель - упрощение способа за счет сокращения стадий. Способ заключается в экстракции тиреоглобулина из ткани щитовидной железы человека хлоридом натрия и последующей ионообменной хроматографии экстракта на АНР (аминогидроксипропил)-сефарозе с элюцией тиреоглобулина ступенчатым градиентом концентрации хлорида натрия 0,15-0,2 М в 0,01 М натрий-фосфатном буфере. Полученный по данному способу тиреоглобулин может использоваться в качестве антигена для получения высокоспецифической антисыворотки, для приготовления стандартных растворов и меченного радиоактивными изотопами тиреоглобулина .

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 д 61 К 35/55

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛ ЬСТВУ (21) 4323960/14 (22) 30.10.87 (46) 23.10,91, Бюл, N 39 (71) Институт биоорганической химии

АН БССР (72) А,И.Щербань, Л.В,Лукашевич, С.И.Марчук, В,Л.Чащин и И.И.Бовдей (53) 612.015(088.8) (56) СИп,Chim.Acta, v,95, N 2, 1979, р, 325336. (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ТИРЕОГЛОБУЛИНД (57) Изобретение относится к биохимии и медицине, конкретно к производству радиоиMìóнологических диагностических наИзобретение относится к биохимии и медицине, в частности к выделению тиреоглобулина, который может быть использован в качестве компонента диагностических наборов для определения тиреоглобулина в сыворотке крови человека, Цель изобретения — упрощение способа выделения тиреоглобулина.

Способ осуществляется следующим образом, Экстракт щитовидной железы подвергается ионообменной хроматографии на аминогидроксипропил-сефарозе с элюцией тиреоглобулина ступенчатым градиентом концентрации хлорида натрия в натрийфосфатном буфере. Выход гомогенного тиреоглобулина по отношению к содержанию его в экстракте составляет 20 — 30%.

Пример. Экстракция тиреоглобулина.

„„, Ж„„1510139 А1 боров. Цель — упрощение способа за счет сокращения стадий, Способ заключается в экстракции тиреоглобулина из ткани щито.видной железы человека хлоридом натрия и последующей ионообмен ной хроматографии экстракта íà АНР (аминогидроксипропил)-сефарозе с элюцией тиреоглобулина ступенчатым градиентом концентрации хлорида натрия 0,15 — 0,2 M в 0,01 M натрий-фосфатном буфере. Полученный по данному способу тиреоглобулин может использоваться в качестве антигена для получения высокоспецифической антисыворотки, для приготовления стандартных растворов и меченного радиоактивными изотопами тиреоглобулина.

10 r ткани щитовидной железы человека измельчают и гомогенизируют s 20 мл

0,01 M натрий-фосфатного буфера (рН 7,4), содержащего 0,15 M NaCI, 0,02% йайз, в течение 5 мин с минутным перерывом в ножевом гомогенизаторе при 2000 об/мин при

2 — 8 С. Полученный гомогенат фильтруют через 2 слоя марли и перемешивают на магнитной мешалке s течение 35 мин при 2—

8 С. Затем гомогенат центрифугируют при

30000 g в течение 30 мин при температуре ротора 2 — 8 С. Надосадочную жидкость (экстракт) осторожно сливают и используют для выделения тиреоглобулина. Объем полученного экстракта составляет 20 мл, Ионообменная хроматография íà АНРсефарозе.

Экстракт наносят на колонку (2,5х20 см) с AHP-сефарозой, уравновешенную 0,01 M натрий-фосфатным буфером (рН 7,4), содер1510139

Составитель Н.Литвиненко

Редактор Н.Козлова . Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор B.Гирняк

Заказ 4595 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101 жащим 0,15 М NaCI. 0,02 йайэ, со скоростью 50 мл/ч. Колонку промывают 2 л этого же буфера со скоростью 50 мл/ч, Элюцию тиреоглобулина осуществляют 0,2 M NaCI в

0,01 M натрий-фосфатном буфере (рН 7,4), содержащем 0,02 йайэ, со скоростью

20 мл/ч. Объединенную фракцию (80 мл), содержащую тиреоглобулин, дивлизируют против 0,005 М трис-H CI (рН 7,4) и лиофилизируют.

Количество выделенного тиреоглобулина (концентрацию тиреоглобулина определяли спектрофотометрически, используя для расчетов значение коэффи1ж,. циента поглощения равное Агвонм "= 10, а также с помощью коммерческого набора

SB-HTG фирмы "CIS 1птегпабопаГ составляет 300 мг или 25 (, от содержания его в экстракте.

При хранении в лиофилизованном состоянии при -20 С препарат тиреоглобулина сохраняет физико-химические и иммунологические свойства в течение не менее 1,5 лет.

Предлагаемый способ в отличие от прототипа позволяет упростить процесс выделения тиреоглобулина эа счет сокращения стадий. Способ гарантирует выделение ro5 могенного, стабильного препарата тиреоглобулина в препаративных количествах с ( хорошей воспроизводимостью, что делает возможным серийный выпуск диагностических наборов для определения тиреоглобу10 лина в сыворотке крови человека, основным компонентом которых является тиреоглобулин.

Формула изобретения

15 Способ выделения тиреоглобулина, включающий иэмельчение щитовидной железы человека, экстракцию хлоридом на- трия, центрифугирование, ионообменную хроматографию, отличающийся тем, 20 что, с целью упрощения способа за счет сокращения количества стадий, непосредственно после центрифугирования проводят ионообменную хроматографию надосадочной жидкости на аминогидроксипропил-сефарозе.