Способ определения окисления и ферментации глюкозы грамотрицательными микроорганизмами

Способ определения окисления и ферментации глюкозы грамотрицательными микроорганизмами

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для идентификации бактерий при бактериологических исследованиях. Цель изобретения - ускорение способа. Способ осуществляют параллельно в двух средах, при этом среда для определения ферментации глюкозы содержит 0,2 л фосфатного буфера рН 7,6

10-30г Д-глюкозы

4-6г хлористого натрия

0,012-0,016г фенолового красного и дистиллированную воду до 1 л. В среду для определения окисления глюкозы дополнительно вводят 0,1-0,7% пероксида водорода. Исследуемые организмы вносят в обе среды и инкубируют 60-80 мин. При изменении красного цвета сред на желтый определяют ферментацию глюкозы, а при изменении цвета и наличии газообразования только в среде с пероксидом водорода определяют окисление глюкозы.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1518374 А 1 (sg 4 С 12 Q 1/04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВтоеСкому СвидЬтельСтвм ют при 120 С 30 мин. Буферная основа среды имеет красную окраску.

В стерильную буферную среду добав- Ql ляют 3 r порошка Д-глюкозы и переме" в шивают. Среда готова к использованию (ф для определения ферментации глюкозы. фф

Для получения среды, необходимой для определения окисления глюкозы, к р„ описанной среде добавляют 0,7Х пероксида водорода. Исследуемую агаровую культуру грамотрицательных бактерий вносят по одной полной петле в две лунки планшета, содержащее по 0,1 мл,Ь питательных сред. В одной лунке находится среда для ферментации глюко зы, содержащая ЗХ Д-глюкозы в буферной основе, в другой — среда для окисления глюкозы, содержащая 3Z Дглюкозы и 0,7Х перекиси водорода в

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4381153/40-13 (22) 22.02.88 (46) 30.10.89. Бюл. Р 40 (72) Е.П.Сиволодский (53) 576.8.093.33 (088.8) (56) Знтеробактерии. Руководство для врачей /Под ред. В.И.Покровского, М. . Мед., 1985, с. 42-43, 297-298. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОКИСЛЕНИЯ И

ФЕРМЕНТАЦИИ ГЛ10КОЗЪ| ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫМИ МИКРООРГАНИЗМАМИ (57) Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для идентификации бактерий при бактериологических исследованиях. Цель изобретения — ускорение способа.Способ осуществляют параллельно в двух

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для идентификации бактерий при бактериологических исследованиях.

Цель изобретения — ускорение способа.

Пример 1. Приготовление питательных сред.

К 170 мл раствора, содержащего

11,876 г/л Na HPOq. 17Hq0, добавляют

30 мл раствора, содержащего 9,078 г/л

КН>РО1, устанавливают рН 7,6. К

200 мл буферного раствора добавляют

6 r хлористого натрия, 4 мл 0,4Х-ного водно-щелочного раствора фенолового красного, (0,016 г сухого вещества), дистиллированную воду до 1 л, рН среды 7,6. Полученный раствор pasливают в колбы по 100 мл, стеркпизу2 средах, при этом среда для определения ферментации глюкозы содержит

0,2 л фосфатного буфера рН 7 61

10-30 г Д-глюкозы; 4-6 r хлористого натрия; 0,012-0,016 r фенолового красного и дистиллированную воду до 1 л. В среду для определения окисления глюкозы дополнительно вводят О, 1 — 0,7Х пероксида водорода. Исследуемые организмы вносят в обе среды и инкубируют 60-80 мин. При изменении красного цвета сред на желтый определяют ферментацию глюкозы, а при изменении цвета и наличии газообразования только в среде с пероксидом водо- I роца определяют окисление глюкозы.

1518374 буферной основе. Культуры перемешивают, планшет помещают в термостат при

37 С на 60 мин, после чего учитывают результаты. В лунке со средой для ферментации глюкозы сохраняется исходная красная окраска, а в лунке со средой для окисления глюкозы имеются пузырьки газа и исходная красная окраска. Результаты указывают на то, Jp что по OF-тесту исследуемые бактерии относятся к группе неферментирукнщих и неокисляющих глюкозу бактерий.

Пример 2. Готовят среды в соответствии с примером 1, но компо- 15 ненты берут в следующих соотношениях:

Фосфатный буфер 0,2 л

Д-глюкоза J0 г

Хлористый натрий 4 г

Феноловый красный 0,012 г 20

Дистиллированная вода До 1л

В среду для определения окисления добавляют 0 1Х пероксида водорода.

Исследуемую агаровую культуру грамотрицательных бактерий вносят по одной полной петле в две лунки планшета, содержащие по 0,1 мл питательных сред. В одной лунке находится . еда для ферментации глюкозы,содержащая 1Х Д-глюкозы в буферной основе, в другой — среда для окисления глюкозы, содержащая 1Х Д-глюкозы и 0,1Х перекиси водорода в буферной основе.

Культуры перемешивают, планшет помещают в термостат при 37 С на 60 мин, после чего учитывают результаты. В лунке со средой для ферментации глюкозы исходный красный цвет изменился в желтый, в лунке со средой для окисления глюкозы среда имеет пузырьки газа и желтую окраску. Результаты указывают на то, что по OF-тесту исследуемые бактерии относятся к груп- 45 пе ферментирующих глюкозу бактерий.

Пример 3. Готовят среды в соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующем соотношении:

Фосфатный буфер 0,2 л

Д- глюко з а 20 r

Хлористый натрий 5 r

Феноловый красный 0,014 г

Дистиллированная вода .До1л

В среду для определения окисления глюкозы дополнительно вводят 0,5Х пероксида водорода.

Исследуемую агаровую культуру рамотрицательных бактерий вносят по одной полной петле в две лунки планшета, содержащего по 0,1 мл питательных сред, В одной лунке находится среда для ферментации глюкозы,содержащая 2Х Д-глюкозы в буферной основе, в другой — среда для окисления глюкозы, содержащая 2Х Д-глюкозы и

0,5Х перекиси водорода в буферной основе. Культуры перемешивают, планшет о помещают в термостат при 37 С на

60 мин, после чего учитывают результаты. В лунке со средой для ферментации глюкозы сохранилась исходная красная окраска среды, а в лунке со средой для окисления глюкозы имеются пузырьки газа и желтая окраска.

Результаты свидетельствуют о том,что по OF-тесту исследуемые бактерии относятся к группе окисляющих (но неферментирующих) глюкозу бактерий.

Результаты определения OF-теста по данному способу показывают, что все фермеитирующие глюкозу штаммы бактерий (энтеробактерии, вибрионы) завершают ее ферментацию в сроки 20

50 мин, все окисляющие глюкозу штаммы (псевдомонас, ацинетобактер и другие) завершают ее окисление в сроки 10-80 мин, при этом в течение до 60 мин — 95,84 2 1,83Х бактерий

Pseudomonas aeruginosa и 100Х штаммов прочих видов, а в течение 80 мин

100Х штаммов всех видов. В эти же сроки все штаммы неферментирующих и неокисляющих глюкозу бактерий дают четкие отрицательные результаты.Сопоставление результатов определения

OF-теста по данному способу и способу-прототипу Хью-Лейфсона.показывает полное совпадение результатов у всех штаммов, но результаты получают в более короткий промежуток времени.

Формула изобретения

Способ определения окисления и ферментации глюкозы грамотрицательными микроорганизмами путем посева исследуемого микроорганизма параллельно в две среды, содержащей фосфатный буфер, хлористый натрий, Д-глюкозу, индикатор и дистиллированную воду, с последующим инкубированием посевов и оценкой результатов по изменению окраски сред, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, 0,2 л

10-30 г

4-6 г 10

0,012—

0,016 г

Составитель Г,Смирнова

Редактор М.Петрова Техред М.Ходанич Корректор М.Максимишинец

Заказ 6568/31 Тираж 501 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101

5 1518374.

6 инкубирование проводят в течение 60— Дистиллированная

80 мин, при этом ферментацию глюкозы вода До 1л определяют на среде, содержащей в ка- окисление глюкозы определяют на той честве индикатора феноловый красный . же среде в присутствии пероксида вопри следующем количественном соотно- дорода в концентрации 0,1-0 7Х к шенин компонентов: объему среды и при изменении цвета

Фосфатнъй буфер рН 7,6 сред на желтый определяют ферментацию

Д-глюкоза глюкозы, а при изменении цвета и налиХлористый натрий чии газообразования только в среде, Феноловый красный содержащей пероксид водорода,определяют окисление глюкозы.